- Nhuộm vỏ nhầy (Capsule): Phương pháp nhuộm âm bản, phương pháp Đỏ Congo và Phương pháp dùng Tím kết tinh (Crystal violet)
Chương 5: KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ
Kết quả phân lập
38 chủng có hình thái khuẩn lạc đồng nhất có khả năng là vi khuẩn lactic được phân lập từ các nguồn như nem chua, sữa chua, sữa chua men sống và phân của trẻ sơ sinh.
Kết quả định danh
23 chủng trong 38 chủng phân lập ban đầu được xác định là vi khuẩn lên men lactic, cụ thể như sau:
+ 20 chủng dạng trực khuẩn (rod) gồm: 19 chủng thuộc Lactobacillus và 1 chủng
(E1) phân lập từ phân của trẻ sơ sinh có nhiều khả năng là Bifidobacterium đồng hình. Trong 20 chủng Lactobacillus có :
10/19 chủng là Lactobacillus đồng hình gồm: chủng Na2, Na8 từ nem; chủng Y1, B1 và P1 từ sản phẩm sữa lên men; chủng E2, E4, E6, E8 và E10 là từ phân trẻ sơ sinh. Chủng Y1 thuộc giống Lactobacillus đồng hình được đề xuất thuộc loài Lactobacillus casei .
9/19 chủng là Lactobacillus dị hình gồm: chủng Na3, Na4, Nb3 và Nb8 từ nem;
chủng L1, L2, B2 và P2 từ sản phẩm sữa lên men; chủng E3 từ phân trẻ của sơ sinh. + 2 chủng (Na5 và Nb5) có dạng cầu khuẩn (cocci) và 1 chủng (Nb11) có hình oval đều được phân lập từ nem. Trong đó: chủng Na5 thuộc giống Streptococcus dị hình, còn chủng Nb5 thuộc giống Lactococcus dị hình và Nb11 có thể là thuộc giống Leuconostoc.
Khả năng kháng khuẩn của 23 chủng được xác định bằng phương pháp đo độ đục (turbidimetric method), 23 chủng đều có khả năng kháng vi sinh vật chỉ thị E. coli và Salmonella. Tính kháng của các chủng này chủ yếu là do acid hữu cơ sinh ra và hoàn
SVTH: Dương Thúy Vy 109
Từ đó đề xuất được 10 chủng có khả năng kháng E.coli và Salmonella mạnh nhất (trên 90%) là có có hoạt tính probiotic, trong đó có:
+ 1 chủng phân lập từ nem : Na8
+ 2 chủng phân lập từ sản phẩm sữa lên men : Y1 và B1
+ 7 chủng phân lập từ phân trẻ sơ sinh : E1, E2,E3, E4, E6, E8 và E10
Đặc biệt là 2 chủng Na8 và E2 cho khả năng ức chế 100% E. coli và Salmonella Ngoài ra chủng Nb8 được đánh giá là có khả năng sinh acid thấp nhất và sinh bacteriocin cao nhất (làm ức chế trên 50% E. coli)
3 chủng Na8, E2 và Y1 được xem là probiotic được xác định có khả năng chịu được acid và muối mật, trong đó chủng Na8 và E2 mạnh hơn chủng Y1 về khả năng chịu acid, muối mật và cả hoạt tính kháng khuẩn.
Từ các kết quả thu nhận được cùng với những hạn chế trong đề tài em có một số kiến nghị như sau:
- Tiến hành kiểm tra thêm một số dặc điểm sinh lý, sinh hóa của các chủng vi khuẩn để kết quả định danh cụ thể và chính xác hơn.
- Thử nghiệm khả năng chịu acid và muối mật của các chủng vi khuẩn theo đúng thời gian tiêu hóa thức ăn trong dạ dày là từ khoảng 15 phút đến 3 giờ.
- Tiếp tục phân lập ra các chủng vi khuẩn lactic từ các nguồn khác, hoặc bằng phương pháp đầy đủ khoa học và tốn ít thời gian hơn như sử dụng bộ KIT API có sẵn để định danh các chủng vi khuẩn đến cấp loài. Mục đích nhằm bổ sung thêm vào bộ sưu tập giống và cơ hội tìm ra chủng có hoạt tính mạnh, có thể khả năng ứng dụng và thực tế cao.
- Thực hiện các phương pháp bảo quản giống vi sinh vật, khảo sát các hình thức bảo quản và các chất cần bổ sung trong quá trình bảo quản....bằng việc kiểm tra lại khả năng sống sót và hoạt tính của chúng sau một thời gian nhất định nhằm đưa ra hình thức bảo quản phù hợp nhất.
SVTH: Dương Thúy Vy 110
- Sử dụng kính hiển vi điện tử, hoặc kính hiển vi có độ phóng đại lớn hơn (x1000) nhằm quan sát dễ dàng và chính xác hơn hình thái tế bào
- Sử dụng các phương pháp định danh hiện đại (PRC, điện di...) để khẳng định kết quả định danh bằng phương pháp cổ điển, và có thể định danh vi khuẩn đến cấp loài.
- Phân tích thêm về hợp chất kháng khuẩn, nghiên cứu tách chiết các bacteriocin. - Khảo sát thêm các đặc tính probiotic khác của các chủng vi khuẩn : khả năng chịu các enzyme tiêu hóa, và khả năng chịu đựng dưới nhiều yếu tố cộng gộp, khả năng cạnh tranh và bám dính ...
- Ứng dụng các chủng được xác định là có hoạt tính probiotic cao trong chế biến các sản phẩm lên men, thử nghiệm trên 1 chủng hoặc đưa ra tỉ lệ phối trộn tối ưu....