Cõn chớnh xỏc 10g bột nguyờn liệu, chiết bằng clorofooc trờn mỏy siờu õm; chiết trong 3 giờ để loại hết nhựa, chất bộo, caroten và clorofooc. Lấy phần bột nguyờn liệu ra, sấy cho bay hết clorofooc rồi tiếp tục chiết bằng Ethanol 960 trờn mỏy siờu õm đến khi dịch chiết khụng cũn cho phản ứng Shinoda. Dịch chiết Ethanol được xỏc định thể tớch chớnh xỏc và bảo quản trong bỡnh thuỷ tinh màu nõu cú nỳt nhỏm kớn.
Lấy 50 ml dịch chiết Ethanol 960đem cụ cạn ở điều kiện ỏp suất thấp trờn mỏy cất quay chõn khụng, sau đú chiết lại bằng nước cất núng. Dịch chiết nước sau khi đó lọc và chỉnh pH = 3 – 4 được cho vào phễu chiết, dựng Ethylaxetat chiết nhiều lần, sau đú đuổi
Chiết bằng Ethanol 960 trờn mỏy siờu õm
Hoạt chất trong dịch chiết nước
Chiết bằng nước cất núng (chỉnh pH = 3 - 4) Dịch chiết Ethylaxetat Chiết bằng Ethylaxetat Cụ cạn kiệt, ỏp suất giảm trờn mỏy cất quay Dịch chiết clorofooc Chiết bằng clorofooc (loại tạp) Bột nguyờn liệu Bột nguyờn liệu sấy khụ Dịch chiết Ethanol Cụ cạn ở ỏp suất Cao Ethanol Chế phẩm Flavonoid ở dạng bột khụ Đụng khụ Flavonoid toàn phần Dựng Ethanol 960
hoà tan Chế phẩm Flavonoid hoà
tan trong Ethanol (dựng
kiệt dung mụi trờn mỏy cất quay chõn khụng tới trọng lượng khụng đổi. Cõn xỏc định trọng lượng Flavonoid tổng số.
Hàm lượng Flavonoid chứa trong mẫu phõn tớch được tớnh theo cụng thức:
X % = [(M2 – M1) x V/v x 10] / 100
Trong đú:
V: thể tớch dịch chiết Ethanol từ 10 g bột nguyờn liệu v: thể tớch dịch chiết Ethanol lấy ra đểđịnh lượng (50 ml) M2: trọng lượng khi cõn cặn Flavonoid cả bỡ
M1: trọng lượng bỡ
Đểđịnh lượng, thớ nghiệm được lặp lại 5 lần (n = 5), cỏc kết quảđược xử lý thống kờ.
3.2.3. Định lượng Tanin tổng số theo phương phỏp Dược Điển Việt Nam [ 2 ]
Tanin là hợp chất khử, nờn dễ dàng bị oxy húa bởi KMnO4 (kalipermanganat) trong mụi trường axit với chất chỉ thị indigocarmin sẽ tạo thành khớ cacbonic và nước, đồng thời làm mất màu xanh của indigocarmin theo phản ứng sau:
Tanin + KMnO4→ CO2 + H2O
Căn cứ vào lượng KMnO4 0,1N dựng để chuẩn độ sẽ xỏc định được lượng Tanin tổng số trong mẫu nghiờn cứu.
3.2.4 Phõn tớch thành phần Flavonoid bằng sắc ký lớp mỏng và phổ tử ngoại [ 10, 20]