3.2.2.1 Xử lý mẫu thực vật và chiết tách
Mẫu lá cây Giác đế cuống dài khô (3,16 kg) được ngâm chiết với dung môi MeOH (5 L) ở nhiệt độ phòng 5 lần (mỗi lần 24 giờ). Dịch chiết sau đó được cất loại dung môi ở áp suất thấp thu được dịch chiết thô. Thêm hỗn hợp MeOH và nước theo tỉ lệ thể tích 1/1 vào dịch chiết thô rồi lần lượt chiết bằng các dung môi nhexane, EtOAc; mỗi dung môi chiết 5 lần (1 L/lần). Sau khi cất loại dung môi ở áp suất thấp thu được 2 cặn dịch chiết n-hexane (110 g), EtOAc (197 g) của lá cây Giác đế cuống dài (Hình 3.8.).
MeOH, 5 L x 24 h x 5
Lá cây Giác đế cuống dài
3,16 kg 1. 2. Cất loại dung môi Cặn MeOH 1 . Phân b ố v ớ i MeOH/H 2O 1/1 2 . Chi ế t v ớ i n - hexane (1 L/ l ầ n x 5 l ầ n) 3 . C ấ t lo ạ i dung môi Hexane
Dịch nước
Cặn n-Hexane
110 g
1 . Chi ế t v ớ i EtOAc (1 L/ l ầ n x 5 l ầ n) 2 . C ấ t lo ạ i dung môi EtOAc
Hình 3.8. Sơ đồ ngâm, chiết phân bố lá cây Giác đế cuống dài
Quá trình phân lập các chất từ dịch chiết n-hexane của lá cây Giác đế cuống dài được trình bày trong Hình 3.9. Tiến hành sắc kí cột silica gel với hệ dung môi n-hexane- EtOAc gradient (0-60%) phần cặn n-hexane thu được 5 phân đoạn kí hiệu F1-F5. Từ phân đoạn F1 sau khi được tinh chế bằng sắc ký cột silica gel với hệ dung môi n-hexane- EtOAc gradient thu được 7 phân đoạn nhỏ, ký hiệu từ F1.1F1.7. Tinh chế tiếp phân đoạn F1.1 bằng sắc ký cột silica gel với hệ dung môi nhexane-EtOAc gradient (0-4%) thu được 6 phân đoạn F1.1.1-F1.1.6. Chạy cột silica gel phân đoạn F1.1.1 với dung môi
n-hexane thu được 2 phân đoạn nhỏ. Tinh chế phân đoạn nhỏ thứ 2 bằng cột sephadex với hệ dung môi CH2Cl2-MeOH 3/7 thu được 113 mg hợp chất GG15.
Cặn EtOAc
(113 mg)
Hình 3.9. Sơ đồ phân lập các chất từ lá cây Giác đế cuống dài
Tinh chế phân đoạn F1.1.3 bằng sắc kí bản mỏng điều chế với dung môi nhexane thu được 29 mg hợp chất GG16. Tiếp tục tinh chế phân đoạn F1.1.5 bằng sắc kí cột silica gel với dung môi rửa giải n-hexane thu được 21 mg hợp chất GG14.
Kết tinh phân đoạn F1.3 bằng hệ dung môi n-hexane/EtOAc thu được 834 mg hợp chất
GG13. Tinh chế phân đoạn F1.6 bằng sắc kí cột silica gel với hệ dung môi nhexane- EtOAc gradient 0-5% thu được 9 phân đoạn F1.6.1-F1.6.9. Sau khi tinh chế phân đoạn F1.6.3 bằng sắc kí cột silica gel với hệ dung môi rửa giải nhexane/CH2Cl2 0-20% thu được 910 mg hợp chất GG17. Phần cặn rắn kết tủa từ phân đoạn F2 được kết tinh bằng hệ dung môi n-hexane-EtOAc thu được 3,5 g hợp chất GG18. Tương tự, phần cặn kết tủa từ phân đoạn F3 được kết tinh bằng hệ dung môi n-hexane-EtOAc thu được thêm 16 mg hợp chất GG8 (đã được tách ra từ phần quả của cây này).