1.1.ĐỐI TƯỢNG NGHIÊN CỨU
Đối tượng nghiên cứu gồm 42 bệnh nhân được chẩn đoán xác định LXMKDH giai đoạn tăng tốc lần đầu theo tiêu chuẩn của WHO-2001 [65], nhập viện điều trị tại Viện Huyết học – Truyền máu Trung ương từ tháng 1/2010 đến tháng 12/2012 , đáp ứng đủ các tiêu chuẩn sau :
• Tuổi từ 16 trở lên.
• Tiền sử chẩn đoán LXMKDH giai đoạn mạn tính.
• Được chẩn đoán xác định LXMKDH giai đoạn tăng tốc lần đầu tiên ( theo tiêu chuẩn của WHO-2001).
• Hồi cứu số liệu trong bệnh án khi được chẩn đoán giai đoạn mạn tính lần đầu tiên.
1.2.PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU
2.2.1. Phương pháp nghiên cứu
Mô tả cắt ngang, nghiên cứu hồi cứu. Hồi cứu số liệu trong bệnh án khi được chẩn đoán giai đoạn tăng tốc lần đầu tiên.
2.2.2. Các tiêu chuẩn sử dụng
Chúng tôi sử dụng các tiêu chuẩn chẩn đoán xác định LXMKDH, chẩn đoán giai đoạn mạn tính, giai đoạn tăng tốc và giai đoạn chuyển cấp dựa hệ tiêu chuẩn của Tổ chức Y tế thế giới (2001) [65]. Các trị số huyết học bình thường của máu ngoại vi và tủy xương được sử dụng theo các hằng số sinh học của người Việt Nam đã công bố.
2.2.2.1. Tiêu chuẩn chẩn đoán xác định LXMKDH giai đoạn mạn tính
[65]
a) Triệu chứng lâm sàng :
(1)có biểu hiện thiếu máu trên lâm sàng; (2) lách to ( kích thước lách đo theo đường giữa xương đòn bên trái); (3) có thể có gan to (kích thước gan đo theo đường giữa xương đòn bên phải); (4) có thể có biểu hiện tắc mạch do bạch cầu cao.
b) Chỉ số xét nghiệm :
Máu ngoại vi : (1) Thiếu máu bình sắc, kích thước hồng cầu bình thường; (2) Số lượng bạch cầu tăng cao ( trên 50G/l); (3) Gặp đủ các tuổi dòng bạch cầu hạt trong công thức bạch cầu máu ngoại vi; (4) Tỷ lệ tế bào blast( hoặc nguyên tủy bào và tiền tủy bào) dưới 15%; (5) có thể tăng tỷ lệ bạch cầu đoạn ưa axit và bạch cầu đoạn bazơ.
Tủy xương : Tủy giàu tế bào ( số lượng tế bào tủy trên 100G/l); (2) Tăng sinh dòng bạch cầu hạt đủ các lứa tuổi; (3) Tỷ lệ dòng bạch cầu hạt : dòng hồng cầu (tỷ lệ M:E) trên 10:1; (4)Tỷ lệ tế bào blast hoặc nguyên tủy bào và tiền tủy bào dưới 10%.
Xét nghiệm NST Ph1: Dương tính trên 90-95% trường hợp.
2.2.2.2. Tiêu chuẩn chẩn đoán xác định LXMKDH giai đoạn tăng tốc
[65]
Chẩn đoán khi có ít nhất 1 tiêu chuẩn như sau:
• Tỷ lệ blast từ 10% đến 19% bạch cầu máu ngoại vi hoặc tế bào tủy .
• Bạch cầu ưa base ở máu chiếm tỷ lệ ít nhất là 20% .
• Giảm tiểu cầu kéo dài (dưới 100 G/l) không do điều trị, hoặc tăng tiểu cầu kéo dài (trên 1000G/l) không đáp ứng với điều trị.
• Bằng chứng tổn thương tế bào di truyền tiến triển (ví dụ, xuất hiện bất thường gen bổ sung mà không có khi chẩn đoán lần đầu trong giai đoạn mạn tính của CML) .
• Tăng sinh mẫu tiểu cầu về kích thước và tập trung thành đám, kết hợp với tăng xơ do sợi keo hoặc sợi collagen, và/hoặc dòng hạt rối loạn nặng nề, có thể gợi ý giai đoạn tăng tốc. Tuy những dấu hiệu này chưa được phân tích trong những nghiên cứu lâm sàng lớn nhưng sẽ không giải thích được nếu các dấu hiệu đó xuất hiện độc lập. Các dấu hiệu này thường xuất hiện đồng thời với một hay nhiều các dấu hiệu kể trên.
2.2.2.3. Tiêu chuẩn chẩn đoán xác định LXMKDH giai đoạn chuyển cấp
[65]
Chẩn đoán nếu có ít nhất một tiêu chuẩn sau:
• Tỷ lệ blast ít nhất là 20% bạch cầu máu ngoại vi hoặc tế bào tủy.
• Tăng sinh blast ngoài tủy.
• Blast tập trung thành ổ lớn hoặc thành đám trên tiêu bản sinh thiết tủy xương.
2.2.3. Vật liệu nghiên cứu
2.2.3.1. Bệnh phẩm
• Máu ngoại vi :
+ Lấy 1ml máu tĩnh mạch có chống đông bằng EDTA K3 để đếm các chỉ số huyết học máu ngoại vi và làm tiêu bản máu đàn.
+ Lấy 2 ml máu tĩnh mạch có chống đông bằng Natricitrate 3,8% để làm các xét nghiệm đông máu.
• Dịch hút tủy xương :
Lấy 0,5 ml dịch tủy có chống đông bằng EDTA K3 để đếm chỉ số huyết học, làm tiêu bản tủy đồ.
2.2.3.2. Phương tiện dụng cụ
• Bộ sát trùng tại chỗ : cồn Iod 5%, cồn 70% , bông....
• Kim chọc tủy.
• Xốp cầm máu, băng urgo...
• Bơm tiêm 5ml , 10 ml.
• Thuốc gây tê xylocain 2%.
• ống nghiệm có EDTA K3; ống nghiệm có Nitricitrate 3,8%.
• Bộ dụng cụ làm tiêu bản máu ngoại vi, tiêu bản tủy.
• Thuốc nhuộm Giemsa.
• Dung dịch xanh crezyl nhuộm hồng cầu lưới.
• Hóa chất nhuộm hóa học tế bào.
• Máy đếm tế bào tự động Celltac α của Nhật Bản.
• Kính hiển vi quang học Nikon và huỳnh quang của Nhật Bản.
2.2.4. Các xét nghiệm
2.2.4.1. Xét nghiệm huyết đồ: [30], [61]
• Tiến hành theo quy trình tiêu chuẩn của khoa tế bào và tổ chức học, Viện huyết học-Truyền máu, dựa trên kỹ thuật đã được Williams mô tả và kỹ thuật đã được Viện huyết hoc-Truyền máu trung ương thông qua.
• Lấy máu tĩnh mạch làm tiêu bản máu đàn, nhuôm Giemsa, nhuộm hồng cầu lưới.
• Đếm các chỉ số huyết học bằng máy đếm tự động.
• Đọc tiêu bản và lập công thức bạch cầu (500 bạch cầu), mô tả hình thái tế bào hồng cầu, hình thái tiểu cầu, độ tập trung tiểu cầu và những bất thường trên tiêu bản.
2.2.4.2. Xét nghiệm tủy đồ : [30], [61]
• Tiến hành theo quy trình tiêu chuẩn của khoa tế bào và tổ chức học, Viện huyết hoc-Truyền máu, dựa trên kỹ thuật đã được Williams mô tả và kỹ thuật đã được Viện huyết hoc-Truyền máu trung ương thông qua.
• Lấy dịch tủy làm tiêu bản máu đàn, nhuôm Giemsa, nhuộm hồng cầu lưới.
• Đếm số lượng tế bào có nhân trong dịch tủy bằng máy đếm tế bào tự động 18 thông số.
• Đọc tiêu bản : Đánh giá mật độ tế bào có nhân và đặc điểm phân bố của tế bào , kể cả hồng cầu trưởng thành, nhận định đặc điểm về hình thái, số lượng tế bào và tình trạng biệt hóa của mỗi dòng tế bào cũng như tương quan phát triển của các dòng tế bào, những bất thường trên tiêu bản. Lập công thức tủy(500 tế bào).
• Tính tỷ lệ % hồng cầu lưới.
2.2.4.3. Nhuộm hóa học tế bào: [21],[31],[61]
Tiến hành nhuộm hóa học tế bào bằng 5 phương pháp theo quy trình tiêu chuẩn của khoa tế bào và tổ chức học, Viện huyết hoc-Truyền máu, dựa trên kỹ thuật đã được Williams mô tả và kỹ thuật đã được Viện huyết hoc-Truyền máu trung ương thông qua.