Tách dòng gen mã hóa kháng nguyên RoTAT 1.2 được thực hiện bằng cách gắn trực tiếp sản phẩm PCR đã được xử lý cắt đầu bằng vector tách dòng pJET1.2/blunt của hãng Fermentas. Phản ứng dựa vào đặc tính xúc tác hình thành liên kết nối hai đoạn ADN của enzym T4 ADN - ligasẹ Enzym này có nguồn gốc từ phage T4 xâm nhiễm Ẹ coli, có khả năng nối hai trình tự ADN cả đầu so le và đầu bằng. Phản ứng được thực hiện ở nhiệt độ 22ºC trong thời gian 10 phút. Đây là nhiệt độ thích hợp nhất cho enzym T4 ADN - ligase hoạt động.
Vector tách dòng pJET1.2/blunt được tách chiết từ dòng tế bào Ẹ coli DH5α/pJET1.2/blunt và được cắt mở vòng bằng enzym Klenow. Đây là vector tách dòng thế hệ mới của hãng Fermentas có kích thước gần 3kb (2974bp). Trên vector có gắn gen kháng sinh (bla) nên chỉ có những tế bào có mang vector này mới có thể sống được trên môi trường có Ampicillin. Đồng thời trên vector này có chứa gen gây chết eco47IR mã hóa cho nuclease phân hủy ADN nhân khi tồn tại trong tế bào vật chủ. Vì vậy, vector khi được gắn thêm gen ngoại lai sẽ làm mất đi hoại tính của enzym này dẫn đến sự không phân hủy ADN của tế bào chủ. Nhờ có eco471IR mà quá trình chọn lọc plasmid tái tổ hợp sẽ hiệu quả hơn.
Gen RoTAT 1.2 được thu nhận sản phẩm PCR có kích thước khoảng 205bp. Việc sử dụng enzym Taq polymerase để xúc tác cho phản ứng PCR sẽ tạo ra các sản phẩm có gắn thêm một adenin ở đầu '
3 .Gen RoTAT 1.2 được nối vào plasmid pJET1.2/blunt đã được mở vòng rồi được biến nạp vào tế bào
Ẹ coli chủng DH10b. Nhờ bộ máy tổng hợp của vi khuẩn, ADN plasmid tái tổ hợp được tạo ra với số lượng lớn các bản saọ Quá trình biến nạp vector tái tổ hợp vào tế bào khả biến được thực hiện bằng phương pháp sốc nhiệt. Vector pJET1.2/blunt có chứa gen mã hóa kháng kháng sinh Ampicillin cho phép dễ dàng phát hiện vector tái tổ hợp một cách đơn giản bằng sự phát triển của các khuẩn lạc trên môi trường có chứa kháng sinh Ampicillin với nồng độ 100µg/ml. Trong môi trường chọn lọc, nếu có gen ngoại lai được gắn vào vector thì thấy xuất hiện các khuẩn lạc màu trắng trên đĩa thạch. Trên đĩa thạch nuôi cấy vi khuẩn biến nạp, khuẩn lạc trắng được lựa chọn ngẫu nhiên
để chọn lọc các dòng khả năng mang gen mong muốn và tiến hành tách chiết ADN plasmid. Các ADN plasmid sau khi tách chiết được kiểm tra bằng điện di trên gel agarose 0,8%.