2.4.3.1. Kỹ thuật làm tiêu bản và nhuộm lam máu
Mỗi bệnh nhân đủ tiêu chuẩn đưa vào nghiên cứu sẽ được lấy máu làm tiêu bản 1 ngày 2 lần (cách nhau 12 giờ) trong 3 ngày đầu (D0 - D3), sau đĩ lấy máu làm tiêu bản 1 ngày 1 lần trong các ngày theo dõi và làm cả giọt dày và giọt mỏng trên cùng một lam máu; do thử nghiệm in vivo cần một số lượng lam máu rất lớn (12-15 tiêu bản/1 bệnh nhân), nếu khơng cĩ hệ thống ghi nhãn đơn giản và rõ ràng thì sẽ lẫn lộn, do đĩ lam máu được dán nhãn, ghi mã số cẩn thận theo quy ước:
- Ngày theo dõi (D): ghi ngày của lam được lấy
- Số hiệu lam: số gốc của bệnh nhân sau khi được điều tra sàng lọc, số này khơng thay đổi qua các ngày theo dõi và khơng quy định cho bệnh nhân khác trên cùng địa điểm.
- Địa điểm: dùng mã số gồm 2-3 chữ cái để chỉ địa danh nơi nghiên cứu. Lam sàng lọc cĩ thể nhuộm nhanh với nồng độ giem sa 10%/10-15 phút để phát hiện KSTSR, nhưng với lam nghiên cứu nồng độ nhuộm 3-5%/45-60 phút để đảm bảo giọt máu bắt màu thuốc nhuộm tốt và hình thể ký sinh trùng rõ ràng. Dung dịch nhuộm pha lỗng sẽ được chuẩn bị ít nhất mỗi ngày một lần và cĩ thể hơn tùy thuộc vào số lam máu làm. Lam sau khi nhuộm được soi dưới kính hiển vi độ phĩng đại 1000 lần để xác định chủng loại và mật độ KSTSR.
2.4.3.2. Kỹ thuật xét nghiệm lam máu
- Xét nghiệm máu và đếm mật độ ký sinh trùng sốt rét thể vơ tính trên tiêu bản giọt dày vào các ngày D1, D2, D3, D7, D14, D21 và D28 rồi suy ra mật độ KSTSR/µl máu theo cơng thức:
MĐKSTSR/µl = Số lượng KSTSR đếm được × 6000 Số lượng BC đếm được.
- Hai kỹ thuật viên sẽ đếm mật độ KSTSR độc lập tất cả các lam nghiên cứu và tính trung bình từ kết quả đếm của hai người, nếu kết quả đếm chênh lệch > 50% sẽ được kiểm tra lại lần thứ 3 bởi một kỹ thuật viên khác và mật độ KSTSR sẽ được tính số trung bình của hai người cĩ giá trị gần tương đương nhau.