Hình 2.5: Sơ đồ hệ thống máy HPLC
Máy sắc ký lỏng hiệu năng cao gồm có các bộ phận sau: bình chứa pha động, bơm đẩy pha động qua hệ thống sắc ký ở áp suất cao, hệ tiêm mẫu để
ĐỖ CAO VINH 22
đưa mẫu vào pha động, cột sắc ký, detector, máy tính hay máy tích phân hoặc máy ghi. [15]
2.5.1.1 Hệ bơm
Hệ bơm HPLC có chức năng tạo áp suất cao để đẩy pha động từ bình dung môi qua hệ thống sắc ký. [15]
Hệ bơm hiện đại hiện nay được điều khiển bằng máy tính có thể lập chương trình để thay đổi tỷ lệ các thành phần pha động theo yêu cầu (sắc ký gradient). [15, 17]
Bơm HPLC cần phải đáp ứng các yêu cầu: tạo được áp suất cao 3000−6000 psi (250−500 atm), lưu lượng bơm khoảng 0,1 đến 10 mL/phút, không bị ăn mòn đối với các thành phần pha động, có tốc độ bơm không đổi. [15]
2.5.1.2 Hệ tiêm mẫu
Có thể dùng bơm tiêm để tiêm mẫu vào đầu cột. Phương pháp phổ biến là dùng van tiêm có vòng chứa mẫu có dung tích xác định và chính xác, có thể thay đổi vòng chứa mẫu với các dung tích khác nhau. [17]
Một số máy HPLC hiện đại có hệ tiêm mẫu tự động có thể lập trình điều khiển thể tích mẫu, số lần tiêm và chu kỳ rửa vòng chứa mẫu. [17, 18]
2.5.1.3 Cột
Cột được dùng phổ biến làm bằng thép không gỉ, thông thường có chiều dài 10−30 cm, đường kính trong từ 2−5 mm, hạt chất nạp cỡ 5−10 m. Cột có đường kính trong lớn hơn được dùng cho sắc ký điều chế. Cột có thể được làm nóng để đạt hiệu quả phân tách tốt hơn, nhưng hiếm khi tiến hành ở nhiệt độ trên 60C vì nhiệt có thể làm suy giảm hiệu lực cột hoặc làm pha động bay hơi. Chất nạp thường là silica gel hoặc silica gel có bao một lớp mỏng hữu cơ hoặc liên kết hóa học với các nhóm chức hữu cơ. Bên cạnh silica gel người ta còn dùng các chất liệu khác như: aluminium oxide, polymer xốp, nhựa trao đổi ion,…[17, 18]
2.5.1.4 Detector
Detector là bộ phận phát hiện và đo các tín hiệu sinh ra khi có chất ra khỏi cột và các tín hiệu này được ghi dưới dạng peak trên sắc ký đồ. [15, 18]
ĐỖ CAO VINH 23
− Detector tử ngoại và khả kiến (UV−Vis) có bước sóng tùy chọn được dùng phổ biến được dùng phổ biến nhất.
− Detector hiện đại thuộc loại này là detector dãy diode (DAD). Detector này luôn có tỷ lệ tín hiệu nhiễu thấp hơn so với detector UV-Vis bình thường.
− Các loại detector khác: detector đo chỉ số khúc xạ, detector huỳnh quang, điện hóa…