Bệnh tiên mao trùng trâu, bò xảy ra ở hầu khắp các tỉnh của Việt Nam, trong đó, mức độ mắc bệnh của trâu, bò nuôi ở miền núi cao hơn ở các tỉnh đồng bằng. Vì vậy, công tác chẩn đoán để phát hiện bệnh là điều hết sức quan trọng, đặc biệt đối với trâu, bò ở vùng sâu vùng xa, điều kiện dân trí thấp. Do đó, việc chế tạo Kit dạng CATT đã đáp ứng được công tác chẩn đoán bệnh tiên mao trùng ở các vùng khó khăn. Bên cạnh các tiêu chí độ nhạy, độ đặc hiệu, đơn giản, dễ sử dụng thì điều kiện bảo quản Kit cũng cần được quan tâm. Trong nghiên cứu này, chúng tôi xác định các thông số bảo quản Kit để đưa ra các điều kiện thích hợp nhằm có các khuyến cáo phù hợp cho người sử dụng.
Các yếu tố bảo quản Kit được nghiên cứu trong nội dung này gồm thời gian và nhiệt độ. Theo khuyến cáo bảo quản các loại sinh phẩm chẩn đoán miễn dịch học như phương pháp ELISA, phương pháp CATT, phương pháp IFAT,... thì Kit thường được bảo quản ở 4 - 8ºC trong 6 tháng. Tuy nhiên, do tình trạng cấp điện không thường xuyên ở các vùng miền núi nên chúng tôi bố trí thêm thí nghiệm đánh giá Kit ở nhiệt độ phòng của các mùa trong năm. Định kỳ hàng tháng kiểm tra độ nhạy, độ đặc hiệu và độ ổn định của Kit. Mỗi thí nghiệm được thực hiện liên tục trong 6 tháng, số mẫu huyết thanh dương tính chuẩn là 18, âm tính chuẩn là 34; số Kit sử dụng để chẩn đoán một mẫu là 3.
Kết quả theo dõi độ nhạy của Kit dạng CATT theo thời gian và nhiệt độ bảo quản để chẩn đoán bệnh tiên mao trùng (bảng 4.4): ở điều kiện bảo quản 4ºC, độ nhạy trung bình của phản ứng đạt giá trị cao nhất là 98,89% trong ba tháng đầu tiên, sau đó giảm xuống 97,78% ở tháng thứ 4 và đạt 96,67% sau 5 - 6 tháng bảo quản. Trong khi đó, độ nhạy của Kit khi bảo quản ở nhiệt độ phòng đạt 98,89% trong một tháng đầu, sau đó giảm liên tục qua các tháng bảo quản (95,56%; 94%; 93,33%; 92,22% lần lượt ở các tháng thứ 2; 3; 4; 5) và chỉ còn 88,89% ở tháng thứ 6. Sau 6 tháng bảo quản, độ nhạy của Kit giảm 2,2% ở 4ºC và giảm 10% ở nhiệt độ phòng. Kết quả trên tương đương với báo cáo của Verloo và cs (2000) [48].
Bảng 4.4: Độ nhạy của Kit CATT theo thời gian và nhiệt độ bảo quản
Tháng theo dõi trong năm 4ºC (% trung bình ± độ lệch chuẩn) Nhiệt độ phòng (% trung bình ± độ lệch chuẩn) Tháng thứ 1 98,89 ± 2,48 98,89 ± 2,48 Tháng thứ 2 98,89 ± 2,48 95,56 ± 2,48 Tháng thứ 3 98,89 ± 2,48 94,0 ± 0,00 Tháng thứ 4 97,78 ± 3,04 93,33 ± 2,48 Tháng thứ 5 96,67 ± 3,04 92,22 ± 3,04 Tháng thứ 6 96,67 ± 3,04 88,89 ± 3,83
Độ đặc hiệu của Kit CATT theo thời gian và nhiệt độ bảo quản (bảng 4.5) được thể hiện như sau: ở điều kiện bảo quản ở 4ºC và ở nhiệt độ phòng thì độ nhạy trung bình của phản ứng đạt giá trị cao nhất đều là 99,41%. Sau 6 tháng bảo quản độ đặc hiệu của Kit giảm 1,2% ở 4ºC và giảm 1,8% ở nhiệt độ phòng. Ở 4ºC, sau tháng thứ 2 và tháng thứ 3 độ đặc hiệu giảm 0,6%; trong khi đó ở nhiệt độ phòng thì độ đặc hiệu cũng giảm 0,6% nhưng chỉ sau một tháng. Trong điều kiện nhiệt độ phòng thì độ đặc hiệu của Kit giảm liên tục qua các tháng: giảm 0,6% của tháng thứ 2 so với tháng thứ nhất; tháng thứ 3 tiếp tục giảm 0,6% so với tháng thứ 2; trong 3 tháng cuối tiếp tục giảm 1,2%. Thực tế của các lần thí nghiệm cho thấy, các mẫu chẩn đoán dương tính giả có kết quả không rõ ràng, các mẫu nghi ngờ được chúng tôi xác định là dương tính. Có thể sau một thời gian bảo quản, các hạt latex kết dính không đặc hiệu nên khi thực hiện phản ứng ngưng kết kháng nguyên - latex cho kết quả không rõ ràng và gây ra các sai số.
Bảng 4.5: Độđặc hiệu của Kit CATT theo thời gian và nhiệt độ bảo quản
Tháng theo dõi trong năm 4ºC (% trung bình ± độ lệch chuẩn) Nhiệt độ phòng (% trung bình ± độ lệch chuẩn) Tháng thứ 1 99,41 ± 1,32 99,41 ± 1,32 Tháng thứ 2 99,41 ± 1,32 98,82 ± 1,61 Tháng thứ 3 98,82 ± 1,61 98,24 ± 1,61 Tháng thứ 4 98,24 ± 1,61 97.65 ± 1,32 Tháng thứ 5 98,24 ± 1,61 97.65 ± 1,32 Tháng thứ 6 98,24 ± 1,61 97,65 ± 1,32