KẾT LUẬN
Sau quá trình thực nghiệm, chúng tôi rút ra một số kết luận sau: 1. Đã xây dựng được phương pháp định tính, định lượng đồng thời các thành phần hoạt chất Glycyrrhizin; Glycin; L-Cystein trong chế phẩm thuốc tiêm CGI bằng phương pháp LC-MS/MS. Điều kiện cụ thể như sau:
Điều kiện sắc ký:
Cột: C18 (100 x 2 mm; 1,8 µm); nhiệt độ cột: nhiệt độ phòng;
Pha động: Hỗn hợp Acetonitril : dung dịch Đệm Amoni acetat 5,0 mM pH = 3,0 (35:65);
Tốc độ dòng: 0,3 ml/phút; Thể tích tiêm: 10 µl;
Nhiệt độ Autosampler: nhiệt độ phòng.
Phát hiện chế độ MRM với các thông số:
Chất phân tích Cone Voltage (V) Năng lượng bắn phá (V) Chế độ
ion hóa Mảnh mẹ Mảnh con
Glycin 16 22 ESI+ 76,32 29,83
Glycyrrhizin 26 32 ESI+ 840,46 453,25
Cystein 24 20 ESI+ 121,83 58,88
Chuẩn bị mẫu.
Dung dịch mẫu chuẩn: dung dịch chuẩn hỗn hợp trong pha động với các nồng độ: Glycyrrhizin 2 µg/ml; Glycin 20 µg/ml; Cystein 1 µg/ml.
Dung dịch mẫu thử: Lấy thuốc của 5 ống, trộn đều. Hút chính xác 2,0 ml dung dịch chế phẩm, pha loãng bằng nước cất vừa đủ 100 ml. Lắc đều. Hút chính xác 1,0 ml dung dịch trên, pha loãng bằng pha động vừa đủ 20 ml. Lọc qua màng lọc 0,2 µm.
53
Đánh giá kết quả định tính, định lượng.
+ Định tính: so sánh thời gian lưu, mảnh khối chất phân tích trong sắc ký đồ/ phổ đồ của dung dịch thử với dung dịch mẫu chuẩn.
+ Định lượng: dưa vào diện tích pic của chất phân tích trong sắc ký đồ dung dịch chuẩn, dung dịch thử, nồng độ chất phân tích trong mẫu chuẩn, thể tích và độ pha loãng của dung dịch chế phẩm tính hàm lượng % từng hoạt chất so với hàm lượng ghi trên nhãn.
2. Đã thẩm định phương pháp đầy đủ theo hướng dẫn thẩm định quy trình phân tích của Asean và quy định của Bộ Y tế. Kết quả thẩm định cho thấy: Phương pháp đã xây dựng có độ chọn lọc cao với các thành phần hoạt chất, không bị ảnh hưởng của nền mẫu; khoảng tuyến tính rộng từ 50% đến 150% nồng độ định lượng với hệ số tương quan tuyến tính r > 0,997 đối với cả ba chất; độ lặp lại tốt với giá trị CV nhỏ (dưới 2%); độ đúng cao (giá trị trung bình của độ tìm lại 98,70 đến 99,08%); dung dịch mẫu đã chuẩn bị ổn định ở nhiệt độ phòng trong vòng 24 giờ.
KIẾN NGHỊ
Sau khi thực hiện đề tài với những kết quả nghiên cứu thu được, chúng tôi có một số kiến nghị sau:
+ Áp dụng phương pháp định tính, định lượng các thành phần hoạt chất trong chế phẩm thuốc nói trên để xây dựng tiêu chuẩn chất lượng đăng ký sản xuất, lưu thông tại Việt Nam.
+ Kỹ thuật LC-MS/MS là một kỹ thuật tiên tiến, hiện đại có những ưu điểm vượt trội về độ nhạy, độ chọn lọc, thời gian phân tích ngăn. Do vậy phương pháp này cần được cân nhắc xây dựng trong các chuyên luận Dược điển trong các lần xuất bản tiếp theo.