Khi tế bào phõn chia thành cỏc cụm tế bào cú kớnh thước nhất ủịnh, lỳc ủú giữa chỳng hỡnh thành cỏc sợi liờn bào khi chuyển sang mụi trường tạo Microcallus (mụi trưuờng rắn), chỳng sẽ cảm ứng và phỏt triển thành khối microcallus.
Cỏc cụm Protoplast sau 3 – 4 tuần nuụi cấy ủược chuyển sang cỏc mụi trường cứng khỏc nhau, sau 4 tuần Microcallus sẽ ủược hỡnh thành. Ở ủõy chỳng tụi tiến hành thử nghiệm trờn cỏc loại mụi trường tạo microcallus khỏc nhau (OX1, OX2, OX3, OX4, OX5), kết quả cho thấy trờn cỏc mụi trường khỏc nhau sẽ cho chất lượng cũng như số lượng Microcallus khỏc nhau.
Dũng B186 sau 4 tuần phõn chia trong mụi trường lỏng (24a hoặc 26b) ủược chuyển sang mụi trường cứng tạo microcallus, ta ủược kết quả sau:
Trường ðại học Nụng nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sỹ khoa học nụng nghiệp……… 49
- Mụi trường OX5 cho phản ứng cảm ứng tạo microcallus cao nhất, cỏc microcallus tạo thành với mật ủộ dày ủặc, sau 4 tuần nuụi cấy trờn mụi trường cứng thỡ hỡnh thành cỏc hạt gợn trắng trong, cỏc hạt này tiếp tục phỏt triển tăng dần về kớch thước hỡnh thành Microcallus.
- Trờn mụi trường OX1, OX2, OX3 lại cho phản ứng hỡnh thành Microcallus thấp nhất, cỏc cụm tế bào cú thể phỏt triển tiếp thành Microcallus trờn mụi trường này chiếm tỷ lệ rất thấp. Mặt khỏc thời gian ủể hỡnh thành Microcallus dài hơn nhiều so với OX5, trung bỡnh sau 6 – 7 tuần thỡ hạt Microcallus mới hỡnh thành.
- OX4 cũng cho tỷ lệ Microcallus cao nhưng vẫn thấp hơn so với OX5, cỏc Microcallus trờn mụi trường này sau một thời gian cú màu vàng, sức sống kộm.
Kết luận: OX5 là mụi trường thớch hợp nhất ủể cảm ứng tạo Mirocallus. Song song với việc tỡm ra mụi trường thớch hợp ủể tạo Microcalus, chỳng tụi tiến hành nghiờm cứu ủể tỡm ra thời gian cấy chuyển thớch hợp cỏc protoplast ủang phõn chia sang mụi trường ủể kớch thớch tạo Microcallus.