- NSKC: ngày sau khi ch ng n mb nh.
N gn 1: không có Trichoderma; gn 2: có Trichoderma.
các ng n r có s hi n di n c a ch ng T-OM2a và T-LV1a, m t đ
l i. i v i d-glucosamin, khi cây đ c t i vào vùng r (ng n 2) cho ch s OD c a chitinase và β-1,3-glucanase trong lá và r đ u cao h n so v i phun glucosamin tr c ti p lên lá (B ng 3.14 và 3.15). K t qu c ng cho th y ho t tính c a chitinase lá m nh h n so v i r (B ng 3.14).
B ng 3.15 M t đ quang(OD) c a β-1,3-glucanase trong lá và r cây quít Ti u 12 tu n sau khi ch ng Fusarium (4 tu n sau khi ch ng Trichoderma)
Nghi m th c Ng n 1 (R ) Lá Ng n 2 (R ) F/T-BM2a 0,095 d 0,080 bc 0,092 ef F/T-LV1a 0,112 c 0,156 a 0,128 c F/T-OM2a 0,151 b 0,147 a 0,162 b F/T-TO2a 0,089 de 0,072 cd 0,101 de F/T-TO2b 0,068 g 0,082 bc 0,078 g F/F+T-BM2a 0,081 ef 0,087 bc 0,092 ef F/F+T-LV1a 0,093 d 0,150 a 0,096 def F/F+T-OM2a 0,164 a 0,143 a 0,176 a F/F+T-TO2a 0,097 d 0,069 cd 0,104 d F/F+T-TO2b 0,077 fg 0,047 d 0,090 f F/F+Glucosamin(t i) 0,111 c 0,134 a 0,126 c F/F+Glucosamin (phun) 0,083 ef 0,101 b 0,087 fg F/F (đ i ch ng) 0,003 h 0,014 e (*) 0,002 h Trung bình 0,094 0,098 0,103 CV (%) 7,1 16,8 7,1
Ghi chú: TSKCF: Tu n sau khi ch ng Fusarium; TSKCT: Tu n sau khi ch ng Trichoderma. (*) Trong cùng m t c t, các s li u mang cùng ch cái theo sau thì không khác
bi t nhau đ ý ngh a 5% qua phép th Duncan. (F/F): ch ng Fusarium (F-OM2) ng n 1 và ng n 2.
(F/T): ch ng F-OM2 vào ng n 1, ch ng Trichoderma vào ng n 2.
(F/F+T): ch ng F-OM2 vào ng n 1, ng n 2 ch ng F-OM2 và Trichoderma. (F/F+Glucosamin): ch ng F-OM2 vào ng n 1, ng n 2 ch ng F-OM2 + t i glucosamin (ho c phun lên lá).
Chitinase và β-1,3-glucanase là nh ng protein liên quan đ n b nh lý (pathogenesis related proteins, PR-proteins), chúng gi vai trò quan tr ng trong vi c kích thích tính kháng b nh trên cây tr ng. Do đó kh n ng tích t các PR-protein này trong cây đ c dùng làm th c đo kh n ng kích kháng c a cây [133]. K t qu thí nghi m (B ng 3.14 và 3.15) cho th y giá tr OD đo
đ c c a chitinase và β-1,3-glucanase t hai ch ng T-OM2a và T-LV1a ho c do t i glucosamin vào vùng r ( ng n 2) đ u cao t ng ng v i kh n ng kích kháng và đ i kháng c a chúng đ i v i F. solani.
S hi n di n c a chitinase và β-1,3-glucanase cao (so v i đ i ch ng) r c a ng n 2 và trên lá ch ng t vi c x lý Trichoderma hay glucosamin đã giúp cây t o nên ch t kích kháng l u d n t r ng n 2 lên lá cây, và sau đó
đ c l u d n v r c a ng n 1, giúp cây quít Ti u đ kháng đ c v i n m b nh Fusarium ng n 1 (m t s Fusarium ng n 1 gi m so v i đ i ch ng).
Các chitinase do Trichoderma ti t ra (trong ng n 2) đã phân h y chitin c a vách t bào Fusarium thành các đ n phân t (monomer) c a chúng là glucosamin. Ch t này đã kích thích r cây ( ng n 2) sinh ra tín hi u kích kháng. Ch t kích kháng đã đ c d n truy n trong cây (tính l u d n c a kích kháng) và kích thích h mi n d ch c a các t bào các b ph n c a cây, đ ng th i t o ra tín hi u kích kháng là chitinase và β-1,3-glucanase lá và trong r cây ng n 1, n i không ti p xúc v i Trichoderma. K t qu n y t ng t v i nghi m th c ch t i d-glucosamin vào ng n 2 (thay vì Trichoderma). Nh v y, n m
Trichoderma trong ng n 2 đã phát huy kh n ng kích thích tính kháng b nh th i r l u d n (systemic acquired resistance) t ng t nh d-glucosamin.
S t ng h p chitinase và β-1,3-glucanase cao r (c 2 ng n) và lá cho th y cây quít Ti u có kh n ng t ng h p và l u d n ch t kích kháng, giúp phòng tr b nh v trí xa so v i vùng đ c kích kháng ban đ u. K t qu này phù h p v i nghiên c u tr c đây c a Benhamou và Theriault (1992)[18] v kh n ng kích kháng c a chitosan (m t polymer c a d-glucosamin) giúp ch ng b nh th i r do Fusarium trên cà chua và k t qu nghiên c u c a Yedidia và ctv. (2001)[156] v kh n ng kích kháng c a T. harzianum trên d a leo.
Hình 3.27 Thí nghi m chia r 2 ng n đ đánh giá kh n ng đ i kháng và kích kháng c a Trichodermađ i v i F. solani
Hình 3.28 R quít Ti u con b nhi m F. solani (F-OM2) 2 ng n và kh n ng ph c h i sau khi x lý
Trichoderma (T-OM2a) ng n 2.
Hình 3.29 R quít Ti u con b nhi m F. solani (F-OM2) 2 ng n và kh n ng ph c h i sau khi x lý
Trichoderma (T-LV1a) ng n 2.
Hình 3.30 Bi u hi n tri u ch ng b nh trên cây quít Ti u con khi b nhi m F. solani (F-OM2, bên ph i) và kh n ng ph c h i sau khi x lý Trichoderma
(T-TO2b) ng n 2 (bên trái).
Vi c x lý cây quít con b ng d-glucosamin (đ i ch ng +) c ng đã giúp kích thích tính kháng b nh th i r (do F. solani) trên các cây quít Ti u, hi u qu nh t khi vùng r đ c t i v i d-glucosamin sulfat (1,5 mg/g đ t, 7 ngày/l n).
C 5 ch ng Trichoderma (T-BM2a, T-LV1a, T-OM2a, T-TO2a và T- TO2b) đ u có kh n ng r cây quít Ti u t o ra hi u qu kích kháng l u d n ch ng b nh th i r , trong đó 2 ch ng đ t hi u qu kích kháng cao nh t là T- F-OM2 ng n 1 T-TO2b ng n 2 i ch ng F-OM2 (2 ng n)
OM2a và T-LV1a, bi u hi n qua s hi n di n c a chitinase và β-1,3- glucanase r và lá cây, v i tr s OD trong lá và r (c 2 ng n) đ u cao h n
đ i ch ng có ý ngh a th ng kê, qua đó đã giúp h n ch đ c s phát tri n c a n m b nh F. solani c 2 ng n 1 và 2.
¬ T ng quan gi a m t s khu n l c F. solani và m t đ quang (OD) c a hai enzyme chitinase và β-1,3-glucanase trong lá và r cây quít Ti u
Khi phân tích t ng quan và h i quy gi a m t s n m b nh và và m t đ
quang (OD) c a hai enzyme, k t qu cho th y có t ng quan ngh ch ch t ch gi a m t s khu n l c F. solani t i vùng r và giá tr OD c a hai enzyme chitinase và β-1,3-glucanase trong r và lá cây quít Ti u khi r cây đ c tiêm ch ng Trichoderma và x lý glucosamin (t i vào r ho c phun lên lá) (Hình 3.31). Nh v y, khi chitinase và β-1,3-glucanase hi n di n r cây càng cao thì m t s n m b nh F. solani càng th p và ng c l i.
Khi đ c kích kháng b ng các ch ng Trichoderma (ti t chitinase phân h y chitin c a vách t bào n m b nh) ho c b ng d-glucosamin, r cây s t ng h p chitinase và β-1,3-glucanase t i n i đ c x lý (r ng n 2). C 2 enzyme này đ u t ng quan ngh ch v i m t s khu n l c c a F. solani v i h s t ng quan gi a F. solani ( ) và chitinase là r2 = -0,535** (ph ng trình h i quy 2 = -3,874 X2 + 0,368) và β-1,3-glucanase là r'2 = -0,725** (ph ng trình h i quy '2= -3,923 X'2 + 0,554) (Hình 3.31).
Sau khi r đ c kích kháng, ch t kích kháng s l u d n lên lá và t i đây l i t o tín hi u gia t ng ho t tính c a hai enzyme v i h s t ng quan gi a F. solani ( ) (r ng n 2) và chitinase (lá) là r23 = -0,807** ( 23 = -3,346 X23 + 0,717) và β-1,3-glucanase (lá) là r'23 = -0,575** ( '23 = -2,940 X'23 + 0,418) và k đó h s t ng quan gi a m t s F. solani ( ) (r ng n 1) và chitinase (lá) là r13 = -0,858** ( 13= -3,346 X13 + 0,717) và β-1,3-glucanase (lá) là r'13 = -0,741**
( '13 = -2,342 X'13 + 0,607). T lá, ch t kích kháng ti p t c đ c chuy n v n xu ng vùng r c a ng n 1 (bi u hi n qua OD c a 2 enzyme r ng n 1), giúp r ph c h i và ch ng ch u đ c v i F. solani gây b nh v i h s t ng quan gi a F. solani ( ) và chitinase r là r1 = -0,571** ( 1 = -3,987 X1 + 0,535) và β-1,3-glucanase là r'1 = -0,802** ( '1 = -2,971 X'1 + 0,535) (Hình 3.31).
Tóm l i, c 5 ch ng Trichoderma tri n v ng và glucosamin đ u có kh n ng kích thích tính kháng b nh th i r cây quít Ti u (do F. solani), qua đó t o tín hi u v i chitinase và β-1,3-glucanase r gia t ng. Sau đó, ch t kích kháng
Hình 3.31 T ng quan gi a m t s khu n l c F. solani (gây b nh th i r cam quít) và ch s OD c a enzyme chitinaz và β-1,3-glucanaz trên lá và r quít Ti u 84 NSKCF (28 NSKCT) R ng n 1 (1) Ng n 1 Ng n 2 - F & Chit r : r( 2 = -3,874 X2 = -0,535** 2 + 0,368) - F & Gluc r : r'2 = -0,725** ( '2= -3,923 X'2+ 0,554) - F & Chit r : r1 = -0,571** ( 1 = -3,987 X1 + 0,535) - F & Gluc r : r'1 = -0,802** ( '1 = -2,971 X'1+ 0,535) Lá(3) R ng n 2 (2) - F & chit lá: r23 = -0,807 ** ( 23= -3,346 X23 + 0,717) - F & Gluc lá: r'23 = -0,575** ( '23 = -2,940 X'23 + 0,418) - F & chit lá: r13 = -0,858 ** ( 13= -3,346 X13 + 0,717) - F & Gluc lá: r'13 = -0,741** ( '13 = -2,342X'13 + 0,607) Ghi chú: (**): T ng quan m c ý ngh a 1% Chit: Enzyme chitinases
Gluc: Enzyme β-1,3-glucanase F: M t s khu n l c F. solani