3. NỘI DUNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU
3.3.1Thu tế bào trứng từ bò sống bằng máy siêu âm
Là phương pháp thu tế bào trứng từ con vật sống với sự trự giúp của máy siêu âm dùng trong các kỹ thuật hỗ trợ sinh sản ở người.
Những bò tốt ñã ñược lựa chọn về mặt di truyền sẽ ñược sử dụng máy siêu âm hoặc khám qua trực tràng ñể xác ñịnh khả năng cho tế bào trứng, sau ñó tiến hành thu tế bào trứng. Thu tế bào trứng với sự trợ giúp của máy siêu âm ñược tiến hành mỗi tuần một lần. Các bước tiến hành như sau:
Con bò ñưa vào khai thác ñược cố ñịnh vào giá, lấy hết phân, rửa sạch sau ñó sát khuẩn âm hộ và khu vực xung quanh.
Chuẩn bị hệ thống máy siêu âm, nối ñầu dò âm ñạo vào máy, nối kim hút tế bào trứng (kim 16G dài 55 cm), ñặt máy tạo áp suất ở 120mmHg, tương ñương dòng chảy 25ml/phút. Chuẩn bị môi trường hút tế bào trứng (mDPBS) có bổ sung 50 UI/ml heparin và 5% huyết thanh bê và kháng sinh (100.000UI Penicinllin/ml và 100µg Streptomycin/ml) duy trì ở 37oC bằng máy ổn nhiệt.
Người thao tác một tay ñưa vào trực tràng kiểm tra buồng trứng, xác ñịnh vị trí của buồng trứng, vị trí các nang trứng rồi ñưa buồng trứng về phía ñầu dò, quan sát nang trứng trên màn hình máy siêu âm, ñến số nang trứng có mặt trên buồng trứng. Trước khi hút dịch nang trứng, hút một ít dung dịch hút trứng ñể làm trơn hệ thống kim và ống dẫn, sau ñó một tay ấn nhẹ kim chọc hút vào lòng nang trứng. Thao tác này diễn ra nhẹ nhàng, các hình ảnh kim hút chọc vào nang hiện rõ trên màn hình máy siêu âm giúp người thao tác ñiều chỉnh chính xác và nhịp nhàng kim hút.
Sau khi chọc hút 2-4 nang trứng, rút kim ra, hút dung dịch thu tế bào trứng ñể tế bào trứng chảy vào ống falcon, tiến hành hút lập lại ñến khi không còn nhìn thấy nang trứng nào trên buồng trứng thì chuyển qua buồng trứng còn lại. Dịch hút ñược thu vào ống ly tâm 50ml và duy trì ở nhiệt ñộ 37oC bằng máy ổn nhiệt. Sau khi hút xong một buồng trứng ñưa ngay về phòng thí nghiệm, lọc bằng cốc lọc Emcon có ñường kính lỗ lọc 20µm, khoảng 10ml dung dịch còn lại ñược chuyển vào ñĩa petri vô trùng có ñường kính 90mm ñể soi tìm tế bào trứng.Việc tìm và làm sạch tế bào trứng ñược thực hiện dưới kính hiển vi soi nổi.