2. Câc phương phâp trích li tră vă yếu tố ảnh hưởng: 1 Kĩ thuật trích li dùng enzim: [33]
2.2. Kĩ thuật trích li dùng dung môi: 1 Dung môi hữu cơ:
2.2.1 Dung môi hữu cơ:
Câc thông số như loại dung môi trích li, nhiệt độ trích li, thời gian , pH, tỉ lệ giữa dung môi vă nguyín liệu có những ảnh hưởng khâc nhau lín hiệu suất trích li vă độ tinh khiết của dịch chiết. Trong đề tăi nghiín cứu của trường đại học Maribor về trích li những hợp chất có lợi trong tră, câc chuyín gia đê khảo sât sự ảnh hưởng của câc loại dung môi khâc nhau (nước, acetone, methanol, ethanol, acetonitrile), dung môi hỗn hợp (25, 50, 80%V), nhiệt độ trích li khâc nhau ( 70 – 100 0C) vă thời gian lín hiệu suất trích li catechin vă caffeine.
Tră xanh nguyín liệu được sử dụng trong nghiín cứu gồm những thănh phần chính được cho trong bảng sau:
Bảng 5.1: Hăm lượng caffeine, catechin vă flavonol trong tră tươi nguyín liệu Thănh phần chính trong tră xanh nguyín liệu lă catechin vă caffein với lượng tương ứng trong 1 kg nguyín liệu lă 191 g vă 36g. EGCG chiếm 67.5% tổng lượng catechin có trong tră xanh.
Trong 2 giờ, 20g lâ tră được trộn lẫn với 400ml câc loại dung môi như sau: acetone(25%, 50%, 80%,100%), methanol (25%, 50%, 80%, 100%), ethanol(25%, 50%, 80%, 90%, 96%, 100%), acetonitrile(50%, 100%) vă nước.
xanh
Bảng 5.2: Hăm lượng câc chất chiết trong tră trích li ở những điều kiện dung môi khâc nhau.
Hiệu suất trích ly được tính toân dựa trín lượng chất có trong nguyín liệu ban đầu vă lượng chất có trong dịch trích thu được. Hiệu suất trích ly nói chung văo khoảng 28-36%, trừ trường hợp sử dụng acetone nguyín chất vă acetonitrile nguyín chất giâ trị năy chỉ văo khoảng 3%. Hiệu suất trích ly đối với cả cafein vă catechin đều đạt giâ trị thấp nhất khi sử dụng dung môi lă acetone nguyín chất vă acetonitrile nguyín chất. Khi sử dụng dung môi hỗn hợp nước vă methanol vói câc giâ trị khâc nhau thì hiệu suất trích ly đối với catechin có giâ trị trung bình khoảng 80%, giâ trị năy tăng lín 95% khi ta thay methanol băng acetone. Hiệu suất năy có giâ trị cao nhất lă 99.8% khi sử dụng dung môi với 50% acetone. Hiệu suất trích ly đối với cafein văo khoảng 56-75%, ngoại trừ trường hợp sử dụng dung môi lă acetone nguyín chất vă acetonitrile nguyín chất. Khi sử dụng nước lăm dung môi ở nhiệt độ 85oC, hiệu suất trích ly đối với cả cafein vă catechin văo khoảng 61-64%.
xanh
Hình 5.1: Hăm lượng catechin trong dịch trích khô ứng với từng loại dung môi trích li khâc nhau.
Hăm lượng một số catechin quan trọng (EC, ECG, EGC, EGCG) có trong dịch trích được thể hiện trong hình 1. Ta thấy dịch trích thu được với dung môi lă nước tinh khiết ở 85oC chứa khoảng 385g catechin, con số năy tăng lín xấp xỉ 560-580g khi thay 1 phần nước bằng câc dung môi khâc. Khi tăng tỷ lệ nước trong hỗn hợp của nước với methanol vă ethanol thì lượng catechin thu được lại giảm. Lượng catechin thu được trong dịch trích đạt giâ trị cao nhất khi sử dụng dung môi nguyín chất. Không giống như methanol vă ethanol, aceton nguyín chất không phải lă dung môi thích hợp để trích ly catechin ( chỉ có 272g/ kg dịch trích khô) . EGCG chiếm tới 57-68% tổng catechin trong dịch trích vă được xem lă chất quan trọng nhất trong nhóm câc hợp chất catechin.
Lượng proanthocyanidin vă flavonods trong dịch trích dao động trong khoảng 13.4-19g proanthocyanidin/ kg dịch trích khô vă 5.8-19.8 g flavonods /kg dịch trích khô. Giâ trị cao nhất đạt được khi sử dụng dung môi lă nước ở 85oC, 50% aceton vă 80%ø ethanol. Trích ly bằng nước được nghiín cứu ở nhiệt độ 70 vă 100oC, lượng catechin trong dịch trích thu được giản tương ứng lă 430g/kg vă 237g/kg. Ngoăi ra lượng catechin trong dịch trích giảm khi nhiệt độ nước lă 100oC; lượng proanthocyanidin vă flavonods cũng thấp hơn khi nhiệt độ lă 70oC vă 85oC ( chỉ có 12g proanthocyanidin/ kg dịch trích khô vă 11.4 gflavonods/ kg dịch trích khô). Khi nhiệt độ cao hơn 100oC thì một nửa lượng catechin bị phđn hủy cùng với flavonods.