3 – NỘI DUNG CÁC PHẦN THUYẾT MINH VÀ TÍNH TOÁN: Tỷ Lệ %
3.2.3 Xác định mật độ vi tảo Spirulina platensis trong thời gian nuôi cấy
Trong bất kỳ mỗi loại mẫu vật nào, muốn biết số lượng chung của các nhóm vi sinh vật cũng như số lượng riêng của mỗi nhóm thành phần, đều cần phải đếm số lượng tế bào của chúng.
Phương pháp xác định trực tiếp số lượng tế bào bằng phiến kính có khung đếm Goriaep cho phép đếm số lượng vi sinh vật có kích thước lớn như tảo Spirulina platensis, đếm số lượng tế bào trực tiếp trên kính hiển vi nhờ buồng đếm hồng cầu.
Hình 3-20: Buồng đếm hồng cầu
Sinh viên: Phan Thị Hoài Cẩm Lớp: 52MT
Hình 3-21: Cấu tạo buồng đếm Hình 3-22: Quy tắc đếm
vi sinh vật trên lưới
Nguyên tắc cấu tạo của phòng đếm: đó là một phiến kính dày hình chữ nhật, chia thành 3 khoảng, khoảng giữa chia thành 2 khoảng nhỏ. Trên mỗi khoảng này có kẻ một lưới đếm, gồm rất nhiều ô vuông. Mỗi ô vuông lại được chia ra thành 16 ô vuông nhỏ, mỗi ô nhỏ có diện tích là 1/400 m2, và chiều dày là 1/10 mm, như vậy thể tích 1 ô vuông nhỏ là 1/4000 mm3 hay 1/4000.000 ml. Phòng đếm có 1 lá kính dày để đậy.
Cách thực hiện:
Bước 1: Pha loãng mẫu đảm bảo không lớn hơn 10 tế bào và không nhỏ hơn 2,5 tế bào.
Bước 2: Lắc đều ống nghiệm pha loãng mẫu
Bước 3: Nhỏ 1 giọt dung dịch mẫu vào giữa phòng đếm và đậy lại bằng lá kính, chú ý không để tạo bọt khí.
Bước 4: Di chuyển nhẹ nhàng phòng đếm để dung dịch mẫu tràn đầu các khoang. Bước 5: Đặt phòng đếm lên bàn kính hiển vi, để yên 3 - 5 phút, sau đó tiến hành đếm số lượng tế bào trong 5 ô lớn chéo nhau (chọn 4 ô ở 4 góc và một ô ở chính giữa).
Sinh viên: Phan Thị Hoài Cẩm Lớp: 52MT
Hình 3-23: Cách nhỏ dung dịch chứa tảo vào phòng đếm
Sau đó cho lên kính hiển vi và đếm số lượng tảo quan sát được:
Hình 3-24: Quan sát tảo
dưới kính hiển vi quang học
Hình 3-25: Hình dạng tảo thu
được dưới kính hiển vi
Cách đếm số lượng vi tảo Spirulina:
- Đếm số tế bào tảo trong mỗi ô lớn: mỗi ô nhỏ có 4 cạnh giới hạn, đếm số lượng tế bào nằm trọn trong ô và những tế bào nằm trên 2 cạnh liên tiếp cùng chiều.
- Ví dụ: Đếm cạnh bên dưới và cạnh bên phải. Đếm các ô từ trái sang phải, từ hàng trên xuống hàng dưới rồi đổi chiều. Cứ đếm như vậy cho đến ô cuối cùng của 16 ô con.
Cách tính toán số lượng tế bào vi tảo Spirulina như sau: - Gọi A là số lượng tế bào tảo đếm được trong 80 ô nhỏ
- Số lượng tế bào tảo trong 1mm3 được tính theo công thức sau: Số tế bào trong 1mm3 = 16 5 4000 APL A
Sinh viên: Phan Thị Hoài Cẩm Lớp: 52MT Trong đó: - 4000 = 400 x 10 ( 1/400 mm2 : diện tích một ô nhỏ; 1/10 mm: chiều cao từ mặt buồng đếm tới lammelle).
-APL: độ pha loãng.
Ưu điểm của phương pháp này là cho phép xác định nhanh chóng mật độ vi sinh vật chứa trong mẫu.
Nhược điểm: không phân biệt được tế bào sống và chết, dễ nhầm lẫn tế bào vi sinh vật với các vật thể khác trong mẫu, khó đạt được độ chính xác cao, không thích hợp với huyền phù vi sinh vật có mật độ thấp.