2. TÌNH HÌNH NGHIÊN CỨU TRONG VÀ NGOÀI NƯỚC
2.4.1. Phương pháp xác ựịnh tỷ lệ nhiễm bệnh do Sta.aureus gây nên
ựàn gà.
Xác ựịnh tỷ lệ nhiễm bệnh do Staphylococus gây ra trên ựàn gà Ross 308 bằng phương pháp quan sát trực tiếp và thông qua mổ khám. đàn gà thắ nghiệm ựược nuôi ở ựiều kiện giống nhau theo quy trình chăn nuôi của Trung tâm nghiên cứu gia cầm Thụy Phương và ựược nghi chép theo dõi hàng ngày.
2.4.2. Phương pháp theo dõi triệu chứng của gà bị bệnh
Theo dõi triệu chứng bằng cách quan sát trực tiếp trạng thái của ựàn gà hàng ngày. Bắt nuôi riêng những gà có triệu chứng của bệnh. Quan sát, ghi chép cụ thể các biểu hiện lâm sàng của gà ở khớp cánh, khớp gối, da và thể trạng, ăn uống, vận ựộng của gà.
2.4.3. Phương pháp xác ựịnh bệnh tắch ựại thể
Xác ựịnh các bệnh tắch ựại thể của gà bị bệnh do Sta. aureus gây ra bằng phương pháp mổ khám thông thường (Tài liệu tiêu chuẩn ngành Ờ Cục thú y, 2006).
Học viện Nông nghiệp Việt Nam Ờ Luận văn thạc sỹ Khoa học Nông nghiệp 29
2.4.4. Phương pháp phân lập vi khuẩn Staphylococus gây bệnh cho gà Ross 308 Ross 308
- Phương pháp lấy mẫu: Lấy mẫu bệnh phẩm bao gồm tim, gan, phổi, lách ựược bỏ trong hộp nhựa bảo quản trong thùng bảo ôn ựể chuyển về phòng thắ nghiệm. Có thể lấy cả gà ốm hoặc gà nghi mắc Sta. aureus ựể chuyển ựến phòng thắ nghiệm.
- Phân lập vi khuẩn Sta. aureus theo quy trình ISO 6888-1:1999 của Viện thú y.
* Quy trình phân lập Sta. aureus
- Dụng cụ, môi trường:
+ Túi dập mẫu
+ Máy ựồng nhất mẫu + Tủ ấm 370C
+ Tủ ấm 300C + Máy water bass + đĩa petri
+ Que cấy nhựa 1ộ + Que cấy nhựa 10 ộ + Ống eppendorf 2ml + Ống nghiệm thủy tinh
+ Pipette các loại 20 ộ, 100 ộ, 200 ộẦ
+ Môi trường MSB (Manitol Salt Broth), Pair Backer Agar (PBA), Nutrient agar,Ầ
- Các bước tiến hành:
Bước 1: Tăng sinh và phân lập
- Mẫu ựược ựồng nhất và pha loãng ở các nồng ựộ 10-1, 10-2, 10-3Ầ tùy theo nồng ựộ cần nuôi cấy.
Học viện Nông nghiệp Việt Nam Ờ Luận văn thạc sỹ Khoa học Nông nghiệp 30 - Hút 1 ml dung dịch mẫu ựã pha loãng ở các nồng ựộ 10-1, 10-2, 10-3... vào các ống nghiệm thủy tinh có chứa 9ml MSB tương ứng với nồng ựộ cần nuôi cấy. Ủ ấm ở 370C/24h.
- Sau 24h, cấy chuyển sang môi trường PBA, nuôi cấy 370C/48h.
- đọc kết quả trên môi trường PBA sau 48h: Mẫu dương tắnh khi trên môi trường PBA xuất hiện khuẩn lạc tròn, lồi, có tâm ựen, trong suốt, ựường kắnh 1 Ờ 1,5 mm, có vòng sáng chung quanh khuẩn lạc.
- Chọn những khuẩn lạc ựặc trưng ria cấy sang môi trường Nutrient Agar, ử ở 370C trong 24h.
Bước 2: Thử các phản ứng sinh hóa
- Chọn khuẩn lạc từ môi trường Nutrient Agar:
+ Nhuộm gram
+ Thử phản ứng Catalase: Sta. aureus (+) tắnh với Catalase
+ Cấy chuyển sang môi trường thạch máu ựể kiểm tra khả năng dung huyết của vi khuẩn.
- đồng thời, cấy vào ống môi trường BHI, ủ ở 370C trong 24h.
- Lấy canh khuẩn ựã ựược nuôi cấy trên BHI, cấy vào ống nghiệm nhỏ chứa khoảng 0,3ml huyết tương thỏ và ủ ở 370C/24h, quan sát ghi nhận sự ngưng kết trong 30/lần. Tiếp tục ủ ựến 24 giờ nếu không thấy xuất hiện khối kết tụ. Thực hiện song song một ống ựối chứng không ựược cấy dịch vi sinh vật. Mẫu ựược kết luận là có Sta. aureus khi thử nghiệm coagulase này dương tắnh (nghĩa là có sự xuất hiện của khối ựông trong khi ống ựối chứng thì không có).
Học viện Nông nghiệp Việt Nam Ờ Luận văn thạc sỹ Khoa học Nông nghiệp 31
Sơ ựồ quy trình phân lập Sta. aureus
(Theo ISO 6888-1:1999) hoặc TCVN 4830 - 2005
Mẫu (pha loãng ở nồng ựộ 10-1, 10-2, 10-3Ầ)
Baird Ờ Parker(Nuôi cấy ở 370C, 48hổ2h)
Tăng sinh trong môi trường MSB, nuôi cấy 370C/24h
Ria cấy trên thạch Blood Agar (370C/24h)
Dung huyết hoàn toàn Chọn khuẩn lạc ựặc trưng trên Baird - Parker
Kiểm tra ựông vón huyết tương
Dương tắnh
Sta. aureus
Ria cấy trên thạch dinh dưỡng Nutrient Agar (370C/24)
Nhuộm Gram Phản ứng
Catalase
Học viện Nông nghiệp Việt Nam Ờ Luận văn thạc sỹ Khoa học Nông nghiệp 32
2.4.5. Phương pháp xác ựịnh khả năng mẫn cảm với kháng sinh của chủng vi khuẩn. vi khuẩn.
Khả năng mẫn cảm với kháng sinh của chủng vi khuẩn phân lập ựược bằng phương pháp khuếch tán trên ựĩa thạch. Phương pháp tiến hành như sau:
Bước 1. Chuẩn bị môi trường
- Muller Hinton: cân 38 gam môi trường trong 1lắt nước cất, hấp ở 1210C trong 15 phút, ựể nguội, ựổ ựĩa petri 90mm.
- Khoanh giấy tẩm kháng sinh các loại.
- Nước sinh lý: cân 0,85g NaCl hòa tan trong 1000 ml nước cất, hấp ở 1210C trong 15 phút.
Bước 2. Chuẩn bị các thiết bị, máy móc, dụng cụ, hoá chất dùng trong thắ nghiệm.
- Thiết bị: Tủ ấm, tủ lạnh, tủ mát, tủ hấp sấy, cân, buồng cấy vô trùng.
- Dụng cụ: Pipet, ống nghiệm, chai lọ các loại, que cấy, tăm bôngẦ và hoá chất cần thiết trong phòng thắ nghiệm
Bước 3. Tiến hành thắ nghiệm: Thực hiện theo phương pháp so màu của Mc
Farland
Lấy 1 số khuẩn lạc vi khuẩn cần thử trên ựĩa thạch thắch hợp vào ống thủy tinh trong suốt ựã chứa 3ml nước sinh lý cho ựến khi có ựộ ựục bằng ống Mc Farland 0,5 Ờ tương ựương 1-1,5 x 108 vi khuẩn/ml. Nhỏ 1ml canh khuẩn vừa chuẩn bị lên bề mặt thạch, láng cho canh khuẩn ựều ở mặt thạch. Chờ 5 phút cho canh khuẩn ngấm vào ựĩa thạch, dùng pipet hút bỏ phần canh khuẩn còn lại trên ựĩa thạch, ựể ựĩa thạch khô. Hoặc dùng tăm bông vô trùng thấm vào canh khuẩn ựã chuẩn bị, sau ựó ria cấy 3 ựường lên bề mặt thạch, mỗi ựường lệch nhau 600, cuối cùng ria ra xung quanh góc ựĩa thạch. đặt các khoanh giấy tẩm các loại kháng sinh lên bề mặt thạch (không quá 6 khoanh ựối với ựĩa petri 90mm). để tủ ấm ở 370C trong vòng 24 giờ, ựọc kết quả bằng cách dùng bút ựo ựường kắnh của vòng vô khuẩn phắa dưới mặt ựĩa.
Học viện Nông nghiệp Việt Nam Ờ Luận văn thạc sỹ Khoa học Nông nghiệp 33
2.4.6. Phương pháp thử nghiệm hiệu lực của 3 phác ựồ ựiều trị bệnh cho gà
Thử nghiệm hiệu lực của 3 phác ựồ ựiều trị bệnh do Staphylococcus
gây ra trên gà theo phương pháp phân lô so sánh.
Dựa vào kết quả kháng sinh ựồ, lựa chọn 3 loại kháng sinh mẫn cảm nhất ựể thử nghiệm hiệu quả trên gà. Chúng tôi chia gà làm 3 lô và thử nghiệm thuốc từ ựó tìm ra loại thuốc có hiệu quả cao nhất. Các chỉ tiêu theo dõi bao gồm: Triệu chứng lâm sàng, bệnh tắch, tỷ lệ chết, tỷ lệ khỏi bệnh, các chỉ tiêu kỹ thuật.
Thắ nghiệm ựược bố trắ theo sơ ựồ sau:
Chỉ tiêu theo dõi Phác ựồ 1 Phác ựồ 2 Phác ựồ 3
Tỷ lệ gà hết bị viêm khớp Tỷ lệ gà hết viêm da Tỷ lệ khỏi bệnh Tỷ lệ chết
2.4.7. Phương pháp xử lý số liệu
Số liệu thu thập ựược xử lý và phân tắch theo phương pháp thống kê sinh học và phần mềm Microsoft Excell 2007.
Học viện Nông nghiệp Việt Nam Ờ Luận văn thạc sỹ Khoa học Nông nghiệp 34
Chương 3
KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 3.1. Tỷ lệ mắc Staphylococcosis trên gà Ross 308
3.1.1. Tỷ lệ nhiễm Sta. aureus trên ựàn gà Ross 308 nuôi tại Trung tâm nghiên cứu gia cầm Thụy Phương. nghiên cứu gia cầm Thụy Phương.
Chúng tôi tiến hành theo dõi ựàn gà Ross 308 nuôi từ 01 ngày tuổi ựến 40 tuần tuổi tại Trung tâm nghiên cứu gia cầm Thụy Phương thông qua quan sát trực tiếp và mổ khám ựể xác ựịnh tỷ lệ gà nhiễm Sta. aureus . Kết quả theo dõi ựược trình bày ở bảng 4.1.
Bảng 4.1. Tỷ lệ nhiễm Sta. aureus trên ựàn gà Ross 308 nuôi tại Trung tâm nghiên cứu gia cầm Thụy Phương Số lượng gà theo dõi
(con)
Số lượng gà nhiễm
Sta. aureus(con) Tỷ lệ nhiễm (%)
3387 122 3,60
Kết quả trình bày ở bảng 4.1 cho thấy: trong các giai ựoạn tuổi tỷ lệ nhiễm bệnh do Sta. aureus gây nên là khá cao, số gà nhiễm Sta. aureus là 122 con, chiếm 3,60% trong tổng số gà theo dõi.
Như vậy, chúng ta có thể thấy rằng: tỷ lệ gà bị nhiễm Sta. aureus chiếm 3,60% tổng ựàn, ựiều này làm ảnh hưởng không nhỏ ựến năng suất của ựàn gà.
3.1.2. Tỷ lệ nhiễm Sta. aureus theo lứa tuổi
Như chúng ta ựã biết, mức ựộ cảm nhiễm bệnh cũng như khả năng chống ựỡ bệnh tật của gà ở mỗi lứa tuổi khác nhau thì khác nhau. Do vậy, ựiều tra tỷ lệ nhiễm Sta. aureus theo từng lứa tuổi gà ựể có kế hoạch phòng trị bệnh thắch hợp, nhằm nâng cao năng suất chăn nuôi gà.
Chúng tôi ựã tiến hành theo dõi bệnh do Sta. aureus qua các giai ựoạn tuổi. Kết quả ựược trình bày ở bảng 4.2.
Học viện Nông nghiệp Việt Nam Ờ Luận văn thạc sỹ Khoa học Nông nghiệp 35
Bảng 4.2. Tỷ lệ nhiễm Sta. aureus theo tuổi gà
Thứ tự Tuần tuổi Số lượng gà (con) Số lượng gà nhiễm (con) Tỷ lệ nhiễm % 1 0 Ờ 4 3500 20 0,57 2 5 Ờ 8 3465 5 0,14 3 9 Ờ 12 3445 21 0,61 4 13 Ờ 16 3412 8 0,23 5 17 Ờ 20 3390 5 0,15 6 21 Ờ 24 3369 7 0,21 7 25 Ờ 28 3351 11 0,33 8 29 Ờ 32 3332 12 0,36 9 33 Ờ 36 3311 13 0,39 10 37 Ờ 40 3290 20 0,61
Kết quả trình bày ở bảng 4.2. cho thấy:
Gà ở tất cả các giai ựoạn tuổi ựều bị nhiễm Sta. aureus. Tuy nhiên tỷ lệ nhiễm Sta. aureus là khác nhau trong các giai ựoạn tuổi. Cụ thể như sau:
Giai ựoạn gà từ 01 ngày tuổi Ờ 4 tuần tuổi: Trong 3500 gà theo dõi và kiểm tra có 20 gà nhiễm Sta. aureus chiếm tỷ lệ 0,57%. Trong quá trình theo dõi chúng tôi thấy ở giai ựoạn này gà chủ yếu mắc ở tuần tuổi thứ 1 và thứ 2.
đến giai ựoạn từ 5 Ờ 8 tuần tuổi tỷ lệ nhiễm Sta. aureus ở gà giảm
xuống chỉ còn 0,14%. đây là giai ựoạn gà nhiễm Sta. aureus thấp nhất trong các giai ựoạn theo dõi. Tuy nhiên ựến giai ựoạn 9 Ờ 12 tuần tuổi thì tỷ lệ nhiễm
Sta. aureus lại tăng cao. Trong 3445 gà theo dõi và kiểm tra có tới 21 gà nhiễm Sta. aureus tương ứng 0,61%. đây là giai ựoạn gà mắc bệnh cao nhất với lý do là trong giai ựoạn này gà ăn hạn chế với số lượng và chất lượng giảm rất nhiều ựể sau này có khả năng sinh sản cao do vậy sức sức ựề kháng của ựàn gà bị giảm, gà rất dễ nhiễm các bệnhtrong ựó có bệnh do Sta. aureus.
Học viện Nông nghiệp Việt Nam Ờ Luận văn thạc sỹ Khoa học Nông nghiệp 36 Các giai ựoạn tuổi tiếp theo từ 12 tuần tuổi ựến 36 tuần tuổi gà nhiễm
Sta. aureus giao ựộng và tăng dần trong khoảng từ 0,15% - 0,39%. đặc biệt giai ựoạn từ 37 Ờ 40 tuần tuổi tỷ lệ nhiễm lại tăng ựến 0,61% do gà trong giai ựoạn này ựang ựẻ ở ựỉnh cao do vậy sức ựề kháng giảm kết hợp với trọng lượng gà lớn và con trống cũng rất hay mắc bệnh trong giai ựoạn này do vậy tỷ lệ nhiễm cao. Trong 3290 gà theo dõi có 20 gà nhiễm bệnh.
Như vậy, chúng ta có thể thấy rằng: bệnh do Sta. aureus gây ra ở gà có tỷ lệ nhiễm khác nhau qua các giai ựoạn tuổi. Tuy nhiên người chăn nuôi cần ựặc biệt quan tâm ựến một số giai ựoạn tuổi như: tuần tuổi thứ 1 và thứ 2, giai ựoạn gà 9 Ờ 12 tuần tuổi, giai ựoạn gà 37 Ờ 40 tuần tuổi. đây là những giai ựoạn gà nhiễm Sta. aureus với tỷ lệ cao hơn. Ở các giai ựoạn này người chăn nuôi cần áp dụng các biện pháp phòng bệnh cho gà triệt ựể hơn, ựồng thời tăng cường công tác chăm sóc nuôi dưỡng ựàn gà ựể nâng cao sức ựề kháng, giảm khả năng mắc bệnh, từ ựó tăng năng suất trong chăn nuôi.
đồ thị 4.1 minh họa rõ hơn cho kết quả trình bày ở bảng 4.2.
Hình 4.1. Biểu ựồ tỷ lệ nhiễm Sta. aureus theo tuổi gà
20 - 24 24 - 28 28 - 32 32 - 36 36 - 40 Tuần tuổi gà 0.21 0.33 0.36 0.39 0.61 Tỷ lệ nhiễm (%) 0 0.1 0.2 0.3 0.4 0.5 0.6 0.7 0 - 4 4 - 8 8 - 12 12 -16 16 - 20 0.57 0.14 0.61 0.23 0.15
Học viện Nông nghiệp Việt Nam Ờ Luận văn thạc sỹ Khoa học Nông nghiệp 37
3.1.3 Tỷ lệ nhiễm Sta. aureus ở gà theo phương thức nuôi
để xác ựịnh phương thức nuôi có ảnh hưởng như thế nào ựến tỷ lệ nhiễm Sta. aureus ở gà, chúng tôi tiến hành theo dõi ựàn gà Ross 308 ựược
nuôi tại Trung tâm nghiên cứu gia cầm Thụy Phương theo 2 phương thức chuồng nuôi thông thoáng tự nhiên và chuồng nuôi khép kắn. Kết quả theo dõi ựược trình bày ở bảng 4.3.
Bảng 4.3 Tỷ lệ nhiễm Sta. aureus ở gà theo phương thức nuôi
Chuồng nuôi thông thoáng tự
nhiên Chuồng nuôi khép kắn
Tuần tuổi gà Số lượng gà theo dõi Số lượng hao hụt Số lượng nhiễm Tỷ lệ nhiễm (%) Số lượng gà theo dõi Số lượng hao hụt Số lượng nhiễm Tỷ lệ nhiễm (%) 13 -16 1662 8 4 0,24 1750 14 4 0,23 17 - 20 1654 11 3 0,18 1736 10 2 0,12 21 - 24 1643 11 3 0.18 1726 7 4 0,23 25 Ờ 28 1632 12 7 0,43 1719 7 4 0,23 29 Ờ 32 1620 13 7 0,43 1712 8 5 0,29 33 Ờ 36 1607 11 8 0,50 1704 10 5 0,29 37 Ờ 40 1596 15 12 0,75 1694 13 8 0,47 Tổng 1631 81 44 2,70 1720 69 32 1,86
Khi gà ựạt ựến 13 tuần tuổi, chúng tôi tiến hành phân gà làm hai lô và nuôi theo 2 phương thức khác nhau:
- Lứa 1: số lượng gà ban ựầu là 2000 con. đến tuần tuổi 13 hao hụt còn
Học viện Nông nghiệp Việt Nam Ờ Luận văn thạc sỹ Khoa học Nông nghiệp 38 + Nuôi chuồng sàn khép kắn với hệ thống máng ăn, máng uống tự ựộng 1000 con.
+ Nuôi chuồng thông thoáng tự nhiên 955 con.
- Lứa 2: số lượng gà ban ựầu là 1500 con. đến 13 tuần tuổi hao hụt còn
1457 con.
+ Nuôi chuồng sàn khép kắn 750 con.
+ Nuôi chuồng thông thoáng tự nhiên 707 con.
Kết quả theo dõi thấy: Gà ựược nuôi ở hệ thống chuồng nuôi thông thoáng tự nhiên có tỷ lệ nhiễm Sta. aureus cao hơn so với gà ựược nuôi trong hệ thống chuồng nuôi khép kắn. Cụ thể:
Với phương thức chuông nuôi thông thoáng tự nhiên: Trung bình trong tổng số 1631 gà theo dõi có 44 gà nhiễm Sta. aureus tương ứng với 2,7%.
Với phương thức nuôi hệ thống chuồng nuôi khép kắn: Trung bình trong 1720 gà theo dõi có 32 gà nhiễm Sta. aureus chiếm tỷ lệ 1,86%.
Như vậy có thể nói rằng việc nuôi gà theo phương thức chuồng nuôi khép kắn ựã hạn chế ựược tỷ lệ nhiễm Sta. aureus ở gà.
Theo chúng tôi, tỷ lệ gia cầm nhiễm Sta. aureus khác nhau ở 2 phương thức chăn nuôi là do: Gà ựược nuôi theo phương thức nuôi khép kắn ựược ựảm bảo về nhiệt ựộ và ẩm ựộ ổn ựịnh, mặt khác nuôi trong ựiều kiện khép kắn sẽ hạn chế ựược rất nhiều sự ảnh hưởng của các yếu tố làm lây lan mầm bệnh, vì vậy tỷ lệ mắc bệnh thấphơn . Gà ựược nuôi theo phương thức thông thoáng tự nhiên có nhiều ựiều kiện tiếp xúc với môi trường, việc thực hiện vệ sinh và phòng bệnh cho gà khó khăn, do ựó tỷ lệ gà nuôi theo phương thức thông thoáng có tỷ lệ nhiễm bệnh cao hơn.
Học viện Nông nghiệp Việt Nam Ờ Luận văn thạc sỹ Khoa học Nông nghiệp 39 0 0.5 1 1.5 2 2.5 3
Chuồng khép kắn Chuồng thông thoáng tự nhiên
Tỷ lệ nhiễm (%)
Phương thức nuôi 1,86
2,70
Hình 4.2. Biểu ựồ tỷ lệ nhiễm Sta. aureus ở gà theo phương thức nuôi
3.1.4. Tỷ lệ nhiễm Sta. aureus ở gà theo mùa vụ
để thấy ựược yếu tố mùa vụ có ảnh hưởng như thế nào ựến tỷ lệ nhiễm Staphylococcus ở gà chúng tôi ựã tiến hành theo dõi gà trong 2 vụ là vụ