Thí nghiệm 2: Thí nghiệm nghiên cứu phương pháp LC/MS/MS dùng

Một phần của tài liệu đánh giá khả năng phát hiện βagonists trong thịt lợn bằng kit elisa (Trang 48 - 50)

2. Mục tiêu nghiên cứu của đề tài

2.3.2. Thí nghiệm 2: Thí nghiệm nghiên cứu phương pháp LC/MS/MS dùng

cho phân tích định lượng xác định β-agonists trong tht ln.

Thí nghim 2.1: Xác định giới hn phát hin (LOD) và gii hn định lượng (LOQ) ca phương pháp

Thêm dung dịch chuẩn Salbutamol, Clenbuterol vào mẫu thịt (mẫu trắng) để

nồng độ trong mẫu 0,1: 0,15: 0,2: 0,25 µg/kg. Xử lý mẫu và thực hiện phân tích trên thiết bị LC/MS/MS theo các điều kiện đã chọn. Tìm nồng độ chuẩn trong nền mẫu tối thiểu của Clenbuterol và Salbutamol (Cmin clen và Cmin sal) sao cho sau khi tách chiết, làm sạch, tiêm vào máy với thể tích 10 µL dung dịch, mũi sắc đồ khối có tỷ số

(T) của tín hiệu (S) so với nhiễu đường nền (N) đáp ứng được điều kiện:

S

3 ≤ T = ---- ≤ 15 Trong đó S là tín hiêu; N là nhiễu đường nền

N

Khi đó giới hạn phát hiện (LOD) được tính theo công thức:

Cmin

LOD = 3 x --- <15 Trong đó Cmin lànồng độ cho mũi sắc đồ

T có tỷ số T

Giới hạn định lượng (LOQ) được tính theo công thức: LOQ = 3 x LOD

Thí nghim 2.2: Xác định độ thu hồi (R%), độ chụm (CV%) ca phương pháp

Chuẩn bị mẫu thịt âm tính thêm chuẩn β-agonists (clenbuterol, salbutamol)

có nồng độ 0,4; 0,6; 0,8 µg/kg và nội chuẩn là 1ppb: Cân 5,0g ± 0.1g mẫu thịt đã

được xay nhỏ, đồng nhất cho vào ống ly tâm. Thêm 20; 30; 40 µl ở nồng độ 100

Học viện Nông nghiệp Việt Nam – Luận văn Thạc sỹ Khoa học Nông nghiệp Page 39

(salbutamol-d3, clenbuterol- d9) 100ppb; để yên 15 phút. Sau đó tiến hành chiết và làm sạch mẫu theo quy trình phân tích. Cuối cùng bơm dịch chiết lên hệ thống máy

LC/MS/MS và tính toán kết quả.

Đánh giá kết quả thí nghiệm theo quy định trongquyết định 657/2002/EC (Decision

657/EC, 2002):

- Độ thu hồi đạt yêu cầu khi giá trị tính nằm trong khoảng 40 -120% (Hàm

lượng chất≤ 1 ppb);

- Độ chụm đạt yêu cầu khi giá trị tính nằm trong khoảng ≤ 30% (Hàm lượng

chất≤ 1 ppb).

Thí nghim 2.3: Đảm bo cht lượng kết quả thử nghiệm ca phương pháp Bước 1. Kim tra h thng máy

Trước khi chạy mẫu, bơm dung môi ACN để kiểm tra sựổn định và ô nhiễm của máy.

Bước 2. Kim tra s nhim bn sau khi bơm lot mu

Cứ sau khi bơm một loạt 10 mẫu, bơm 01 mẫu ACN để kiểm tra sựổn định và ô nhiễm của máy.

Bước 3. Kim tra mu mù

Từng lô mẫu, bố trí 01 mẫu trắng, 01 mẫu dương tính đã biết nồng độ nhưng

người phân tích/chuẩn bị mẫu không được biết thông tin β-agonist (clenbuterol, salbutamol) có trong mẫu. Cụ thể như sau:

- Mẫu 1: Chuẩn bị mẫu thịt âm tính: Cân 5,0g ±0.1g mẫu thịt đã được nghiền nhuyễn cho vào ống ly tâm.

- Mẫu 02: Chuẩn bị mẫu thịt dương tính và đã kiểm phân tích để biết nồng

độ, thêm nội chuẩn salbutamol, clenbuterol để có nồng độ 1ppb: Cân 5,0g ±0.1g

mẫu thịt đã được nghiền nhuyễn cho vào ống ly tâm. Thêm 50 µl dung dịch nội chuẩn salbutamol, clenbuterol 100 ppb để yên 15 phút. Tiến hành chiết, làm sạch

mẫu theo quy trình phân tích và bơm lên máy để phân tích.

Đánh giá: Mẫu trắng phải cho kết quả âm tính; mẫu dương tính phải cho kết

Học viện Nông nghiệp Việt Nam – Luận văn Thạc sỹ Khoa học Nông nghiệp Page 40

Một phần của tài liệu đánh giá khả năng phát hiện βagonists trong thịt lợn bằng kit elisa (Trang 48 - 50)

Tải bản đầy đủ (PDF)

(84 trang)