Vô cơ hoá mẫu:
Cân 0,1g mẫu đã nghiền kỹ, thêm 5ml H2SO4 đậm đặc và 1g chất xúc tác cho vào bình Kjeldahl. Sau khi thêm chất xúc tác đun nhẹ hỗn hợp, tránh sôi trào và chỉ đun mạnh khi hỗn hợp đã hoàn toàn chuyển sang dịch lỏng. Trong quá trình đun thỉnh thoảng lắc nhẹ, tráng khéo léo sao cho không còn một vết đen nào của mẫu nguyên liệu chưa bị phân huỷ còn sót lại trên thành bình. Đun cho tới khi dung dịch trong bình hoàn toàn trắng. Khi thời gian phá mẫu kết thúc, khoảng 3 -4 giờ , để nguội rồi chuyển toàn bộ vào bình chưng cất.
Sau khi chuyển mẫu đã được vô cơ hoá vào bình chưng cất, bổ sung 30ml NaOH 32%. Dịch chưng cất chuyển qua erlen có chứa sẵn 20ml dung dịch acid boric 4% có chỉ thị màu
Ngừng chưng cất khi dịch chưng cất ra không còn NH3 (không làm đổi màu giấy quỳ). Chuẩn độ bằng HCl 0.25N đến khi xuất hiện màu đỏ phớt
Thông qua lượng HCl 0.25N đem đi chuẩn độ ta biết được lượng acid boric kêt hợp với NH3 và do vậy biết được lượng NH3 giải phóng từ mẫu. 1ml HCl 0.25N
Tương ứng với 0.0035g N hữu cơ. d) kết quả VHCl * 0.0035*100 N (%) = C Trong đó: VHCl : là thể tích HCl 0.25N dùng để chuẩn độ (ml) C : là khối lượng mẫu đem đi vô cơ hoá (g)
Xác định hàm lượng protein trong vỏ tôm
Thông thường protein chứa khoảng 16%N. khí NH3 nhận được khi chưng cất nhân với hệ số chuyển đổi 100/16 (~6.25) sẽ thu được giá trị protein tương đương.
Vì vậy sau khi xác định được hàm lượng Nitơ tổng số theo phương pháp Kjeldahl ta suy ra hàm lượng protein toàn phần là:
HL protein = N(%) * 6.25
3.3.6 Phương pháp sản xuất chitin – chitosan
3.3.6.1 Điều chế enyzme protease bằng nấm mốc Aspergillus oryzae
Cấy giống vào môi trường lúa có bổ dung khoáng Czapek tăng sinh khối khoảng 2 ngày, sau đó cho vào môi trường bã đậu nành, cám mì, cám gạo với tỷ lệ
2:1:1 có bổ sung khoáng Czapek và khoáng Mandel để thu enzyme sau đó đem ly tâm 3000vòng/phút trong 15 phút ở nhiệt độ 150C. loại cặn và thu dịch trong. Sau đó tủa bằng cồn tiếp tục ly tâm 3000vòng/phút trong 15 phút ở nhiệt độ 150C thu cặn bỏ dịch ta được enzyme protease. Bảo quản ở nhiệt độ 50C
3.3.6.2 Kết quả tủa enzyme bằng cồn để tìm ra tỷ lệ tủa thích hợp
Thí nghiệm sử dụng các tỷ lệ tủa sau:
Bảng 3.3 tỷ lệ tủa bằng cồn đối với dịch enzyme
Dịch enzyme thô (ml) 10 10 10 10 10 10
Cồn 960 lạnh (ml) 10 20 30 40 50 60
Tỷ lệ 1:1 1:2 1:3 1:4 1:5 1:6