Chương 2. ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU
2.3. Phương pháp thực nghiệm
2.3.1. Phương pháp bào chế pellet metformin hydroclorid.
* Bào chế theo phương pháp đùn - tạo cầu gồm các bước:
- Metformin hydroclorid, Avicel PH 101, lactose, talc, magnesi stearat được cân theo cụng thức mụ tả cho mỗi mẻ 100g và rõy qua rõy 180 àm rồi trộn đều thành hỗn hợp bột kép.
- Cho từ từ HPMC E6 hoặc PVP K30 trong một lượng nước thích hợp để làm tá dược dính.
- Cho từ từ tá dược dính vào hỗn hợp bột kép ở trên để làm ẩm khối bột, nhào kỹ, có thể dùng thêm nước để làm ẩm đến độ ẩm thích hợp.
- Ủ khối bột trong 15 - 60 phút, sau đó cho vào máy đùn - tạo cầu để tạo pellet.
- Sấy pellet ở 60oC trong 12h đến độ ẩm < 4%, sau đó rây lấy phân đoạn có kích thước từ 0,8 mm đến 1,20 mm.
* Thông số thiết bị:
- Tốc độ đùn: 30 vòng/phút.
- Cỡ mắt đùn: 1 mm.
- Tốc độ vo tạo cầu: 200 - 400 vòng/phút.
- Thời gian vo tạo cầu: 2- 4 phút.
2.3.2. Phương pháp bào chế pellet metformin hydroclorid giải phóng kéo dài Tiến hành bào chế pellet metformin hydroclorid giải phóng kéo dài (GPKD) bằng cách bao màng polyme kiểm soát tốc độ giải phóng dược chất sử dụng máy bao Caleva, quy mô mỗi mẻ 20 g.
* Thành phần màng bao kiểm soát giải phóng được thiết lập như sau:
Bảng 3: Thành phần màng bao kiểm soát giải phóng
Thành phần Tá dược sử dụng Tỷ lệ
Polyme tạo màng Eudragit RL 100, RS 100 dạng hạt
Khảo sát các tỷ lệ 1:9; 0,5:9,5; 0,25:9,75
Chất hóa dẻo TEC 10%, 15%, 20% kl/kl so với polyme
Chất nhũ hóa Span 80 10% kl/kl so với polyme
Chất chống dính Talc 30%, 40%, 50% kl/kl so với polyme
Dung môi Ethanol 10ml
Nước 45g
* Pha chế dịch bao:
Dịch bao được pha chế thành dạng hỗn dịch trong nước bằng cách:
- Hòa tan hoàn toàn polyme, chất hóa dẻo, chất nhũ hóa vào 10ml ethanol tuyệt đối.
- Đun nóng dung dịch trên đến 60 0C, phân tán dần dần dung dịch vào nước tinh khiết ở 60 0C, khuấy đều liên tục 30 phút đến khi hỗn dịch đồng nhất.
- Phân tán talc vào hỗn dịch trên bằng cách khuấy nhẹ liên tục trong 2h.
- Lọc qua rây 0,125 mm và duy trì khuấy từ liên tục trong suốt quá trình bao.
* Thông số bao:
- Tốc độ rung: 10- 15%
- Độ mở quạt gió: 60- 70%.
- Nhiệt độ bao: 30- 40 0C.
- Tốc độ bơm dịch: 38 - 42- 46,5 ml/h
2.3.3. Phương pháp đánh giá tiêu chuẩn chất lượng pellet
* Hiệu suất bào chế pellet
Hiệu suất bào chế pellet H được tính theo công thức sau:
H = 100 (%) Trong đó: H: Hiệu suất bào chế pellet
m: Khối lượng pellet thu được có kích thước 0,8 – 1,20 mm (g) M: Khối lượng pellet có độ ẩm < 4% thu được.
* Tốc độ chảy:
Tốc độ chảy của pellet và pellet GPKD được đo trên máy đo ERWEKA GTL với đường kính lỗ phễu 10 mm. Tốc độ chảy được tính theo công thức:
V = M t Trong đó: V: tốc độ chảy (g/s) M: khối lượng pellet (g) t: thời gian chảy của pellet (s)
* Xác định độ bở của pellet chưa bao: tiến hành trên máy đo ERWEKA TAR 20. Kết quả được tính như sau:
X (%) =
X : độ bở (%).
a : khối lượng pellet trước khi thử độ bở (g).
b : khối lượng pellet sau khi thử độ bở (g).
* Xác định độ ẩm: sử dụng phương pháp sấy đến khối lượng không đổi trên cân xác định độ ẩm nhanh Precisa XM 60 (Thụy Điển).
* Định lượng metformin hydroclorid trong pellet hoặc pellet GPKD:
Định lượng theo phương pháp đo quang tại bước sóng = 232 nm.
Mẫu thử: Nghiền pellet bao hoặc chưa bao thành bột mịn. Cân chính xác lượng bột chứa khoảng 100mg metformin hydroclorid cho vào bình định mức 100ml, thêm 60ml nước cất, siêu âm trong 15 phút, thêm nước cất vừa đủ tới vạch 100ml.
Lọc, bỏ 20ml dịch lọc đầu, lấy 10ml dịch lọc cho vào bình định mức 100ml, thêm M
m
a b a
nước cất đến vạch. Lấy 10ml dịch thu được cho vào bình định mức 100ml, thêm nước cất đến vạch.
Mẫu chuẩn: Cân chính xác khoảng 100mg metformin hydroclorid cho vào bình định mức 100ml, thêm 60ml nước cất, siêu âm trong 15 phút, thêm nước cất vừa đủ tới vạch 100ml. Lọc, bỏ 20ml dịch lọc đầu, lấy 10ml dịch lọc cho vào bình định mức 100ml, thêm nước cất đến vạch. Lấy 10ml dịch thu được cho vào bình định mức 100ml, thêm nước cất đến vạch.
Mẫu trắng: nước cất.
Đo mật độ quang của mẫu thử và mẫu chuẩn trên tại bước sóng = 232 nm.
Hàm lượng metformin hydroclorid trong mẫu thử được tính bằng phương pháp so sánh với mẫu chuẩn có nồng độ đã biết.
* Đánh giá khả năng giải phóng metformin từ pellet
Sử dụng máy thử độ hòa tan ERWEKA DT600 để đánh giá lượng metformin giải phóng sau những khoảng thời gian nhất định.
Điều kiện thử:
- Thiết bị: giỏ quay.
- Tốc độ quay: 100 1 vòng/phút.
- Môi trường thử: 900ml môi trường pH 6,8.
- Nhiệt độ môi trường thử: 37 0,50C.
- Thời gian lấy mẫu: 1h, 2h, 3h, 4h, 5h, 6h, 7h, 8h.
Tiến hành:
- Mẫu thử: cân khối lượng pellet tương ứng với khoảng 500mg metformin và thử khả năng giải phóng từ mẫu theo các điều kiện đã được mô tả ở trên. Tại thời điểm lấy mẫu, hút chính xác 10ml dịch cho vào bình đình mức 100ml, bổ sung nước cất vừa đủ thể tích, lọc, lấy 10ml dịch lọc cho vào bình định mức 100ml, thêm nước cất vừa đủ.
- Mẫu chuẩn: cân chính xác khoảng 50mg metformin hydroclorid, cho vào bình định mức 100ml, bổ sung dung dịch đệm phosphat pH 6,8 vừa đủ. Lọc, hút chính xác 10ml dịch lọc cho vào bình định mức 100ml, thêm nước vừa đủ. Lấy
chính xác 10ml dung dịch cho vào bình định mức 100ml, bổ sung nước cất vừa đủ.
- Mẫu trắng: nước cất.
Lượng metformin giải phóng tại các thời điểm được xác định bằng phương pháp đo mật độ quang ở bước sóng 232 nm và so sánh với dung dịch metformin chuẩn.
Từ kết quả định lượng, xác định lượng dược chất giải phóng theo công thức Nelson:
Cn = Cn0 + V0
x Cn-1
V
Cn : Nồng độ đã hiệu chỉnh của lần hút thứ n Cn0 : Nồng độ chưa hiệu chỉnh của lần hút thứ n Cn-1 : Nồng độ đã hiệu chỉnh của lần hút thứ n-1 V0 : Thể tích dịch hòa tan đã hút
V : Thể tích môi trường hòa tan
Mỗi công thức pellet được thử hòa tan 3 lần và lấy kết quả trung bình.
* Hiệu suất bao pellet:
Hiệu suất bao pellet được tính theo công thức:
Hb = m0 x (a-b)
x 100 (%) m x b
Hb : Hiệu suất bao pellet
m0 : Khối lượng pellet đem bao
m : Khối lượng chất rắn trong dịch bao
a : Hàm lượng dược chất trong pellet trước khi bao b : hàm lượng dược chất trong pellet sau khi bao
* Xác định độ dày màng bao.
Từ kết quả định lượng dược chất trong pellet metformin hydroclorid GPKD, xác định độ dày màng bao theo công thức:
Hm=( a -1) x 100%
b Trong đó:
Hm : Độ dày màng bao
A : Hàm lượng dược chất trong pellet trước khi bao B : hàm lượng dược chất trong pellet sau khi bao
2.3.4. So sánh sự giống nhau giữa 2 đồ thị biểu diễn giải phóng dược chất theo thời gian của mẫu thử và viên đối chiếu Glucophage XR 500mg.
Có nhiều phương pháp đánh giá mức độ tương đương giữa 2 đường cong biểu diễn sự giải phóng dược chất theo thời gian, tuy nhiên phương pháp thường dùng là sử dụng so sánh giá trị f2 do Cơ quan quản lý thực phẩm và dược phẩm Mỹ ban hành để đánh giá.
Công thức tính f2 như sau:
Trong đó:
n : số điểm lấy mẫu
Ri, Ti : % dược chất giải phóng tại thời điểm t của mẫu đối chiếu và mẫu thử Tiêu chuẩn đặt ra: hai đường cong được coi như tương tự nhau nếu f2 nằm trong khoảng từ 50 đến 100, giá trị f2 càng lớn thì hai đồ thị càng giống nhau.
Chương 3. THỰC NGHIỆM, KẾT QUẢ VÀ BÀN LUẬN
3.1. Xây dựng đường chuẩn của metformin hydroclorid trong dung dịch đệm phosphat pH 6,8 tại bước sóng 232nm.
3.1.1. Phổ UV của dung dịch metformin hydroclorid trong môi trường đệm phosphat pH 6,8.
Khi tiến hành quét phổ của dung dịch metformin hydroclorid có nồng độ 5àg/ml trong mụi trường đệm phosphat pH 6,8 trong khoảng bước súng 200 – 400nm thu được kết quả λmax = 232nm. (Phụ lục 1)
3.1.2. Xây dựng đường chuẩn biểu diễn mối quan hệ giữa mật độ quang và nồng độ metformin hydroclorid trong dung dịch đệm phosphat pH 6,8 ở bước sóng 232nm.
Cách tiến hành: Pha một dãy các dung dịch metformin hydroclorid có nồng độ 1; 2; 4; 6; 8; 10 (àg/ml) trong mụi trường đệm phosphat pH 6,8. Đo mật độ quang của các dung dịch này tại bước sóng 232nm thu được kết quả như sau:
Bảng 4: Mật độ quang của dung dịch metformin hydroclorid tại các nồng độ khác nhau
Nồng độ (àg/ml) 1,001 2,002 4,004 6,006 8,008 10,01 Mật độ quang (D) 0,085 0,170 0,321 0,481 0,644 0,793
Hình 3: Đồ thị biểu diễn sự phụ thuộc của mật độ quang vào nồng độ dung dịch metformin hydroclorid trong dung dịch đệm phosphat pH 6,8
y = 0.078x + 0.008 R² = 0.999
0 0.1 0.2 0.3 0.4 0.5 0.6 0.7 0.8 0.9
0 2 4 6 8 10 12
mật độ quang
nồng độ(àg/ml)
* Nhận xét: Kết quả khảo sát cho thấy: giữa mật độ quang đo được ở bước sóng 232nm và nồng độ dung dịch metformin hydroclorid có sự phụ thuộc khá chặt chẽ trong khoảng khảo sát với hệ số tương quan R2 ~ 1, như vậy có sự tương quan tuyến tính giữa nồng độ dung dịch metformin hydroclorid và mật độ quang. Do đó có thể dùng bước sóng = 232 nm để đo mật độ quang của dung dịch metformin hydroclorid để xác định nồng độ metformin hydroclorid trong phép thử độ hòa tan.