3. Thử nghiệm một số chế phẩm sinh học trong phòng trừ bệnh HXVK Thử nghiệm một số chế phẩm sinh học ñối với vi khuẩn R.solanacearum
2.3.2. Phương pháp thu mẫu, phân lập vi khuẩn
Theo phương pháp của Viện BVTV, 1997 [26], Nguyễn Văn Tuất, 1997 [24] và Kelman A., 1954 [59].
Các mẫu có triệu chứng bệnh HXVK ñiển hình trên ñồng ruộng, tiến hành thu ñoạn thân gần gốc, cho vào túi sạch, ghi nhãn với các thông tin: nơi thu thập, giống, ngày thu mẫu,...
Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sỹ khoa học nông nghiệp……… 34
Các mẫu sau khi thu về ñược rửa sạch, sát trùng bằng cồn 700 rồi dùng dao vô trùng cắt ngang thân cây gần sát gốc và lấy những phần thân có màu nâu nhạt ñem ngâm trong cốc có chứa nước cất vô trùng, ñểở nhiệt ñộ phòng. Sau một khoảng thời gian ta sẽ thấy trên mạch dẫn của ñầu cắt của thân cây tiết ra dòng dịch vi khuẩn màu trắng sữa. Sau 10- 20 phút bỏ ñoạn mẫu ra khỏi cốc, nuôi cấy vi khuẩn trên môi trường TZC, sau bảo quản dịch vi khuẩn
ở nhiệt ñộ 50C ñến -200C ñể sử dụng cho các thí nghiệm sau.
Phương pháp phân lập vi khuẩn R. solanacearum ñược thực hiện dựa trên môi trường TZC ñể nhận dạng các dòng vi khuẩn thông qua hình dạng và màu sắc khuẩn lạc.
Pha loãng dịch vi khuẩn trong cốc với nồng ñộ thích hợp sao cho có thể
thu ñược các khuẩn lạc ñơn sau khi cấy (trang) trên môi trường TZC. ðể các hộp petri ñã cấy trong tủñịnh ôn, ở nhiệt ñộ 280C theo dõi sự phát triển của vi khuẩn sau 24, 36, 48, 72 giờ. Sau ñó từ các hình thái khuẩn lạc ñặc trưng, tiến hành chọn 3 -5 khuẩn lạc ñể cấy trên môi trường (theo phương pháp trang). Sau 24- 48 giờ giữ ở 280C, tiến hành chọn những khuẩn lạc màu sữa trắng, tâm phớt hồng có kiểu hình thái, màu sắc ñiển hình của vi khuẩn R. solanacearum có ñộc tính giữ trong nước vô trùng hoặc bảo quản trên môi trường dùng cho các nghiên cứu tiếp theo.