đông lạnh phôi có thể chia làm hai phương pháp: ựông lạnh chậm và
ựông lạnh nhanh.
đông lạnh chậm là phương pháp mà ở ựó quá trình làm mất nước nội bào và việc hạ nhiệt ựộ có kiểm soát xảy ra chậm trước khi phôi ựược chuyển
vào bảo quản trong nitơ lỏng. đối với phương pháp ựông lạnh chậm, phôi ựược chuyển vào môi trường có chứa chất bảo vệ lạnh theo nhiều bước với nồng ựộ chất bảo vệ lạnh tăng dần hay chuyển thẳng vào môi trường ựông lạnh có nồng ựộ chất bảo vệ lạnh thắch hợp. Thời gian cân bằng trong phương pháp này thường 10-30 phút. Sau khi cân bằng phôi ựược ựông lạnh với tốc ựộ hạ nhiệt 0,3oC/phút xuống nhiệt ựộ -32oC hay -35oC và từ nhiệt ựộ này phôi ựược chuyển thẳng vào nitơ lỏng (-196oC).
Vắ dụ chuyển phôi vào dung dịch glycerol 6 bước với nồng ựộ tăng dần 0,25M; 0,5M; 0,75M; 1M; 1,25M và 1,5M hay 3 bước 0,47M; 0,93M; 1,4M glycerol và thời gian cân bằng ở mỗi bước khoảng 5 phút hay 1 bước vào dung dịch 1,8 ethylene glycol và cân bằng 15 phút. Sau ựó cọng rạ chứa phôi ựược chuyển thẳng vào máy ựông lạnh và việc tạo ựá ựược thực hiện ở nhiệt ựộ -3oC ựến -7oC. Tạo mầm tinh thể nước (seeding) là thuật ngữ ựược ựể mô tả việc hình thành tinh thể ựá có kiểm soát ở nhiệt ựộ lạnh, bằng cách chạm panh ựã ựược nhúng trước vào nitơ lỏng vào thành của cọng rạ. Ngay sau khi tạo mầm tinh thể ựá, ựá sẽ ựược hình thành nhanh chóng trong toàn bộ cọng rạ chứa phôi và việc hạ nhiệt ựộ vẫn ựược thực hiện với tốc ựộ 0,3oC/phút xuống - 35oC, từ nhiệt ựộ này phôi ựược chuyển thẳng vào nitơ lỏng ựể bảo quản.
đông lạnh nhanh là những phương pháp ựông lạnh mà thời gian từ lúc khử nước nội bào ựến lúc kết thúc quá trình ựông lạnh xảy ra rất nhanh. Phôi sau khi ựã ựược khử nước nội bào ựược chuyển thẳng vào nitơ lỏng mà không cần phải sử dụng máy ựông lạnh có kiểm soát nhiệt ựã ựược lập trình sẵn.
Trong gần 20 năm cuối thế kỷ XX, cùng với sự phát triển của công nghệ sinh học và công nghệ thông tin ựã góp phần hiện ựại hoá kỹ thuật ựông lạnh bằng chương trình hoá các giai ựoạn ựông lạnh, nhiều loại thiết bị tự ựộng ựã ựược chế tạo. Hiện nay có nhiều loại máy ựông lạnh phôi trong ựó có hai loại ựược sử dụng phổ biến nhất là:
Loại sử dụng rượu methanol ựựng trong hộp làm lạnh và nối với hệ thống làm lạnh như Biocool của Mỹ.
Loại làm lạnh bằng nitơ lỏng trong một hộp nối liền với bộ phận ựiều khiển máy vi tắnh như Freezer control của Úc.
Các loại máy ựều ựược cài ựặt chương trình ựông lạnh khác nhau ựể phù hợp với phôi của từng loại ựộng vật có vú.
Nguyen và cs (1984)[17] ựã ựề xuất một khả năng ựông lạnh nhanh hay siêu nhanh trên cơ sở thay thế việc mất nước tăng dần bởi nhiệt ựộ thấp bằng mất nước bộ phận nhanh ở nhiệt ựộ phòng. Dựa trên nguyên tắc này, một phương pháp ựông lạnh nhanh, ựơn giản trong nitơ lỏng ựược thực hiện bằng cách làm mất nước một phần (1-2 phút) ở nhiệt ựộ phòng và cân bằng ở nhiệt ựộ -30oC ựã ựược công bố.
Một trong những phương pháp ựông lạnh nhanh ựược nghiên cứu rộng rãi hiện nay là phương pháp thuỷ tinh hoá (vitrification). Thuỷ tinh hóa là thuật ngữ chỉ quá trình ựông cứng mà không tạo thành tinh thể ựá, không có sự cô ựọng các chất hoà tan như trong các phương pháp ựông lạnh truyền thống, có sự tăng ựột ngột sự ựặc quánh (viscovity) trong môi trường lưu phôi, tạo nên chất rắn dạng thuỷ tinh. Ưu ựiểm của phương pháp này là thời gian ựông lạnh nhanh, không cần thiết bị ựông lạnh ựắt tiền và ựiều quan trọng là tỷ lệ phôi sống sau ựông lạnh và giải ựông cao.