4. Nhõn giống bằng giõm hom và nuụi cõy mụ
4.2.2. Nuụi cấy mụ Keo lai
Nuụi cấy mụ Keo laiở nước ta người đầu tiờn tiến hành nuụi cấy mụ là Nguyễn Ngọc Tõn và cỏc cộng sự là Trần Hồ Quang, Ngụ Minh Duyờn (1995). Sau đú Đoàn Thị Mai và cs., 1998, 2004) đó hoàn thiện thờm một số khõu và đó chuyển giao kỹ thuật nhõn giống Keo lai bằng nuụi cấy mụ cho nhiều cơ sở trong nước
Nhõn giống Keo lai bằng nuụi cấy mụ bao gồm cỏc cụng đoạn chớnh là tạo chồi, lấy mẫu, khử trựng, nhõn chồi, cho ra rễ và cấy cõy vào bầu.
Chồi để nuụi cấy mụ Keo lai được lấy bằng cỏch cắt cõy hom (lấy từ cõy giống gốc) ởđộ
cao 35 cm để tạo chồi vượt, khi chồi vượt cao 15 - 20 cm thỡ cắt đoạn chồi dài 10 - 15 cm (bỏ
ngọn), mựa cắt chồi thớch hợp là thỏng 4 đến thỏng 8 (ở cỏc tỉnh miền Bắc) và cỏc thỏng mựa mưa ở cỏc tỉnh phớa Nam (thời gian cắt chồi là đầu buổi sỏng). Đoạn chồi đó cắt được rửa sạch bằng nước xà phũng dưới vũi nước chảy, sau đú lau bằng bụng tẩm cồn 70% rồi rửa lại thật sạch bằng nước cất, khử trựng mẫu vật bằng Clorua thuỷ ngõn (HgCl2) 0,1% trong 10 phỳt.
Nhõn chồi Keo lai trong mụi trường MS (Murashige và Skooge) cải tiến cú bổ sung thờm Riboflavin 0,1 mg/lớt, Biotin 0,1 mg/lớt, đường sacharose 30 g/lớt, Agar-Agar 7 g/lớt và Polyvinyl pyrroline (PVP) 1 g/lớt. Mụi trường được hấp vụ trựng ở nhiệt độ 121oCở ỏp suất 1,4 atm trong thời gian 20 phỳt. Chồi được nuụi trong bỡnh đặt trờn giỏ cú độ chiếu sỏng 2500 - 3000 lux, nhiệt
độ trong phũng 25oC± 2oC.
Sau 30 - 40 ngày, khi chồi bất định dài 1,5 - 2,0 cm, thỡ cắt và cấy chuyển sang mụi trường nhõn chồi MS cải tiến trong Agar - Agar 7 g/lớt cú thờm BAP (Benzylamino purine) 1,5 mg/lớt, sau đú cứ 25 ngày cấy chuyển vào mụi trường mới cho đến lỳc đủ lượng chồi cần thiết để
ra rễ.
Cõy mụ (phải) và cõy hom (trỏi) Keo lai đó ra rễ (ảnh Đoàn Thi Mai)
Cho ra rễ chồi non Keo lai được thực hiện cả trong mụi trường dinh dưỡng lẫn trực tiếp trờn cỏt sụng. Mụi trường ra rễ cho Keo lai là 1/2 MS cải tiến trong 7g/lớt Agar-Agar cú bổ sung IBA 2 mg/lớt đường sacharo 15g/lớt và PVP 1 g/lớt. Cho ra rễ trực tiếp trờn cỏt sụng bằng cỏch cắt chồi dài 2,5 - 3,0 cm bỏ phần gốc, ngõm trong dung dịch Benlat 0,15% trong 10 phỳt, rổi chấm thuốc bột TTG1 cú thểđạt tỷ lệ ra rễ 85 - 90%.
Cụng nghệ nhõn giống Keo lai bằng nuụi cấy mụ đó được thực hiờn thành cụng tại Xớ nghiệp giống TP. Hồ Chớ Minh, Trung tõm nghiờn cứu giống cõy rừng và một số đơn vị khỏc.
cỏc tỉnh Hà Tĩnh, Quảng Trị, Bắc Cạn v.v. đó nuụi cấy mụ cho Keo lai trờn quy mụ lớn hàng trăm nghỡn cõy mỗi năm.