đỐI TƯỢNG, NỘI DUNG, NGUYÊN LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU
3.4.2.Phương pháp phân tắch tồn dư kháng sinh
3.4.2.1. Phương pháp lấy mẫu
Mẫu ựược lấy theo TCVN 4833-2002. Nguyên tắc chung: Lấy mẫu ựơn lẻ, ngẫu nhiên và mang tắnh ựại diện.
Bảng 3.2. Dung lượng mẫu thịt lợn ựược bán trên ựịa bàn Hà Nội Thành phố Hà Nội
Hình thức
phân phối thịt đông Anh Thanh Trì
Tổng số mẫu phân tắch
Chợ cóc 30 23 53
Chợ tập trung 21 30 51
Tổng 51 53 104
để tránh tắnh trạng mẫu ựược lấy từ cùng một trại hay một hộ chăn nuôi, việc lấy mẫu ựã ựược lên kế hoạch lấy liên tục trong 15 tuần khác nhau; mỗi tuần tại một hình thức phân phối thịt của một ựịa phương chỉ lấy 2 mẫu từ hai chợ thuộc hai xã ở cách xa nhau (vì nếu lấy hai mẫu trên cùng một chợ sẽ có nguy cơ lợn cùng một trại xuất bán).
Mẫu ựược lấy tại các quầy bán thịt ở các chợ chắnh (chợ cóc và chợ tập trung) trên ựịa bàn hai huyện ựại diện nơi ựã thực hiện ựiều tra (đông Anh, Thanh Trì). Tại mỗi quầy lấy 200g thịt, gói trong túi polyetylen, bảo quản trong bình ựá (0 - 4oC) rồi vận chuyển về phòng thắ nghiệm xay nhỏ bảo quản trong tủ âm 20oC ựến khi phân tắch.
3.4.2.2. Chiến lược phân tắch mẫu
* đối với các kháng sinh có qui ựịnh tồn dư tối ựa
Các mẫu kiểm tra sẽ trải qua ba bước (sàng lọc, hậu sàng lọc và phân tắch khẳng ựịnh ựịnh lượng chắnh xác). để nhận diện các mẫu nghi ngờ, tất cả các mẫu
thịt lợn ựược phân tắch sàng lọc (screening) bằng kắt Premi-Test. Các mẫu dương tắnh sẽ tiếp tục kiểm tra bằng phương pháp hậu sàng lọc ựặc hiệu (ELISA) ựể ựịnh nhóm. Các mẫu dương tắnh bước 2 sẽ ựược phân tắch khẳng ựịnh lại bằng phương pháp sắc ký lỏng hoặc sắc ký lỏng khối phổ. để kiểm tra kháng sinh cấm sử dụng trong thú y, các mẫu sẽ ựược phân tắch kiểm tra trực tiếp bằng phương pháp ELISA, nếu dương tắnh sẽ ựược phân tắch khẳng ựịnh bằng phương pháp sắc ký.
Theo kết quả ựiều tra, các kháng sinh thuộc nhóm (fluoro)Quinolone và Tetracyclines là hai nhóm ựược sử dụng tương ựối phổ biến trong chăn nuôi lợn. Tetracycline vừa ựược sử dụng ựể phòng trị bệnh vừa ựược sử dụng như chất kắch thắch sinh trưởng, trong khi các Quinolon chủ yếu dùng trong phòng trị bệnh. Vì lý do ựó, trong khuôn khổ nghiên cứu này các mẫu dương tắnh sau bước sàng lọc ựược phân tắch bằng phương ựặc hiệu (phân tắch hậu sàng lọc) (Tetra-Sensorệ Test dùng ựể phát hiện Tetracycline và ELISA ựể phát hiện các (fluoro)Quinolones). Các mẫu dương tắnh khi phân tắch bằng phương pháp ựặc hiệu tiếp tục ựược phân tắch