III. NHẬN XÉT CHUNG ĐỐI VỚI SINH VIÊN ĐẾN THỰC TẬP
3.2.2.Phương pháp xác định hàm lượng đạm thô
Phạm vi áp dụng: Phương pháp này áp dụng cho mẫu nguyên liệu và thức
ăn chăn nuôi.
Nguyên lý của phương pháp: Vô cơ hóa mẫu bằng H2SO4 đậm đặc và chất
xúc tác, nitơ trong mẫu thử sẽ chuyển thành muối (NH4)2SO4. Dùng kiềm đặc đẩy NH3 ra khỏi muối (NH4)2SO4 và định lượng bằng axit boric. Các phương trình phản ứng xảy ra như sau:
R-CH-COOH + H2SO4 → CO2 + H2O + SO2 + (NH4)2SO4 NH2
2NaOH + (NH4)2SO4→ 2NH3 + 2H2O + Na2SO4 NH3 + H2O + H3BO3 → NH4+ + B(OH)4-
B(OH)4- + HCl → Cl- + H3BO3 + H2O
Dụng cụ - thiết bị:
− Giấy cân không tro. − Bộ ống phá mẫu − Erlen 250ml − Pipette 25ml − Cân phân tích có độ chính xác 0,1mg − Bình hút ẩm Xúc tác, nhiệt độ
− Máy phá mẫu
− Máy chưng cất đạm tự động
Hóa chất:
− Hỗn hợp K2SO4 – CuSO4 (70:8): Cân 700g K2SO4 và 80g CuSO4 rồi trộn đều, xay nhuyễn và bảo quản trong bình khô sạch.
− H2SO4 đậm đặc 95 – 97%. − Nước cất.
− Dung dịch NaOH 40%: Cân 4kg NaOH cho vào 10 lít nước cất, khuấy tan hoàn toàn.
− Bromocresol Green 0,1%: Cân 0,1g Bromocresol Green cho vào bình định mức 100ml, dùng ethanol 960 định mức đến vạch, lắc đều cho tan hoàn toàn.
−Methyl Red 0,1%: Cân 0,1g Methyl Red cho vào bình định mức 100ml, dùng ethanol 960 định mức đến vạch, lắc đều cho tan hoàn toàn.
− Acid boric 1%: Cân 100g acid Boric, cho vào 5 lít nước cất nóng, khuấy tan. Thêm 100mL Bromogresol Green 0,1%, 70ml Methyl Red 0,1% và thêm nước cất đến 10 lít.
− Acid HCl 0,1N: Hòa tan 8,5ml HCl đậm đặc với nước cất trong bình định mức 1 lít, định mức đến vạch bằng nước cất và chuẩn lại nồng độ bằng dung dịch NaOH 0,1N chuẩn. Cách thực hiện như sau: Hút 25ml dung dịch HCl 0,1N đã pha vào erlen, thêm vài giọt chất chỉ thị phenolphtalein và chuẩn bằng NaOH 0,1N chuẩn, phản ứng kết thúc khi dung dịch xuất hiện màu hồng nhạt bền trong 30 giây. Ghi lại thể tích NaOH và tính kết quả:
N1 = N2.V2/V1 Trong đó:
+ N1: Nồng độ của HCl, N.
+ N2: Nồng độ NaOH 0,1N chuẩn, N.
− (NH4)2SO4: Sấy ở 1030C trong 2 giờ sau đó lấy ra để nguội trong bình hút ẩm trước khi dùng.
− L – Tryptophan: Sấy ở 1030C trong 2 giờ, để nguội trong bình hút ẩm trước khi dùng.
− Sucrose.
Cách tiến hành: Tiến hành thử nghiệm song song hai lần đối với mỗi mẫu
thử. Các bước thực hiện như sau: