Phương pháp bào chế

2.2.2.1. Phương pháp bào chế viên nhân

Viên nhân MTZ được bào chế bằng phương pháp tạo hạt ướt với các tá dược Disolcel, lactose hoặc Avicel PH101, PVP K30, Aerosil, magnesi stearat, talc.

26 Sơ đồ quy trình bào chế viên nhân [9]:

Hình 2.1. Sơ đồ quy trình bào chế viên nhân MTZ

Nhằm tránh đưa ẩm vào viên nhân trong quá trình bao pectin và trong quá trình bảo quản sau này, viên nhân được bao lót với HPMC E6 hoặc Eudragit S100.

Qua khảo sát công thức dịch bao lót dự định như trong bảng 2.2.

Bảng 2.2. Thành phần dịch bao lót

Thành phần Khối lượng

Polyme (HPMC E6/ Eudragit S100) 3% Khối lượng viên nhân

DBP 20% Khối lượng polyme

Talc 10% Khối lượng polyme

Aerosil 10% Khối lượng polyme Hỗn hợp dung môi

ethanol:diclomethan (50:50) Vừa đủ MTZ, Disocel,

lactose hoặc Avicel PH 101

Nghiền, rây qua rây 0,18mm Trộn bột kép Nhào ẩm Dung dịch PVP K30 15%/ EtOH 96% Xát hạt qua rây Rây 0,8 mm Hạt khô (Hàm ẩm 2- 3%) Dập viên 55oC/1 giờ Tá dược trơn (Aerosil, talc, magnesi stearat) Chày lõm Φ8 Lực gây vỡ viên 6- 9kp Sấy hạt, sửa hạt Trộn hạt khô với tá dược trơn

27

Chuẩn bị dịch bao:

- Hòa tan HPMC E6/Eudragit S100 trong hỗn hợp dung môi dicloromethan: ethanol 96o (tỉ lệ 50:50), khuấy từ 30 phút đến khi tan hoàn toàn.

- Thêm chất hóa dẻo DBP, khuấy từ 15 phút.

- Tạo hỗn dịch talc và hỗn dịch Aerosil với hỗn hợp dung môi. Kéo hỗn dịch vào dung dịch trên.

- Thêm dung môi vừa đủ, khuấy từ 30 phút. - Lọc dịch bao qua rây 180µm.

Bao viên:

Quá trình bao được tiến hành trên thiết bị bao phim tự động Vanguar. - Cho viên vào nồi bao, sấy ở 45oC cho nóng viên 15 phút.

- Cài đặt thông số máy bao như sau: Nhiệt độ khí vào: 50oC – 60oC Nhiệt độ khí ra: 45oC

Tốc độ quay nồi bao: 6,00 - 8,00 rpm Thể tích khí vào: 12,00-15,00 m3/h Thể tích khí ra:15,00- 18,00 m3/h Tốc độ phun dịch bao: 7-10ml/phút

- Viên sau khi bao được sấy trong nồi bao 15 phút ở nhiệt độ 40oC, sau đó bảo quản trong bình hút ẩm. Để viên ổn định 24 giờ trước khi bao kiểm soát giải phóng.

2.2.2.2. Phương pháp bao kiểm soát giải phóng

Quá trình bao được thực hiện bằng phương pháp bao bồi từ bột trên thiết bị bao truyền thống. Tá dược bao dự kiến gồm: pectin 104, pectin 502, HPMC E6, HPMC K100M, DBP, PEG400, TEC, talc.

28 Quá trình bao gồm các giai đoạn sau:

 Chuẩn bị nguyên liệu:

Bảng 2.3. Thành phần bột bao và dịch phun

Thành phần bột bao Thành phần dịch phun

Tá dược Tỉ lệ (%kl/kl) Tá dược Tỉ lệ (%v/v)

Pectin 104 hoặc pectin

502 + HPMC K100M 75 – 90

Chất hóa dẻo (DBP, TEC

hoặc PEG400) 20 – 40

Talc 10 – 25 Dung dịch HPMC E6

(5%, 10% hoặc 15%) 60 – 80

Tổng 100 Tổng 100

- Bột bao: Nghiền, rây bột qua cỡ rây thích hợp (0.09mm; 0.125mm; 0.180mm hoặc 0.250mm), sau đó trộn đồng nhất theo tỉ lệ như trình bày trong bảng 2.3.

- Dịch phun:

+ Hòa tan HPMC E6 vào nước, khuấy từ cho đến khi HPMC E6 trương nở và hòa tan hoàn toàn.

+ Phân tán chất hóa dẻo vào dung dịch HPMC E6 với tỉ lệ như trình bày trong bảng 2.3, siêu âm 20 phút để thu dịch phun dạng dung dịch hoặc nhũ tương.

+ Lọc dịch phun qua rây 0,180mm.

- Chuẩn bị thiết bị bao: lắp súng phun, bơm nhu động, nồi bao, máy sấy, máy nén khí (hình 2.2.).

- Bao viên:

+ Điều chỉnh tốc độ quay nồi bao trong khoảng 100 – 120 vòng/phút. + Cho viên vào nồi bao, sấy viên trong khoảng 10 phút ở 50 – 60oC.

+ Phun dịch bao lên bề mặt viên qua một bơm nhu động với tốc độ 10-15 ml/phút tới khi dịch phun bám đều lên bề mặt viên. Cấp bột với lượng bột vừa đủ tạo thành một lớp mỏng trên bề mặt viên. Sau khi bột đã bám chắc trên bề mặt viên thì tiến hành sấy viên (50 – 60o

29

+ Cứ mỗi lớp dịch phun lại bồi một lớp bột bao, cho tới khi viên đạt khối lượng quy định. Chú ý, lượng bột và lượng dịch phun cho mỗi lần bồi tăng dần theo khối lượng của viên.

- Sấy viên: Viên sau khi bao được sấy ở những điều kiện nhiệt độ khác nhau (dao động quanh nhiệt độ chuyển kính của polyme trong lớp bao) trong những khoảng thời gian nhất định.

Hình 2.2. Sơ đồ bố trí thiết bị bao

Do pectin hút ẩm nên viên sau khi bao pectin được bao thêm một lớp màng bảo vệ nhằm đảm bảo độ ổn định của lớp vỏ bao pectin, tránh đưa ẩm vào viên trong quá trình bảo quản sau này, đồng thời thêm chất màu nhằm tăng vẻ đẹp hình thức cho viên bao. Thành phần của dịch bao gồm:

Bảng 2.4. Thành phần dịch bao bảo vệ

Thành phần Khối lượng

Polyme (HPMC E6/ Eudragit S100) 5% Khối lượng viên nhân

DBP 20% Khối lượng polyme

Talc 10% Khối lượng polyme

Aerosil 10% Khối lượng polyme Titan oxyd (TiO2) 1% Khối lượng polyme Chất màu (màu yellow sunset) Vừa đủ

Hỗn hợp dung môi

ethanol:diclomethan (50:50) Vừa đủ

Quá trình bao được tiến hành trên thiết bị bao phim tự động Vanguar với các thông số máy bao tương tự như ở quy trình bao lót mô tả trong mục 2.2.2.1.

Máy nén khí

Viên nhân Bột bao

Dịch bao

30

2.2.3. Phương phápđánh giá chất lượng viên nhân

2.2.3.1. Hình thức viên nhân

Quan sát bằng mắt thường, viên phải nhẵn bóng, không bong mặt, sứt cạnh.

2.2.3.2. Độ cứng

Độ cứng của viên thường được đánh giá bằng cách xác định lực gây vỡ viên. Sử dụng máy đo độ cứng ERWEKA TBH 200. Tiến hành thử với 10 viên, lấy giá trị trung bình, lực gây vỡ viên trung bình được tính ra kp.

Yêu cầu: lực gây vỡ viên trung bình nằm trong khoảng 6-9 kp.

2.2.3.3. Độ mài mòn

Độ mài mòn của viên nhân được đánh giá theo Dược điển Anh BP2013 (phương pháp 2.9.7) [20].

Sử dụng máy đo độ mài mòn ERWEKA TA 10. Tiến hành cân 10 viên (khối lượng M1), làm sạch bụi, cho vào trống quay của máy ERWERA TA10. Đặt tốc độ quay 100 vòng/phút, thời gian quay 4 phút. Sàng viên qua rây 2000, cân lại khối lượng viên (M2).

Độ mài mòn được tính theo công thức :

X% = (M1 – M2)/ M1 x 100% Trong đó:

X : độ mài mòn (%)

M1 : khối lượng viên trước khi bị mài mòn (g) M2 : khối lượng viên sau khi bị mài mòn (g) Yêu cầu: độ mài mòn không được quá 1%.

2.2.3.4. Độ đồng đều khối lượng

Độ đồng đều khối lượng của viên nhân được đánh giá theo phương pháp mô tả trong DĐVN IV (phụ lục 11.3) [4].

Tiến hành: Cân riêng biệt 20 viên thuốc lấy ngẫu nhiên trên cân phân tích Sartorius BP 121S, tính khối lượng trung bình (mtb). Cân khối lượng trung bình của từng viên, tính phần trăm độ lệch khối lượng (%∆m) so với khối lượng trung bình viên (mtb).

31

Yêu cầu: Không được có quá hai đơn vị có khối lượng nằm ngoài giới hạn chênh lệch so với khối lượng trung bình ±7,5% và không được có đơn vị nào có khối lượng vượt gấp đôi giới hạn này.

2.2.3.5. Thử hòa tan

Sử dụng thiết bị thử hòa tan tự động Vankel VK 7010 loại cánh khuấy, với các thông số:

Nhiệt độ môi trường 37± 0,5o C. Tốc độ khuấy 100± 5 vòng/phút.

Môi trường thử 900ml đệm phosphat pH 6,8. Thời điểm lấy mẫu 5 phút/lần trong 30 phút. Đo quang ở bước sóng 378nm [14], [15].

2.2.3.6. Định lượng

Định lượng bằng phương pháp sắc ký lỏng hiệu năng cao (HPLC) theo Dược điển Việt Nam IV [4].

 Điều kiện sắc ký:

- Cột sắc ký: Cột C18 (15 cm x 4,6 mm; 5μm).

-Detector quang phổ tử ngoại đặt ở bước sóng 254 nm.

-Tốc độ dòng: 1,2 ml/phút.

- Thể tích tiêm: 20 l.

 Pha động: Nước - methanol (80 : 20).

 Dung dịch chuẩn: Cân một lượng khoảng 0,05g chuẩn metronidazol cho vào bình định mức 100 ml. Thêm 60 ml pha động, siêu âm 30 phút, sau đó để nguội ở nhiệt độ phòng rồi thêm pha động vừa đủ, lắc đều, lọc qua màng 0,45 µm, thu được dung dịch có nồng độ khoảng 0,5 mg/ml.

 Dung dịch thử:

- Lấy 10 viên thuốc, cân và tính khối lượng trung bình (mtbv), nghiền thành bột mịn.

- Cân một lượng bột viên tương ứng với 100mg MTZ cho vào bình định mức 100ml. Thêm khoảng 60ml pha động, siêu âm cho tan hoàn toàn. Thêm pha động vừa đủ đến vạch, lắc đều.

32

- Hút chính xác 25ml dung dịch trên vào bình định mức 50ml. Pha loãng bằng pha động vừa đủ đến vạch, lắc đều thu được dung dịch có nồng độ khoảng 0,50 mg/ml. Lọc qua giấy lọc sau đó lọc qua màng lọc 0,45μm trước khi tiêm mẫu.

 Tiến hành sắc ký lần lượt với dung dịch chuẩn và dung dịch thử.

 Tính toán kết quả:

Hàm lượng MTZ/viên (%) = Trong đó:

- St, Sc lần lượt là diện tích pic của mẫu thử và mẫu chuẩn.

- mt¸ mc lần lượt là khối lượng cân của mẫu thử và mẫu chuẩn.

- mtbv là khối lượng trung bình của viên.

- Pc là hàm lượng của chất chuẩn MTZ (Viện KNTW).

- mnhãn là lượng MTZ có trong viên theo lý thuyết (mnhãn = 0,2 g).

- ft, fc lần lượt là độ pha loãng mẫu thử và mẫu chuẩn

 Yêu cầu: Theo qui định trong DĐVN IV, hàm lượng metronidazol, C6H9N3O3, trong viên phải nằm trong khoảng từ 95,0 đến 105,0% so với lượng theo lý thuyết.

2.2.4. Phương pháp đánh giá chất lượng viên bao

2.2.4.1. Hình thức

Quan sát bằng mắt thường viên bao phải nhẵn bóng, màu vàng cam, không bị bong mặt.

2.2.4.2. Tỉ lệ khối lượng lớp vỏ bao

Tỉ lệ khối lượng lớp vỏ bao (TLVB) được tính bằng % khối lượng lớp vỏ bao so với khối lượng viên nhân.

TLVB = [(m2 - m1) x 100% / m1]

Trong đó: m1, m2 lần lượt là khối lượng viên trước và sau khi bao (mg).

2.2.4.2. Hàm lượng MTZ trong viên bao

Viên bao có lớp vỏ bao chắc, do vậy sử dụng máy nghiền bi để nghiền viên. Lấy 10 viên cho vào máy nghiền bi, nghiền thành bột mịn. Bột thu được tiến hành và tính toán tương tự như định lượng viên nhân ở mục 2.3.3.6.

33

Theo qui định trong DĐVN IV, hàm lượng metronidazol, C6H9N3O3, trong viên phải nằm trong khoảng từ 95,0 đến 105,0% so với lượng theo lý thuyết.

2.2.4.3. Thử hòa tan

Sử dụng máy thử độ hòa tan tự động Vankel 7010 với các thông số cụ thể: + Máy cánh khuấy, tốc độ 100 vòng/phút.

+ 900 ml môi trường thử mô phỏng theo các điều kiện đường tiêu hóa: 2 giờ thử trong dung dịch HCl pH 1,2; 3 giờ tiếp theo trong đệm phosphat pH 7,4; các giờ tiếp theo trong môi trường mô phỏng dịch đại tràng: đệm phosphat pH 6,8 và 3ml enzym Pectinex [52], [53], [56].

+ Nhiệt độ môi trường hòa tan: 37 ± 0.5°C. + Đo quang tự động ở bước sóng 378 nm.

+ Thời điểm hút mẫu: cứ 1 giờ hút mẫu 1 lần đến 24 giờ .

2.2.4.4. Đánh giá hình ảnh bề mặt và mặt cắt ngang lớp vỏ bao

- Quan sát đặc điểm hình thái học của bề mặt và mặt cắt của viên bao trước và sau khi sấy viên bằng kính hiển vi điện tử quét phát xạ trường FESEM Hitachi S4800 [39].

- Mẫu thí nghiệm gồm: các mẫu viên bao lấy tại các thời điểm trước và sau khi sấy viên.

2.2.4.5. Xác định nhiệt độ chuyển kính của vỏ bao

- Sử dụng máy phân tích nhiệt vi sai Mettler Toledo.

- Mẫu thí nghiệm gồm: bột nguyên liệu pectin, vỏ bao ủ ở điều kiện nhiệt độ thường, ủ ở 60o

C và 100oC trong 24 giờ.

2.2.5. Phương pháp đánh giá độ ổn định của viên bao

Nghiên cứu độ ổn định của viên bao bằng phương pháp lão hoá cấp tốc.

- Chuẩn bị mẫu nghiên cứu: Tiến hành bao ba mẻ, mỗi mẻ 800 viên. Viên sau

khi bào chế được đóng vào lọ nhựa kín (50 viên/lọ). Cho mẫu vào tủ vi khí hậu CLIMACELL ở điều kiện lão hóa cấp tốc như sau: nhiệt độ: 40o  2oC, độ ẩm: 75 5%, tránh ánh sáng [18].

34

- Đánh giá: Cách mỗi tháng lấy mẫu đánh giá một lần, liên tục trong 06 tháng. Mỗi lần lấy 03 mẫu của ba mẻ bao khác nhau. So sánh sự thay đổi về hình thức, hàm lượng dược chất và khả năng kiểm soát giải phóng dược chất với cùng mẫu viên bao khi mới bào chế theo phương pháp mô tả trong mục 2.3.4.

2.2.6. Phương pháp xử lý và đánh giá kết quả

 Phương pháp đánh giá thời gian tiềm tàng và tốc độc giải phóng dược chất

Sử dụng các thông số sau:

 t10 là khoảng thời gian dược chất giải phóng được 10% tính từ lúc thử, đánh giá thời gian tiềm tàng của mẫu thử (lag time).

 t50 và t85 lần lượt là khoảng thời gian dược chất giải phóng được 50% và 85% tính từ lúc bắt đầu thử.

Phần trăm giải phóng được tính theo phương trình Hopfenberg [51]: C(%) = 100 × [1 – (1-k1 × t2

)p] Trong đó:

oC(%) là phần trăm dược chất giải phóng tại thời điểm tC.

ot = tC – to

(Với tC, to lần lượt là thời gian dược chất giải phóng được C% và thời gian dược chất chuẩn bị giải phóng tính từ lúc bắt đầu thử).

ok1 và p là các hằng số thực nghiệm được xác định từ chương trình chạy trên phần mềm Mathcad 14.

Từ đó tính ra các giá trị t10, t50 và t85 suy ra từ công thức trên:

 So sánh nhiều mẫu

Các số liệu thực nghiệm được xử lý bằng công cụ thống kê ANOVA trên phần mềm Splus 8.0.

Các đại lượng thống kê sử dụng gồm: Giá trị trung bình:

35 Độ lệch chuẩn:

36

Chương 3. KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU

3.1. Khảo sát mối tương quan giữa nồng độ MTZ trong dung dịch đệm phosphat pH 6,8 và mật độ quang

Để xác định mối tương quan giữa nồng độ và mật độ quang của dung dịch MTZ trong môi trường đệm phosphat pH 6,8, tiến hành pha dãy dung dịch chuẩn và đo quang ở bước sóng 378nm như đã nêu trong mục 2.2.1. Kết quả được trình bày trong bảng 3.1 và hình 3.1.

Bảng 3.1. Mật độ quang của dung dịch MTZ với các nồng độ khác nhau

Nồng độ (μg/ml) 300 250 200 150 100 50

D (λ =378nm) 1,062 0,885 0,714 0,529 0,354 0,181

Hình 3.1.Đồ thị biểu diễn mối tương quan giữa nồng độ MTZ trong dung dịch đệm phosphat pH 6,8 và mật độ quang ở bước sóng 378nm

Nhận xét: Kết quả cho thấy nồng độ MTZ trong dung dịch đệm phosphat pH 6,8 và mật độ quang có sự liên quan tuyến tính chặt chẽ với nhau trong khoảng nồng độ khảo sát (50μg/ml – 300μg/ml), với hệ số tương quan R2

= 0,9999.

Như vậy, có thể sử dụng phương pháp đo quang tại bước sóng 378nm để định lượng MTZ trong dung dịch thử hòa tan.

y = 0.0035x + 0.002 R² = 0.9999 0.00 0.20 0.40 0.60 0.80 1.00 1.20 0 50 100 150 200 250 300 350 Mậ t đ ộ q u an g (D ) Nồng độ (μg/ml)

37

3.2. Bào chế viên nhân chứa 200mg MTZ

Yêu cầu đối với viên nhân MTZ dùng trong bao bồi: viên phải giải phóng dược chất hoàn toàn sau 1 giờ thử hòa tan, đồng thời viên không bị bong mặt, sứt cạnh trong quá trình bao.

Qua tham khảo tài liệu [9], chúng tôi đã tiến hành dập viên nhân với các thành phần như sau (công thức F1): Metronidazol (200,00 mg), Disolcel (17,50 mg), lactose (16,25 mg), PVP K30 (10,00 mg), talc (2,50 mg), aerosil (1,25 mg),

magnesi stearat (2,50 mg).

Tuy nhiên, viên nhân đã bào chế có độ cứng thấp (5 – 6 kp), dễ sứt cạnh và bở ngay trong giai đoạn bao lót. Do vậy, nhằm cải thiện độ cứng của viên nhân chúng tôi tiến hành thay đổi một số thành phần công thức viên nhân đã bào chế như sau (công thức F2): Metronidazol (200,00 mg), Disolcel (10,00 mg), Avicel (25,00 mg), PVP K30 (10,00 mg), talc (2,50 mg), magnesi stearat (2,50 mg).

Viên nhân được dập chày lõm, đường kính 8,0 mm. Lực gây vỡ viên là 7-9kp. Viên nhân sau khi bào chế được so sánh khả năng giải phóng dược chất trong môi trường đệm phosphat pH 6,8 với viên nhân F1 theo phương pháp ghi ở mục 2.2.3.5. Kết quả được trình bày trong bảng 3.2 và hình 3.2.

Nhận xét:

Viên nhân F2 có tốc độ giải phóng trong khoảng 10 phút đầu chậm hơn viên F1