- Phương pháp định lượng ɤ- oryzanol trong chế phẩm ɤ- oryzanol :
Sấy khô sản phẩm này là 105°C trong 1 giờ, lấy 0,01g sản phẩm mẫu này hòa tan trong 80 ml của n-heptan, thêm n – heptane đủ 100ml, ( hòa tan hỗn hợp ở nhiệt độ phòng với sóng siêu âm ). Lấy 10ml đung dịch pha được, sau đó bổ sung thêm n-heptan để được 100ml. Dung dịch pha được đem ở bước sóng 320nm.
Hàm lượng ɤ- oryzanol (%) = E x 100 W x 359 E: Chỉ số hấp thụ
W: trọng lượng (g) ɤ- oryzanol trong 100 ml dung dịch mẫu được sử dụng đểđo. 359: hệ số của ɤ- oryzanol hấp thụ
- Xác định hàm lượng ɤ- oryzanol thô
Cám gạo đem trích ly với dung môi đã lựa chọn. Dịch trích thu được đem cô chân không đuổi kiệt dung môi. Phần còn lại trong bình cô là lượng ɤ- oryzanol thô. Được tính theo công thức sau:
Học viện Nông nghiệp Việt Nam – Luận văn Thạc sỹ Khoa học Nông nghiệp Page 45
Trong đó:
X: Hàm lượng ɤ- oryzanol thô (%) M1: Khối lượng nguyên liệu (g)
M2: Khối lượng ɤ- oryzanol thô thu được (g) W: Độẩm nguyên liệu (%)
- Xác định hàm lượng ɤ- oryzanol trong nguyên liệu
Cân 100g nguyên liệu cho vào bình khô, sạch, có nút đậy. Sau đó rót 300g cồn 960, đậy nút và để vào tủ mẫu. Sau một thời gian nhất định lấy ra, gạn lấy dịch chiết để nghiên cứu.
Dịch chiết được rót sang bình khác, còn bã lại đem ngâm lại vào cồn ngâm đến khi thử dịch không còn ɤ- oryzanol thì dừng lại. Dịch chiết đem đi làm sạch: Dùng pipet hút 100 ml dịch chiết vào phễu chiết. Tiếp đó cho vào phễu chiết 200ml chloroform, lắc mạnh trong một phút. Để hỗn hợp cho phân thành 2 lớp. Tháo lớp dịch chiết nước (phần phía dưới) sang bình phễu chiết khác. Sau đó lại cho 500ml ethyl acetate vào lắc tiếp để lắng cho phân thành 2 lớp. Tháo phần chiết nước ra giữ phần nổi ở trên. Dồn 2 lần dịch chiết nước lại thử xem trong dịch còn ɤ - oryzanol không bằng cách cho từ từ vài giọt NaOH 10% vào. Nếu thấy dịch không còn màu vàng sáng thì thôi không cho ethyl acetate vào nữa do không còn ɤ- oryzanol. Nếu còn thì cho thêm ethyl acetate vào để thu hồi phần ɤ- oryzanol. Phần còn lại trong phễu chiết đem đun cách thủy đến khối lượng không đổi thì ta thu được hoạt chất. Khi đó xác định được hoạt chất có trong nguyên liệu.
Xác định hàm lượng ɤ- oryzanol chúng tôi xác định bằng phương pháp đo quang phổở bước sóng 280 – 400 nm, mô tả bởi (Bucci et al., 2003) 5, bằng máy đo quang phổ TASCO V – 530, TASCO Tổng công ty, Nhật Bản.
Hàm lượng Gamma trong nguyên liệu được tính theo công thức sau: X = x 100
Học viện Nông nghiệp Việt Nam – Luận văn Thạc sỹ Khoa học Nông nghiệp Page 46
Trong đó:
G1: Khối lượng dịch chiết (g)
G2: Khối lượng hoạt chất thu được (g)
X: Hàm lượng ɤ- oryzanol có trong nguyên liệu (%)
- Phương pháp tinh chếɤ- oryzanol : (Xu and Godber, 1990)
Cám gạo sau khi trích ly với dung môi trong điều kiện trích ly thích hợp. Dịch trích ly đem cô chân không đuổi kiệt dung môi thì thu đươc dầu cám gạo thô. Dầu thô được xà phòng hóa với NaOH, trung hòa kiềm dư bằng Na2CO3. Dịch xà phòng hóa đem sấy đối lưu và tạo sơi xà phòng khô. Sợi xà phòng khô đem trích ly với ethyl acetate, trích bằng hệ thống soxhlet. Dịch trích ly đem cô để thu phần không bị xà phòng hóa. Tiếp tục hòa dịch trở lại với dung môi ethylacetate và methanol. Rồi lọc tách sáp và thu dịch lọc. Dịch lọc thu được cô bay hơi hết dung môi. Sau đó kết tinh ɤ- oryzanol bằng dung môi hỗn hợp methanol/acetone. Thu được ɤ- oryzanol tinh khiết. Xác định ɤ- oryzanol tinh chế theo phương pháp của (Bucci et al., 2003) Để xác định hàm lượng ɤ- oryzanol chúng tôi xác định bằng phương pháp giống nhưđịnh lượng ɤ- oryzanol trong chế phẩm.
Hàm lượng hoạt chất tinh chếđược tính theo công thức sau: X = x 100
Trong đó:
M1:Hàm lượng hoạt chất thô đem tinh chế (g) M2: Hàm lượng hoạt chất tinh chế (g)
X: Hàm lượng hoạt chất tinh chế (%)