2. Câc phương phâp trích li tră vă yếu tố ảnh hưởng: 1 Kĩ thuật trích li dùng enzim: [33]
2.2.2.3.1. Trích li câc hợp chất EGC vă EGCG bằng phương phâp trích li hai lần:
hai lần:
Một số loại thực phẩm không nhằm cung cấp chất dinh dưỡng mă được sử dụng như lă một tâc nhđn phòng chống bệnh tật. Một trong những hợp chất giúp cho người sử dụng có thể chống lại những bệnh nguy hiểm đó lă câc nhóm catechin. Catechin chiếm tới 20-30% thănh phần câc chất trong lâ tră. Thănh phần chính của catechin tră gồm: epigallocatechin gallate (EGCG), epigalocatechin (EGC), epicatechin gallate (ECG), epicatechin (EC).
EGCG lă thănh phần quan trọng của catechin tră vì hăm lượng của nó trong tră rất cao vă nó có khả năng ngăn ngừa bệnh tốt. Vì vậy người ta đê vă đang nghiín cứu phương phâp trích ly tră để thu được hăm lượng EGCG cao.
Có thể chia catechin thănh 2 nhóm: nhóm có khả năng hoă tan chỉ phụ thuộc văo thời gian (EGC vă EC) vă nhóm phụ thuộc văo cả thời gian vă nhiệt độ (C, EGCG, GCG vă ECG). Labbĩ et al đê tiến hănh thí nghiệm vă quan sât được ở giai đoạn ngđm thứ nhất với nhiệt độ 50oC trong 10 phút ta có thể trích ly được phần lớn lă EGC; trong khi ở giai đoạn thứ hai với nhiệt độ cao hơn thì thu được phần lớn lă EGCG. Dịch trích ly thu được vẫn có đầy đủ câc loại catechin vă cafein nhưng trong đó thănh phần của EGC vă EGCG chiếm tỷ lệ rất cao.
Mục đích của nghiín cứu năy lă khảo sât quâ trình trích ly EGC vă EGCG qua hai giai đoạn.
– Tiến trình thực hiện:
20gam tră xanh được ngđm trong 1000 ml nước cất 2 lần để hoă tan catechin (tỷ lệ tră:nước lă1:20 w/v) . Quâ trình ngđm thứ nhất được diễn ra ở 500C trong 10 phút. Sau đó tră xanh được vớt ra vă vắt nhẹ để loại một phần nước. Tiếp theo nó được ngđm trong 1000ml nước cất 2 lần nhưng ở nhiệt độ cao hơn 80oC. Quâ trình trích ly 2 bước năy được lặp lại 3 lần vă dịch trích được lấy ra sau mỗi 10 phút. Lấy 1.5ml dịch trích đem phđn tích HPLC.
– Kết quả:
xanh
Theo kết quả phđn tích HPLC, sau quâ trình trích ly thứ nhất EGC chiếm 78.9% tổng lượng catechin có trong dịch trích, trong khi sau quâ trình thứ hai, nó chỉ chiếm 39.5%( bảng 4). Ngược lại , sau quâ trình trích ly thứ hai, EGCG chiếm 47.6% tổng lượng catechin có trong dịch trích. Trong khi lượng năy trong dịch trích thứ nhất có 10.8%. nồng độ C vă EC tương đối ổn định , chiếm 0.55 vă 7.25 % tổng lượng catechin. GCG, ECG thì hầu như không phât hiện trong dịch trích thứ nhất, còn trong dịch trích thứ hai tỷ lệ của chúng tương ứng lă 2.6vă 4.7%.
Hình 5.5: Kết quả phđn tích câc hợp chất trong dịch trích sau quâ trình đầu
tiín ở 50oC trong 10 phút.
Hình 5.6: Kết quả phđn tích câc hợp chất trong dịch trích sau quâ trình thứ hai
xanh
Bảng 6.4: Nồng độ của catechin vă caffeine sau quâ trình trích li thứ nhất vă thứ hai
• Thănh phần dịch trích
Như đê biết trong phần trước, thănh phần dịch trích không giống nhau sau 2 lần trích ly (bảng 5) .Trong lần trích ly thứ nhất lượng catechin chiếm 37.5% tổng chất khô dịch trích vă nồng độ năy tăng lín 52.8% trong lần trích thứ hai. Hăm lượng cafein tăng từ 6.6% lín 10.5% qua hai lần trích. EGC chiếm 29.5% tổng lượng chất khô trong lần trích thứ nhất vă tăng lín 21% trong lần trích thứ hai. Hăm lượng EGCg tăng từ 4% lín 25%. Như vậy theo kết quả của nghiín cứu năy thì chỉ có thể trích ly câc hợp chất gallated phenolic trong lần trích ly thứ hai trong khi câc hợp chất non-gallated phenolic thì có thể trích ly được trong cả hai lần trích
Quâ trình trích li thứ nhất
Quâ trình trích li thứ hai
Total solid content (%) 96.42 ± 0.22 98.04 ± 0.31
Ashes (% dry basis) 9.76 ± 0.19 5.88 ± 0.30
EGC (mg/g extract on dry basis) 295 ± 26 208 ± 8 C (mg/g extract on dry basis) 2.4 ± 0.1 2.3 ± 0.3 EC (mg/g extract on dry basis) 35.2 ± 1.9 26.7 ± 1.5
Quâ trình trích li thứ nhất Quâ trình trích li thứ hai
EGC 1122.2 ± 98.6 417.8 ± 15.4 C 8.82 ± 0.47 4.56 ± 0.55 EC 133.7 ± 7.1 53.5 ± 3.0 EGCG 153.7 ± 40.1 503.0 ± 47.2 GCG n/da 28.0 ± 2.0 ECG 3.99 ± 0.01 50.1 ± 7.6 Caffein 252.0 ± 12.3 209.7 ± 9.9
xanh
Quâ trình trích li thứ nhất
Quâ trình trích li thứ hai
EGCG mg/g extract on dry basis) 40.5 ± 10.6 251 ± 24 GCG (mg/g extract on dry basis) n/da 14.0 ± 1.0 ECG (mg/g extract on dry basis) 1.1 ± 0.1 25.0 ± 3.8 Caffein (mg/g extract on dry basis) 66.3 ± 3.2 105.0 ± 4.9
Bảng 6.5: Hăm lượng caffeine vă catechin trong dịch trích khô
Kết quả nghiín cứu năy cho thấy ta có thể trích ly chọn lọc EGC vă EGCG từ tră xanh. Khả năng hoă tan khâc nhau phụ thuộc văo nhiệt độ của 2 loại catechin trín cho phĩp chúng ta sản xuất dịch chiết giău EGCG trong quâ trình trích ly thứ hai. Lựơng EGCg thu được trong quâ trình trích ly thứ hai chiếm 78% tổng lượng EGCg trong cả hai lần trích .
Tỷ lệ catechin có thể tăng lín nhờ quâ trình khử khoâng bằng thẩm tích hoặc thẩm tích bằng điện. Việc thu nhận EGCG với hăm lượng cao giúp con người có thể chế tạo ra câc loại thực phẩm giúp phòng chống lại bệnh ung thư.