theo các nồng độ pha loãng 1/100, 1/1000, 1/10000; ủ 37oC, 60 phút. Rửa màng 1 lần với A2, 2 lần với A1.
Chuẩn bị kháng thể thứ cấp trước khi dùng. Cho 500 μl dịch kháng thể thứ cấp pha loãng 1/15000, ủ 37oC, 60 phút. Rửa màng 2 lần với A2,1 lần với A1.
Chuẩn bị dung dịch DAB ngay trước khi dùng. Ủ màng trong 500 μl dung dịch DAB ở 37oC cho tới khi tín hiệu màu xanh xuất hiện trên màng. Ngừng phản ứng bằng cách rửa màng ba lần với dung dịch A1. Đánh giá kết quả ngay khi màng còn ở trong dung dịch rửa hoặc khi màng đã được lấy ra và làm khô ở nhiệt độ phòng.
2.4.8. Phương pháp xác định khả năng ức chế Streptococcus iniae của IgY tinh sạch sạch
Khả năng ức chế vi khuẩn của IgY được tiến hành theo phương pháp của Mahdavi (2010)[22]. Vi khuẩn được nuôi qua đêm ở 370C, dịch vi khuẩn sau khi nuôi được bổ sung vào môi trường mới để đạt nồng độ mong muốn. Bổ sung kháng thể IgY tinh sạch vào môi trường vừa cho vi khuẩn để đạt được nồng độ thích hợp. Nuôi vi khuẩn trên máy lắc và sau khoảng thời gian nhất định kiểm tra sự phát triển của vi khuẩn.
Tiến hành
Chuẩn bị dịch vi khuẩn nuôi qua đêm, cho 20 µl dịch vi khuẩn vào 5 ml môi trường TSB để đạt nồng độ khoảng 107 CFU/ml.
Cho dịch kháng thể tinh sạch vào môi trường vừa cấy vi khuẩn để đạt nồng độ 50 µg/ml, 100 µg/ml, 150 µg/ml, 200 µg/ml, 250 µg/ml. Ống đối chứng cho protein của gà không miễn dịch để đạt nồng độ 250 µg/ml, nuôi vi khuẩn trên máy lắc tốc độ 180 vòng/phút. Đến các khoảng thời gian 0h, 3h, 6h, 9h thì kiểm tra số lượng vi khuẩn bằng phương pháp đếm khuẩn lạc.