2. TÌNH HÌNH NGHIÊN CỨU TRONG VÀ NGOÀI NƯỚC
2.4.5.Phương pháp xác ựịnh khả năng mẫn cảm với kháng sinh của
vi khuẩn.
Khả năng mẫn cảm với kháng sinh của chủng vi khuẩn phân lập ựược bằng phương pháp khuếch tán trên ựĩa thạch. Phương pháp tiến hành như sau:
Bước 1. Chuẩn bị môi trường
- Muller Hinton: cân 38 gam môi trường trong 1lắt nước cất, hấp ở 1210C trong 15 phút, ựể nguội, ựổ ựĩa petri 90mm.
- Khoanh giấy tẩm kháng sinh các loại.
- Nước sinh lý: cân 0,85g NaCl hòa tan trong 1000 ml nước cất, hấp ở 1210C trong 15 phút.
Bước 2. Chuẩn bị các thiết bị, máy móc, dụng cụ, hoá chất dùng trong thắ nghiệm.
- Thiết bị: Tủ ấm, tủ lạnh, tủ mát, tủ hấp sấy, cân, buồng cấy vô trùng.
- Dụng cụ: Pipet, ống nghiệm, chai lọ các loại, que cấy, tăm bôngẦ và hoá chất cần thiết trong phòng thắ nghiệm
Bước 3. Tiến hành thắ nghiệm: Thực hiện theo phương pháp so màu của Mc
Farland
Lấy 1 số khuẩn lạc vi khuẩn cần thử trên ựĩa thạch thắch hợp vào ống thủy tinh trong suốt ựã chứa 3ml nước sinh lý cho ựến khi có ựộ ựục bằng ống Mc Farland 0,5 Ờ tương ựương 1-1,5 x 108 vi khuẩn/ml. Nhỏ 1ml canh khuẩn vừa chuẩn bị lên bề mặt thạch, láng cho canh khuẩn ựều ở mặt thạch. Chờ 5 phút cho canh khuẩn ngấm vào ựĩa thạch, dùng pipet hút bỏ phần canh khuẩn còn lại trên ựĩa thạch, ựể ựĩa thạch khô. Hoặc dùng tăm bông vô trùng thấm vào canh khuẩn ựã chuẩn bị, sau ựó ria cấy 3 ựường lên bề mặt thạch, mỗi ựường lệch nhau 600, cuối cùng ria ra xung quanh góc ựĩa thạch. đặt các khoanh giấy tẩm các loại kháng sinh lên bề mặt thạch (không quá 6 khoanh ựối với ựĩa petri 90mm). để tủ ấm ở 370C trong vòng 24 giờ, ựọc kết quả bằng cách dùng bút ựo ựường kắnh của vòng vô khuẩn phắa dưới mặt ựĩa.
Học viện Nông nghiệp Việt Nam Ờ Luận văn thạc sỹ Khoa học Nông nghiệp 33