các môi trường MS có bổ sung 2,4-D (ở các nồng độ 1; 2; 3mg/l) và BA (ở các nồng độ 0,5; 1mg/l) để tạo sẹo (Bảng 2.3).
Bảng 2.3. Nồng độ các chất điều hoà tăng trưởng thực vật bổ sung vào các môi trường tạo mô sẹo từ cây Sưa in vitro.
Nồng độ các CĐHTTTV (mg/l) 2,4-D BA 1 0,5 1 1 2 0,5 2 1 3 1
Các mẫu nuôi cấy được đặt trong tối ở nhiệt độ 240
C ± 10C, độ ẩm 68%. Theo dõi sự tăng trưởng của mẫu cấy theo thời gian. Kết quả sự tăng trưởng của mẫu cấy tạo mô sẹo trong 3 tuần được cân trực tiếp để xác định sự tăng trưởng theo sự thay đổi trọng lượng tươi. Sự thay đổi trọng lượng tươi của mẫu cấy là kết quả của sự ảnh hưởng của nồng độ auxin và cytokinin ngoại sinhlên quá trình tạo mô sẹo của mẫu cấy.
2.2.9. Sự tạo dịch treo tế bào từ mô sẹo
2.2.9.1. Khảo sát khối lượng mô sẹo ảnh hưởng đến sự tạo dịch treo tế bào của cây Sưa in vitro cây Sưa in vitro
Chuyển 2,0 gam, 1,0 gamvà 500 mg mô sẹo (phần mềm, dễ tách rời) 3 tuần tuổi từ môi trường MS có bổ sung 2,4-D 3mg/l và BA 1mg/l) sang erlen 50ml có chứa 10ml môi trường lỏng với thành phần môi trường tượng tự như môi trường tạo mô sẹo, được lắc ở vận tốc 80vòng/phút, ở trong tối, ở nhiệt độ 24 ± 20C, độ ẩm 68 ± 5%. Theo dõi sự phát triển của dich treo tế bào theo thời gian. Hình thái tế bào (Dalbergia tonkinensis Prain in vitro) được quan sát dưới kính hiển vi quang học.
2.2.9.2. Khảo sát nồng độ các chất điều hoà tăng trưởng thực vật ảnh hưởng
đến quá trình tạo dịch treo tế bào từ mô sẹo của cây Sưa in vitro
Chuyển 500 mg mô sẹo (phần mềm, dễ tách rời) 3 tuần tuổi từ môi trường MS có bổ sung 2,4-D 3mg/l và BA 1mg/l) sang erlen 50ml có chứa 10ml môi trường lỏng với thành phần môi trường có bổ sung các chất điều hoà tăng trưởng thực vật thay đổi như sau ( Bảng 2.4):
Bảng 2.4. Nồng độ các chất điều hoà tăng trưởng thực vật bổ sung vào các môi trường tạo dịch treo tế bào từ mô sẹo từ cây Sưa in vitro.
Nồng độ các CĐHTTTV (mg/l) 2,4-D BA 1 0,5 1 1 2 0,5 2 1 3 1
Các erlen được đặt trên máy lắc với vận tốc 80vòng/phút, ở trong tối, ở nhiệt độ 24 ± 20C, độ ẩm 68 ± 5%. Theo dõi sự phát triển của dich treo tế bào theo thời gian. Hình thái tế bào được quan sát dưới kính hiển vi quang học.