- Nõu t0 Nõu đen 2+ Nõu + Pq xanh lơ
4.2.5.Nghiờn cứu tỏc dụng bảo vệ gan của chế phẩm F
7 0,56 Đầu tiờn khụng xuất hiện, sau 1 thời gian
4.2.5.Nghiờn cứu tỏc dụng bảo vệ gan của chế phẩm F
Nghiờn cứu tỏc dụng bảo vệ gan của chế phẩm F15 thụng qua việc khảo sỏt khả năng ức chế quỏ trỡnh peroxy hoỏ lipid (POL) của cỏc chế phẩm trờn động vật thực
nghiệm gõy độc bằng CCl4; đồng thời thăm dũ tỏc dụng điều hoà chức năng gan, bảo vệ tế bào gan thụng qua sự thay đổi hoạt tớnh cỏc enzyme AST, ALT trong huyết thanh chuột.
Cỏc enzyme AST (Alanin amino transferase) và ALT (Aspartate amino transferase) – là 2 loại enzym tranrferase trong huyết thanh, xỳc tỏc cho quỏ trỡnh chuyển nhúm Amin của axit amin sang những axit xetonic. Cỏc enzyme này tập trung nhiều ở tế bào gan và tim. Khi cú tổn thương hoại tử ở những tổ chức này thỡ chỳng đổ vào mỏu nhiều hơn và làm tăng nồng độ trong mỏu. Trong viờm gan do nhiễm độc, xơ gan AST và ALT tăng rất nhiều. Định lượng enzyme trong quỏ trỡnh điều trị sẽ giỳp tiờn lượng mức độ rối loạn chức năng gan
Thớ nghiệm được tiến hành như sau:
(1) Mẫu thử tỏc dụng bảo vệ gan trong thớ nghiệm này là chế phẩm F15 . Mẫu thử được pha thành dung dịch cú nồng độ: 10 mg /1 ml. Liều sử dụng tăng dần từ 1 → 5mg chế phẩm /1 con chuột nặng 20g/ ngày. Cho chuột uống chế phẩm trước khi tiờm CCl4
1lần / ngày trong thời gian 2 ngày (48 giờ). Sau đú tiờm CCl4 và tiếp tục cho uống dung dịch thử cho đến khi kết thỳc thời gian thớ nghiệm (72 giờ sau khi tiờm CCl4).
(2) Động vật được tiến hành thớ nghiệm là chuột nhắt trắng, cú trọng lượng 20 ± 0,5g.
(3) Tỏc nhõn gõy bệnh: CCl4 ( tetraclorua cacbon). Cỏch dựng như sau:
Hoà 4ml CCl4 vào 6ml dầu thực vật được dung dịch CCl4 cú V = 10ml. Dựng hỗn hợp này tiờm cho chuột ở cỏc lụ gõy bệnh (lụ 2+ 3) một lần duy nhất với liều lượng 0,2 ml/ chuột.
Bố trớ thớ nghiệm: Thớ nghiệm tiến hành trong 72 giờ, kể từ khi gõy nhiễm độc CCl4 cho chuột.
+ Lụ 1 - Đối chứng (-): (5 chuột) chỉ cho chuột uống 0,3 ml NaCl 0,9%/1 lần/ngày
+ Lụ 2 - Đối chứng (+): (5 chuột) tiờm dung dịch CCl4 0,2ml/chuột và cho uống 0,3 ml NaCl 0,9% /1 lần/ngày.
+ Lụ 3 - Thớ nghiệm: (3 chuột x 5 lần lặp lại = 15 chuột). Cho chuột uống chế phẩm F15
với liều 1,0; 2,5; 5,0 mg chế phẩm F15/ 1 chuột/ ngày, cho uống liền 2 ngày (48 giờ) trước khi tiờm 0,2ml dung dịch CCl4 / một con chuột (mỗi nồng độ thớ nghiệm lặp lại trờn 5 con chuột). Tiếp tục cho chuột uống chế phẩm F15 đến hết 3 ngày (72 giờ). Kết thỳc thớ nghiệm giết chuột để lấy mỏu và lấy gan phõn tớch sinh hoỏ.
- Lấy mỏu, tỏch huyết thanh để định lượng enzym theo phương phỏp của Reitruan và Fran Kil trờn mỏy phõn tớch sinh húa tự động Asmes SEAC CH – 100, hoỏ chất xột nghiệm được hóng Span Diagnostic Ltd cung cấp.
- Lấy gan tươi để xỏc định hàm lượng DAM. Xỏc định hàm lượng DAM trong gan như sau: Lấy gan chuột vừa giết búc bỏ màng và nghiền đồng thể trong dung dịch KCL 1,15% theo tỉ lệ 1:10 ở nhiệt độ nhỏ hơn 100C. Lấy 2ml dung dịch đồng thể + 1 đệm Tris 25mM và ủở 370C trong 60 phỳt. Sau đú them 1ml axit tricloacetic 10%; ly tõm lấy dịch trong cho phản ứng với 1ml axit thiobarbituric 0,25%, đặt trờn nồi cỏch thuỷ ổn nhiệt 1000C trong 15 phỳt và đo màu ở λ = 532nm. Xỏc định hàm lượng DAM theo phương phỏp CG.Blagvdorov.
Kết quả thớ nghiệm được trỡnh bày trờn bảng 12 và biểu đồ 7:
Bảng12:Sự thay đổi hàm lượng DAM trong gan và cỏc enzym AST, ALT trong huyết thanh chuột bị nhiễm độc CCl4 sau 72 giờđiều trị bằng chế phẩm F15
TT Lụ chuột (n = 5) Liều chế phẩm mg/1chuột Hàm lượng DAM nM/g Gan Hàm lượng AST (U/ L) Hàm lượng ALT (U/L) 1 Đối chứng (-) 0,0 8,9 ± 0,5 14,4 ± 3,39 20,2 ± 12,9 2 Đối chứng(+) 0,0 28,3 ± 0,8 222,4 ± 22,1 182,6 ± 22,4 1,0 20,15 ± 0,07 178,16 ± 14,8 163,2 ± 11,5 2,5 15,09 ± 0,06 148,85 ± 5,6 124,71± 6,15 3 Chế phẩm F15 5,0 13,9 ± 0,01 128,6 ±17,4 122,2 ± 8,13 Nhận xột kết quả: 1. Tỡnh trạng chung Sau 72 giờ tất cả cỏc chuột đều cũn sống:
+ Lụ1 - Đối chứng (-): chuột khoẻ mạnh, ăn uống bỡnh thường. + Lụ 2 - Đối chứng (+): chuột, ớt hoạt động, mệt mỏi, ăn ớt.
+ Lụ thớ nghiệm (dựng F15) :cỏc chuột uống chế phẩm F15 với nồng 2,5 và 5,0 mg/ chuột, đều nhanh nhẹn, hoạt động và ăn uống tốt. Ở cỏc chuột dựng liều nhỏ hơn chuột tỏ ra ớt hoạt động và ăn kộm hơn