Sau khi biến nạp vào tế bào biểu hiện E. coli BL21 (DE3) một số dịng tế bào mang plasmid tái tổ hợp pET22-IL-2 đƣợc biểu hiện để kiểm tra khả năng tổng hợp của protein IL-2. Dịch protein tổng số đƣợc đƣa về cùng giá trị số lƣợng tế bào (OD=10) sau đĩ đem biến tính và tiến hành điện di SDS-PAGE rồi nhuộm
comassie, và tiến hành phƣơng pháp xác định IL-2 đặc hiệu nhờ phản ứng kháng nguyên kháng thể Western blot.
Hình 3. 2: Kết quả kiểm tra khả năng biểu hiện IL-2 của một số dịng tế bào vi khuẩn tái tổ hợp mang plasmid pET22-IL-2.
A: kết quả SDS-PAGE nhuộm comassie; B: kết quả Western blot. Đƣờng chạy M: thang chuẩn Protein (Fermentas);
Đƣờng chạy (+): IL-2 của Trung Quốc
Đƣờng chạy 1 đến 5: Các dịng vi khuẩn E. coli tái tổ hợp mang vector tái tổ hợp Đƣờng chạy 6: dịng E. coli tái tổ hợp mang vector tái tổ hợp khơng đƣợc cảm ứng IPTG.
Đƣờng chạy 7: dịng E. coli tái tổ hợp mang vector pET22 khơng mang gene.
Kết quả trên Hình 3.2 A cho thấy cả 5 dịng tế bào tái tổ hợp đều xuất hiện băng tƣơng đối nhỏ ở vị trí khoảng 15 kDa (đúng với kích thƣớc của đối chứng dƣơng là IL-2 Trung Quốc) cả ở trên bản gel nhuộm comassie và xuất hiện băng đặc hiệu khi tiến hành Western blot. Các dịng 7 khơng mang gene il2 và dịng 6 khơng cảm ứng bằng IPTG khơng xuất hiện băng đặc hiệu ở màng PVDF. Kết quả trên Hình 3.2B cho thấy các dịng 2,4 là những dịng cĩ băng đậm nhất ở vị trí 15 kDa, và dịng số 4 cĩ khả năng tổng hợp IL-2 mạnh nhất. Do đĩ dịng số 4 đƣợc chọn làm dịng biểu hiện cho các bƣớc tiếp theo.