Hình 3.11. Điện di SDS-PAGE 12,6% protein bền nhiệt DMP
Đường chạy M: Thang protein marker chuẩn #SM0431; Đường chạy 1: DMP
âm tính Rivalta và hàm lƣợng protein là 23 g/l; Đường chạy 2,3: DMP dƣơng tính Rivalta và hàm lƣợng protein tƣơng ứng là 46 và 64 g/l.
Kết quả điện di protein bền nhiệt theo phƣơng pháp SDS-PAGE trên hình 3.11 cho thấy hệ protein bền nhiệt trong DMP rất đa dạng. Số lƣợng băng (vạch) thu đƣợc dao động từ 6 đến 8 băng với độ đậm nhạt khác nhau. Mẫu DMP có hàm lƣợng protein là 23 g/l và âm tính Rivalta cho kết quả điện di xuất hiện 6 băng. Các mẫu còn lại có kết quả Rivalta dƣơng tính với lƣợng protein là 46 và 64 g/l xuất hiện 8 băng. Trong đó mẫu DMP dƣơng tính Rivalta (2, 3) thấy đều xuất hiện 2 băng ở kích thƣớc khoảng 102,5 kDa và 20,5 kDa nhƣng ở mẫu âm tính Rivalta không thấy xuất hiện 2 băng này. Đây có thể là cơ sở cho việc tìm ra những chỉ thị phân tử protein bền nhiệt cho chẩn đoán bệnh.
Nhƣ vậy giữa các mẫu dịch điện di thí nghiệm có sự khác nhau về số lƣợng, vị trí và độ đậm nhạt của các băng điện di chứng tỏ protein bền nhiệt trong DMP nghiên cứu đã biểu hiện tính đa hình. Số lƣợng và vị trí các băng đƣợc thể hiện cụ thể trong bảng 3.8.
Bảng 3.8. Thống kê sự xuất hiện các băng điện di protein bền nhiệt DMP Khoảng kích
thƣớc kDa
Số lƣợng băng xuất hiện ở
các đƣờng chạy điện di 1 2 3 102,5 0 1 1 84,2 1 1 1 58,2 1 1 1 45 1 1 1 25 1 1 1 20,5 0 1 1 16 1 1 1 14,4 1 1 1 Tổng 6 8 8
Hệ protein huyết thanh ngƣời là một hệ protein tƣơng đối toàn diện, phản ánh khá đầy đủ hệ protein trong dịch của cơ thể. Mặt khác, trong y học chẩn đoán huyết thanh thƣờng đƣợc sử dụng làm cơ sở so sánh và chẩn đoán lâm sàng. Do vậy chúng tôi tiến hành điện di phân đoạn protein bền nhiệt trong huyết thanh ngƣời bình thƣờng để so sánh với kết quả điện di protein bền nhiệt DMP nhằm có những cơ sở so sánh chẩn đoán khác nhau.
Đường chạy M: Thang protein marker chuẩn #SM0431; Đường chạy1: dịch
huyết thanh ngƣời bình thƣờng với hàm lƣợng protein tổng số là 74g/l sau khi xử lý thu protein bền nhiệt.
Khi so sánh kết quả điện di protein bền nhiệt DMP (hình 3.11) với kết quả điện di protein bền nhiệt huyết thanh ngƣời bình thƣờng (hình 3.12) nhận thấy ở mẫu huyết thanh ngƣời bình thƣờng xuất hiện 1 băng khá đậm ở kích thƣớc trên 116 kDa, 1 băng ở kích thƣớc 18,4 kDa mà ở các mẫu DMP không thấy xuất hiện. Ở các mẫu DMP xuất hiện 1 băng ở kích thƣớc khoảng 16 kDa trong khi không thấy ở mẫu huyết thanh. Ngoài 3 băng trên thì ở mẫu huyết thanh xuất hiện các băng tƣơng tự nhƣ đối với mẫu DMP âm tính với xét nghiệm Rivalta.