Đối với mẫu cao có hoạt tính sinh học cao, cùng với xác định hoạt tính kháng khuẩn, kháng ung thư thì việc khảo sát sơ bộ thành phần hóa học chính của mẫu cao này giúp dễ dàng hơn trong việc phối hợp các thành phần cho sản phẩm sau này. Phương pháp khảo sát sơ bộ được thể hiện trong bảng 2.2 dưới đây.
26
Bảng 2.2 Phương pháp định danh thành phần hóa học
Phương pháp Nhận biết
Alkaloid [59, 60]
Thuốc thử Mayer 1.36g HgCl2 + 5g KI + nước cất đến 100mL.
Kết tủa trắng hoặc vàng nhạt xuất hiện khi cho thuốc thử vào dung dịch acid của mẫu.
Thuốc thử Wagner 1.27g I2 + 2g KI + nước cất đến 100mL.
Kết tủa nâu xuất hiện khi cho thuốc thử vào dung dịch acid của mẫu.
Saponin
Tính tạo bọt trong nước [61]
Cao (1g) + ethanol (5mL), đun cách thủy/5phút. Lọc lấy dung dịch alcol để thử nghiệm trong 2 ống nghiệm có kích cỡ bằng nhau. + Ống 1: 5mL HCl 0.1N (pH=1) + 3 giọt dung dịch lọc + Ống 2 : 5mL NaOH 0.1N (pH =13) + 3 giọt dd lọc Bịt miệng ống nghiệm và lắc mạnh cả 2 ống trong 1 phút và để yên, quan sát cột bọt bong bóng trong 2 ống nghiệm.
+ Cột bọt bằng nhau và bền bọt như nhau: Có thể có saponin triterpenoid
27
+ Cột bọt ống 2 cao hơn nhiều so với ống 1: Có thể có saponin steroid
Phản ứng LieBermann- Burchard [62]
1ml anhydrid acetic+ 1mL chloroform rồi làm lạnh, cho thêm 1 giọt H2SO4 đậm đặc. Cho mẫu vào ở dạng rắn hoặc chloform, nếu là dẫn chất steroid thì có màu lơ-xanh lá, còn dẫn chất
triterpenoid thì có màu hồng đến tía.
Anthocyanydin [63]
HCl Trong điều kiện pH thấp, sự có mặt của Anthocyanidin dẫn đến hợp chất có màu, ngược lại thì không. Dùng acid HCl đđ để nhận biết sự có mặt của Anthocyanidin ( xuất hiện màu )
Proanthocyanin [63]
HCl đđ Cho mẫu cao bơ hòa tan trong dung dịch cồn, đun cách thủy với HCl 10% trong 10phút sự có mặt của proanthocyanin làm phản ứng xuất hiện kết tủa đỏ.
Tannin [61]
Gelatin muối Thử trong ống nghiệm: NaCl (5g), gelatin ( 0.5g) hòa tan trong 100 mL nước cất. Phản ứng dương tính có tanin khi xuất hiện trầm hiện màu vàng nhạt, để lâu hóa thành nâu
Thử trong ống nghiệm Formol 36% ( 20mL) + 10mL HCl đậm đặc. Phản ứng dương tính có tannin khi xuất hiện trầm hiện màu đỏ.
28
Acid hữu cơ [63]
Na2CO3 Mẫu cao được hòa tan hoàn tan trong dung dịch cồn.
Cho một ít tinh thể Na2CO3 vào 10mL hỗn hợp. Sự
có mặt của acid hữu cơ làm cho bọt khí bay lên từ phản ứng.
Chất béo [63]
Giấy lọc Cao được hòa tan một phần trong ether, cho lượng mẫu thấm đều trên giấy lọc, bay hơi hết ether để lại vết mờ trên giấy mỏng, chứng minh trong mẫu cao có chứa chất béo.