Hàm lượng đường và hàm lượng tinh bột trong cây mầm lúa ở 0, 4, 8 ngày sau khi nuôi cấy trên môi trường MS 1/2 có hoặc không gây ngập úng hoặc ngập úng kèm xử lý 450C được ly trích và đo để khảo sát khả năng thích nghi của cây mầm trong điều kiện stress.
Xây dựng đường chuẩn
Dung dịch sucaroz và glucozo được pha chế theo các nồng độ 10, 20, 30, 40, 50, 60, 70, 80, 90, 100 µg/l. Nhuộm dung dịch đường bằng phenol 5% và H2SO4 đậm đặc theo tỉ lệ dung dịch đường : phenol : H2SO4 đậm đặc là 1 : 1 : 5 theo thể tích.
Sau khi nhuộm màu dung dịch đường, lắc đều, để yên 15 phút, tiến hành đo mật độ quang ở bước sóng 490 nm. Thu các giá trị đo được và vẽ đường chuẩn của sucaroz và glucozo theo 10 nồng độ khác nhau.
Đo hàm lượng đường trong cây mầm lúa
Cân 1 g trọng lượng tươi cây mầm rồi nghiền với 10 ml cồn 960, đun sôi cách thủy lọc lấy phần dịch. Phần bã ly trích với cồn 800 (lặp lại hai lần). Phần dịch được làm bay hơi bằng cách đun cách thủy cho cô cạn dung dịch, rồi pha loãng với nước theo một thể tích nhất định, ta thu được dịch trích đường.
Dịch trích đường được cho phản ứng với phenol 5% và H2SO4 đậm đặc (theo tỉ lệ 1 : 1 : 5).
Hàm lượng đường được tính bằng cách so sánh với đồ thị đường cong chuẩn sucaroz.
Đo hàm lượng tinh bột trong cây mầm lúa
Cân 1g trọng lượng tươi cây mầm rồi nghiền với 10 ml cồn 960, đun sôi cách thủy lọc lấy phần dịch. Phần bã ly trích với cồn 800 (lặp lại hai lần). Phần bã có chứa tinh bột được sấy ở nhiệt độ 600C. Đun cách thủy phần bã với 5 ml nước cất trong 15 phút, để nguội. Thêm 2 ml HClO4 9,2 N, khuấy đều trong 15 phút. Thêm nước cất vào cho đủ 10 ml và ly tâm 4000 vòng trong 30 phút. Thu được dịch lỏng 1.
Phần bã tiếp tục ly trích với 2 ml HClO4 4,6 N, khuấy đều trong 15 phút. Pha loãng thành 10 ml rồi ly tâm như trên. Thu được dịch lỏng 2, gộp chung dịch lỏng 1 và 2. Đem dung dịch tinh bột thu được pha loãng với nước theo một thể tích nhất định.
Dung dịch tinh bột được cho phản ứng với phenol 5% và acid sulfuric đậm đặc (theo tỉ lệ dung dịch đường : phenol : H2SO4 đậm đặc là 1 : 1 : 5).
Đo mật độ quang ở bước sóng 490 nm. Tính hàm lượng đường glucozo theo đường chuẩn glucozo.
Hàm lượng tinh bột được tính theo công thức:
a : lượng đường glucozo sau khi phân giải b : độ pha loãng
0,9 : hệ số chuyển đổi
n : trọng lượng mẫu được phân tích