Phương pháp này thường dùng để đếm số lượng vi sinh vật có kích thước tương đối lớn như nấm men, bào tử nấm mốc, các loại tảo. Người ta thường dùng hai loại phòng đếm hồng cầu là Thomas và Goriaep.
Nguyên tắc cấu tạo của phòng đếm: đó là một phiến kính dày hình chữ nhật, chia thành 3 khoảng, khoảng giữa chia thành 2 khoảng nhỏ. Trên mỗi khoảng này có kẻ một lưới đếm, gồm rất nhiều ô vuông . Mỗi ô vuông lại được chia ra thành 16 ô vuông nhỏ , mỗi ô nhỏ có diện tích là 1/400 mm2, và chiều dày là 1/10 mm, như vậy thể tích 1 ô vuông nhỏ là 1/4000 mm3 hay 1/4000.000 ml. Phòng đếm có 1 lá kính dày để đậy.
Cách đếm:
- Lắc đều ống nghiệm pha loãng mẫu.
- Nhỏ 1 giọt dung dịch mẫu vào giữa phòng đếm và đậy lại bằng lá kính, chú ý không để tạo bọt khí.
- Di chuyển nhẹ nhàng phòng đếm để dung dịch mẫu tràn đầy các khoang.
- Đặt phòng đếm lên bàn kính hiển vi, để yên 3 – 5 phút, sau đó tiến hành đếm số lượng tế bào trong 5 ô lớn chéo nhau (chọn 4 ô ở 4 góc và một ô ở chính giữa).
Cách đếm số tế bào trong mỗi ô lớn như sau: mỗi ô nhỏ có 4 cạnh giới hạn, đếm số lượng tế bào nằm trọn trong ô và những tế bào nằm trên 2 cạnh liên tiếp cùng chiều, ví dụ: đếm cạnh bên dưới và cạnh bên phải. Đếm các ô từ trái sang phải, từ hàng trên xuống hàng dưới rồi đổi chiều. Cứ đếm như vậy cho đến ô cuối cùng của 16 ô con.
- Số lượng tế bào trong 1 ml mẫu được tính bằng công thức:
4000.103
b Trong đó:
N là số tế bào trong 1 gam mẫu.
a là số lượng tế bào trong 5 ô lớn (80 ô nhỏ). b là số ô nhỏ trong 5 ô lớn (80 ô nhỏ).
103 là số chuyển mm3 thành ml (1000mm3 = 1 ml) 10n là độ pha loãng của mẫu.
Chú ý: + Sau khi sử dụng xong phòng đếm phải rửa sạch ngay và lau
khô để bảo quản.
+ Trị số trung bình của số tế bào đếm được trong 1 ô nhỏ phải đảm bảo không lớn hơn 10 tế bào và không nhỏ hơn 2,5 tế bào mới đảm bảo độ chính
xác của phương pháp.