3. Thử nghiệm một số chế phẩm sinh học trong phòng trừ bệnh HXVK Thử nghiệm một số chế phẩm sinh học ñối với vi khuẩn R.solanacearum
2.3.3.Xác ñị nh các biovar của vi khuẩn R.solanacearum theo phương pháp của Hayward A.C (1964) [48].
pháp của Hayward A.C. (1964) [48].
• Môi trường cơ bản cho quá trình oxy hóa:
Pepton: 1g NH4H2PO4: 1g KCl: 0,2g
MgSO4.7H2O : 0,2g Agar : 3g
Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sỹ khoa học nông nghiệp……… 35
Bromothymol blue: 0,08g
Nước cất: 1 lít ( pH: 7,0-7,1)
• Chuẩn bị các dung dịch hydratcacbon
- Chuẩn bị 10% dung dịch nước ñể kiểm tra các hydratcacbon (Dulcitol là kém hòa tan ở 20-300C, hòa tan nó bằng cách làm nóng lên trong bể nước nóng ở nhiệt ñộ 60- 700C, sau ñó lại làm nguội).
- Cho 10ml Mannitol, 10ml Sorbitol và 10ml Dulcitol vào các bình tam giác, sau ñó khử trùng bằng cách hấp ở 1100C trong 20 phút.
- Cho 10ml Lactose, 10ml Maltose và 10ml Cellobiose vào các bình tam giác rồi khử trùng bằng màng lọc.
• Thêm các hydratcacbon vào môi trường cơ bản
Sau khi ñã chuẩn bị 10% dung dịch hydratcacbon, thêm vào môi trường cơ
bản ở 600C và tiếp tục cô cạn ñến khi tạo ñược môi trường. (10ml của 10% dung dịch vào 90ml môi trường cơ bản).
Sau khi hỗn hợp, nấu chảy môi trường rồi pha 3ml ñã khử trùng vào tuýp ñể
kiểm tra.
• Chuẩn bị nguồn vi khuẩn
- Vi khuẩn R. solanacearum thuần sau 24 - 48h nuôi cấy, thêm 3 - 5ml nước cất vô trùng lên bề mặt môi trường làm phát sáng những khuẩn lạc màu trắng sữa trong huyền phù.
- Thêm vào 0,02 ml thể huyền phù của vi khuẩn sang ống tuýp khác. - Ủ trong tủñịnh ôn ở 28 -320C.
- Kiểm tra theo dõi những ống tuýp này ở 3, 7, 14 và 28 ngày sau khi cấy nguồn cho ñến khi thay ñổi pH (phản ứng).