- Nhuộm vỏ nhầy (Capsule): Phương pháp nhuộm âm bản, phương pháp Đỏ Congo và Phương pháp dùng Tím kết tinh (Crystal violet)
4.2.Định danh các chủng phân lập
Chương 4: KẾT QUẢ VÀ BIỆN LUẬN 4.1 Phân lập vi khuẩn lên men lactic:
4.2.Định danh các chủng phân lập
Sau khi đã có được các chủng vi khuẩn đồng nhất, em tiến hành định danh các chủng phân lập bằng phương pháp cổ điển: khảo sát hình thái, sinh lý và sinh hóa như đã nêu ở mục 2.3.4
4.2.1. Nhuộm Gram
Vi khuẩn lactic là vi khuẩn Gram dương nên bước đầu tiên tiến hành định danh chúng ta tiến hành nhuộm Gram đối với các tế bào còn non (trong khoảng 24 giờ nuôi cấy) vì khi già vi khuẩn lactic đều trở thành Gram âm.
Khi tiến hành nhuộm Gram, trước tiên tiến hành nhuộm hai chủng biết trước là vi khuẩn Bacillus subtilis Gram dương (hình 4.2) và vi khuẩn E. coli Gram âm (hình 4.3) có ở phòng thí nghiệm để làm đối chứng. Sau đó tiến hành nhuộm Gram 38 chủng đã phân lập và dựa vào mẫu đối chứng để kết luận.
Trong số 38 chủng phân lập, 5 chủng thể hiện Gram âm (Na7, Nb9, L3, E5, E7). 10/30 chủng Gram dương còn lại có hình thái, kích thước tế bào trùng với các chủng khác có cùng nguồn, nên số chủng Gram dương rút xuống còn 23.
Ở bước nhuộm Gram này ta đã tăng tính an toàn cho các chủng vi khuẩn được chọn vì đã loại bỏ một số chủng vi khuẩn gây bệnh là Gram âm ví dụ như vi khuẩn E. coli.
Hình 4.2: Vi khuẩn Bacillus subtilis
Gram dương bắt màu tím.
Hình 4.3: Vi khuẩn E. coli
SVTH: Dương Thúy Vy 72
Từ việc nhuộm Gram, ngoài việc xác định vi khuẩn là Gram âm hay Gram dương ta còn có thể quan sát hình thái của vi khuẩn và mô tả hình dạng của 23 chủng Gram dương thì có :
- 20 chủng hình que. - 2 chủng hình cầu. - 1 chủng hình ovan
Kết quả mô tả hình thái khuẩn lạc và tế bào vi khuẩn được thể hiện ở bảng 4.2. Sau bước nhuộm Gram, ta thu được 23 chủng vi khuẩn có hình thái khuẩn lạc và tế bào khác nhau, hoặc một số trong đó giống nhau về hình thái khuẩn lạc nhưng khác nhau về hình dạng tế bào và khác cả về nguồn phân lập. Như vậy, dựa vào kết quả nhuộm Gram và mô tả hình thái vi khuẩn, từ 38 chủng có khả năng là vi khuẩn lactic được lựa chọn ban đầu, ta đã rút ra được 23 chủng có nhiều khả năng là vi khuẩn lactic hơn. Tuy nhiên vẫn có một số chủng là vi khuẩn Gram dương những không phải là vi khuẩn lactic, nên ta phải tiếp tục tiến hành các bước kiểm tra tiếp theo đối với 23 chủng trên để sàng lọc ra những chủng mang đặc điểm của vi khuẩn lactic dựa vào những mô tả trong Berger’s manual.
SVTH: Dương Thúy Vy 73
Bảng 4.2: Hình thái khuẩn lạc dưới kính hiển vi x10 và hình thái vi khuẩn dưới kính hiển vi x100 Kí hiệu chủng phân lập Mô tả khuẩn lạc và quan sát khuẩn lạc
Quan sát nhuộm Gram và mô tả hình thái vi khuẩn
Na2
Vi khuẩn hình que ngắn, không có thắt
Khuẩn lạc rất nhỏ, mép gợn sóng, màu trắng sữa, dẹp
Na3
Khuẩn lạc tròn, to, màu trắng sữa, bóng, không gọn,bề mặt hơi gợn sóng, lồi ít
Vi khuẩn hình que rất ngắn, đều, có thắt ở giữa.
Na4
Khuẩn lạc tròn, to, lồi nhiều, trắng đục, nhẵn bóng, mép đều, có rìa xung quanh, khuẩn lạc mọc sâu vào thạch
Vi khuẩn hình que rất ngắn, có thắt ở giữa
SVTH: Dương Thúy Vy 74 Na5
Khuẩn lạc tròn, to, nhẵn bóng, màu trắng đục, lồi rất nhiều
Vi khuẩn hình cầu (dạng đơn, đôi)
Na8 (adsbygoogle = window.adsbygoogle || []).push({});
Khuẩn lạc tròn, to, trắng đục, nhẵn bóng, mép trơn đều, lồi ít
Vi khuẩn hình que rất ngắn, không có thắt giữa.
Nb3
Khuẩn lạc nhỏ, tròn, nàu trắng sữa, có vành xung quanh, lồi
Vi khuẩn hình que thon, ngắn, không có thắt
SVTH: Dương Thúy Vy 75 Nb5
Khuẩn lạc nhỏ, tròn, màu trắng sữa, lồi ít
Vi khuẩn hình cầu dạng đơn và đôi, chuỗi ngắn
Nb8
Khuẩn lạc to, màu trắng đục, có mép đều, bóng, lồi nhiều
Vi khuẩn hình que nhỏ, rất ngắn, không có thắt
Nb11
Khuẩn lạc tròn, to, màu trắng sữa, dẹp
SVTH: Dương Thúy Vy 76 Y1
Khuẩn lạc rất nhỏ, có mép không đều, dẹp, sau 24 giờ có màu trắng hơi trong, khi già có màu trắng đục
Vi khuẩn hình que rất ngắn
B1
Khuẩn lạc nhỏ, tròn, bề mặt gợn sóng, hơi nhăn trên bề mặt, có rãnh, màu trắng sữa, dẹp
Vi khuẩn hình que dài, kết đôi hay tạo chuỗi ngắn, có thắt giữa
B2
Khuẩn lạc to, tròn, bờ đều, màu trắng đục, lồi ít
SVTH: Dương Thúy Vy 77 P1
Khuẩn lạc rất nhỏ, mép trơn, màu trắng đục
Vi khuẩn hình que ngắn, không có thắt
P2
Khuẩn lạc nhỏ, trắng đục, láng bóng, hơi lồi
Vi khuẩn hình que thon, rất dài
L1
Khuẩn lạc nhỏ, tròn, màu trắng đục, có bờ đều, láng bóng, lồi
Vi khuẩn hình que rất ngắn (adsbygoogle = window.adsbygoogle || []).push({});
L2
SVTH: Dương Thúy Vy 78 E1
Khuẩn lạc nhỏ, tròn, láng bóng, có vành xung quanh, dẹp, màu trắng sữa
Vi khuẩn hình que dài, có thắt giữa, có dạng như chữ V
E2
Khuẩn lạc nhỏ vừa, bề mặt hơi gợn sóng, màu trắng đục, lồi
Vi khuẩn hình que, thon dài, có thắt gữa
E3
Khuẩn lạc rất lớn, bóng, bờ đều, màu trắng đục, lồi Vi khuẩn hình que ngắn. E4 Khuẩn lạc nhỏ, tròn, nhẵn bóng, lồi nhiều Vi khuẩn hình que ngắn, có thắt giữa
SVTH: Dương Thúy Vy 79 E6 Khuẩn lạc nhỏ, tròn, màu trắng sữa,bờ gọn, nhẵn bóng, lồi ít Vi khuẩn hình que ngắn E8 Khẩn lạc rất to, (quan sát ở vật kính 4X), màu trắng đục, bóng, dẹp
Vi khuẩn hình que, thon dài, có thắt ở giữa.
E10
Khuẩn lạc nhỏ, tròn, bờ đều, bóng, màu trắng đục, lồi ít
SVTH: Dương Thúy Vy 80