4. KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN
4.5.3Sự phát triển của phôi sau ñông lạnh-giải ñông
ðể ñánh giá sự phát triển của phôi sau khi giải ñông, phôi ñược chuyển vào môi trường nuôi cấy và giữ trong tủ nuôi. Sau 3 giờ ñánh giá sự hồi phục của phôi sau giải ñông: dùng kính hiển vi soi nổi ñánh giá dựa vào trạng thái của khối tế bào phôi. Nếu khối tế bào phôi giãn ra, sáng ñều thì phôi còn sống, nếu khối tế bào phôi co nhỏ lại thì phôi ñã chết.
Sau 48 giờ ñánh giá sự phát triển của phôi sau giải ñông: nếu phôi tiếp tục phát triển ta quan sát ñược phôi ở giai ñoạn thoát màng dưới kính hiển vi soi nổi, nếu phôi giữ nguyên trạng thái trước ñông lạnh tức là phôi chết hoặc thoái hoá. Sự phát triển của phôi sau giải ñông ñược trình bày qua bảng 4.14.
Sau khi tiến hành nuôi cấy, sau 3 giờ có 64 phôi phát triển ñạt tỷ lệ 71,11% và sau 48 giờ nuôi cấy có 58 phôi phát triển ñến giai ñoạn thoát màng ñạt tỷ lệ 64,44%.
Bảng 4.14 Sự phát triển của phôi sau ñông lạnh-giải ñông
Kết quả Chỉ tiêu
Số lượng (n) Tỷ lệ (%)
Phôi sau giải ñông ñưa vào nuôi cấy 90 100
Phôi phát triển 64 71,11
Phôi thoát màng 58 64,44
Kết quả trên của chúng tôi không sai khác nhiều so với kết quả của một số tác giả ñã báo cáo. Theo Lazar và cs (2000)[34] ñã thông báo, ñông lạnh
phôi bò tạo ra trong ống nghiệm bằng phương pháp thuỷ tinh hoá, tỷ lệ phôi phát triển ñến giai ñoạn thoát màng là 69,20%.
Phương pháp ñông lạnh thuỷ tinh hoá là phương pháp ñông lạnh mới
ñược nghiên cứu trong những năm gần ñây song kết quả cũng tương ñương
các phương pháp ñông lạnh ba bước và một bước. Theo Lưu Công Khánh và cs (2003)[5], khi ñông lạnh phôi bò in-vivo với 10% Glycerol tỷ lệ phôi sống sau giải ñông là 80,95%. Hasler và cs (1997)[29] ñông lạnh phôi bò tạo ra trong ống nghiệm với chất bảo vệ lạnh là 10% Glycerol trong môi trường PBS, sau giải ñông và nuôi cấy in-vitro 24 giờ có 78,80% số phôi hồi phục và phát triển trong ñó có 69,20% phôi thoát màng. Khi tác giả này sử dụng 1,5M Ethylen glycol trong môi trường PBS ñể ñông lạnh phôi bò tạo ra trong ống nghiệm thì tỷ lệ phôi thoát màng là 62,40% thấp hơn khi sử dụng 10% Glycerol.
Phương pháp ñông lạnh thuỷ tinh hoá có ưu ñiểm thời gian ñông lạnh- giải ñông nhanh, không cần thiết bị ñắt tiền dễ thực hiện tại cơ sở ñồng thời
ñòi hỏi trình ñộ kỹ thuật cao và ñiều quan trọng là tỷ lệ phôi sống sau ñông
Hình 4.9. Phôi dâu loại A Hình 4.10. Phôi dâu loại B