III. NHẬN XÉT CHUNG ĐỐI VỚI SINH VIÊN ĐẾN THỰC TẬP
3.2.Một số chỉ tiêu trong thử nghiệm hóa
3.2.1. Xác định hàm lượng béo thô
Phạm vi áp dụng phương pháp: Phương pháp này áp dụng cho mẫu nguyên
liệu và thức ăn chăn nuôi.
Nguyên lý của phương pháp: Mẫu nguyên liệu hay thức ăn chăn nuôi chứa
chất béo được nghiền nhỏ đến kích cỡ 1mm, sau đó được chiết béo bằng dung môi Petroleum benzine theo phương pháp Soxhlet. Phương pháp này dựa vào khả năng hòa tan của chất béo, dầu, sắc tố và các chất hòa tan trong dung môi hữu cơ để thu được béo thô.
Dụng cụ - thiết bị:
− Thimble − Cốc chiết béo − Bông gòn
− Cân phân tích có độ chính xác 0,1mg − Tủ sấy
− Bình hút ẩm − Máy trích béo − Thiết bị làm lạnh
Hóa chất: Petroleum benzine 40 – 60.
Cách tiến hành: Tiến hành thử nghiệm song song 2 lần đối với mỗi mẫu
thử. Các bước thực hiện như sau:
− Cân 3,0g mẫu cho vào thimble, dùng bông gòn phủ lên trên bề mặt nhằm tránh cho dung môi và mẫu tràn ra ngoài.
− Sấy mẫu ở 1030C trong 2 giờ nhằm loại ẩm và tạo điều kiện thuận lợi cho quá trình chiết béo.
− Đồng thời, sấy cốc chiết béo cùng với mẫu ở 1030C trong 2 giờ, lấy ra để nguội trong bình hút ẩm, cân và ghi lại khối lượng cốc (w1).
− Khởi động thiết bị làm lạnh trước khi chiết, nhiệt độ cài đặt 190C. − Cho 80ml dung môi Petroleum Benzine 40 – 60 vào cốc chiết béo.
− Lắp thimble có chứa mẫu đã sấy xong và cốc chiết béo vào máy trích béo. Lưu ý điều chỉnh các khớp nối cho chặt để tránh thất thoát béo, dung môi và mẫu tràn ra ngoài. Chạy máy theo chương trình như sau:
+ Nhiệt độ: 1350C + Thời gian: ∗ Đun sôi: 20 phút ∗ Rửa: 40 phút ∗ Thu hồi: 10 phút ∗ Sấy: 10 phút
− Quá trình chiết kết thúc, đem cốc chiết có chứa béo sấy ở 1030C trong 2 giờ, để nguội trong bình hút ẩm. Cân cốc và ghi lại khối lượng (w2).
Hàm lượng béo thô được tính theo công thức: X=(w2 – w1)/m.100 Trong đó:
− X: Hàm lượng béo thô có trong mẫu thử, %. − w1: Khối lượng cốc chiết, g.
− w2: Khối lượng cốc và béo sau sấy, g. − m: Khối lượng mẫu cân, g.
3.2.2. Phương pháp xác định hàm lượng đạm thô
Phạm vi áp dụng: Phương pháp này áp dụng cho mẫu nguyên liệu và thức
ăn chăn nuôi.
Nguyên lý của phương pháp: Vô cơ hóa mẫu bằng H2SO4 đậm đặc và chất
xúc tác, nitơ trong mẫu thử sẽ chuyển thành muối (NH4)2SO4. Dùng kiềm đặc đẩy NH3 ra khỏi muối (NH4)2SO4 và định lượng bằng axit boric. Các phương trình phản ứng xảy ra như sau:
R-CH-COOH + H2SO4 → CO2 + H2O + SO2 + (NH4)2SO4 NH2
2NaOH + (NH4)2SO4→ 2NH3 + 2H2O + Na2SO4 NH3 + H2O + H3BO3 → NH4+ + B(OH)4-
B(OH)4- + HCl → Cl- + H3BO3 + H2O
Dụng cụ - thiết bị: (adsbygoogle = window.adsbygoogle || []).push({});
− Giấy cân không tro. − Bộ ống phá mẫu − Erlen 250ml − Pipette 25ml − Cân phân tích có độ chính xác 0,1mg − Bình hút ẩm Xúc tác, nhiệt độ
− Máy phá mẫu
− Máy chưng cất đạm tự động
Hóa chất:
− Hỗn hợp K2SO4 – CuSO4 (70:8): Cân 700g K2SO4 và 80g CuSO4 rồi trộn đều, xay nhuyễn và bảo quản trong bình khô sạch.
− H2SO4 đậm đặc 95 – 97%. − Nước cất.
− Dung dịch NaOH 40%: Cân 4kg NaOH cho vào 10 lít nước cất, khuấy tan hoàn toàn.
− Bromocresol Green 0,1%: Cân 0,1g Bromocresol Green cho vào bình định mức 100ml, dùng ethanol 960 định mức đến vạch, lắc đều cho tan hoàn toàn.
−Methyl Red 0,1%: Cân 0,1g Methyl Red cho vào bình định mức 100ml, dùng ethanol 960 định mức đến vạch, lắc đều cho tan hoàn toàn.
− Acid boric 1%: Cân 100g acid Boric, cho vào 5 lít nước cất nóng, khuấy tan. Thêm 100mL Bromogresol Green 0,1%, 70ml Methyl Red 0,1% và thêm nước cất đến 10 lít.
− Acid HCl 0,1N: Hòa tan 8,5ml HCl đậm đặc với nước cất trong bình định mức 1 lít, định mức đến vạch bằng nước cất và chuẩn lại nồng độ bằng dung dịch NaOH 0,1N chuẩn. Cách thực hiện như sau: Hút 25ml dung dịch HCl 0,1N đã pha vào erlen, thêm vài giọt chất chỉ thị phenolphtalein và chuẩn bằng NaOH 0,1N chuẩn, phản ứng kết thúc khi dung dịch xuất hiện màu hồng nhạt bền trong 30 giây. Ghi lại thể tích NaOH và tính kết quả:
N1 = N2.V2/V1 Trong đó:
+ N1: Nồng độ của HCl, N.
+ N2: Nồng độ NaOH 0,1N chuẩn, N.
− (NH4)2SO4: Sấy ở 1030C trong 2 giờ sau đó lấy ra để nguội trong bình hút ẩm trước khi dùng.
− L – Tryptophan: Sấy ở 1030C trong 2 giờ, để nguội trong bình hút ẩm trước khi dùng.
− Sucrose.
Cách tiến hành: Tiến hành thử nghiệm song song hai lần đối với mỗi mẫu
thử. Các bước thực hiện như sau:
3.2.2.1. Chuẩn bị
− Cho 7,8g hỗn hợp xúc tác K2SO4:CuSO4 (70:8) vào ống phá mẫu.
− Cân m g mẫu vào giấy cân và cho vào ống phá mẫu. Khối lượng mẫu cân tùy theo hàm lượng đạm thô như bảng sau:
Bảng 3.1. Khối lượng mẫu cân theo hàm lượng đạm thô
Hàm lượng đạm thô (%) Lượng mẫu cân (g)
≤ 20 1,0
20 ÷ ≤ 45 0,50
45 ÷ ≤ 80 0,25
>80 0,20
− Thêm 12,5ml acid H2SO4 đậm đặc, đốt ở 4200C trong 1 giờ. Quá trình phá mẫu kết thúc, mẫu chuyển sang dung dịch trong suốt hoàn toàn và có màu xanh đặc trưng của đồng. Lưu ý: Nếu mẫu vẫn còn màu đen thì tiếp tục đốt đến khi dung dịch trong suốt.
− Phá mẫu xong lấy ống phá mẫu ra khỏi bếp, để nguội, thêm khoảng 30ml nước cất. (adsbygoogle = window.adsbygoogle || []).push({});
3.2.2.2. Chưng cất
− Khởi động máy chưng cất đạm, chọn chương trình Cleaning để súc rửa máy 3 lần, mỗi lần 5 phút và sử dụng 150ml nước cất.
− Chạy mẫu thử: Chọn chương trình Crude Protein. Chương trình sẽ chạy trong thời gian 5 phút với 30ml acid boric 1%, 50ml nước cất và 60ml NaOH 40%.
− Tiến hành thử nghiệm mẫu trắng: Cân như 0,67g sucrose cho vào ống phá mẫu và tiến hành thử nghiệm mẫu thật.
3.2.2.3. Mẫu kiểm soát
Mẫu tham khảo – Reference: Được phân tích 20 lần trước khi đưa vào sử dụng. Để kiểm tra toàn bộ quá trình thử nghiệm, mẫu tham khảo được tiến hành đồng thời với mẫu thật.
Mẫu thu hồi – Recovery:
− Mẫu (NH4)2SO4 kiểm tra hiệu suất máy chưng cất trước mỗi lần phân tích: Cân 0,12g (NH4)2SO4 đã chuẩn bị cho vào ống phá mẫu, chưng cất như mẫu thật.
− Mẫu (NH4)2SO4 kiểm tra hiệu suất toàn bộ quá trình (tần suất 6 tháng/lần): Cân 0,12g (NH4)2SO4 đã chuẩn bị vào giấy cân, cho vào ống phá mẫu, phá mẫu và chưng cất như mẫu thật.
− Mẫu L – Tryptophan kiểm tra hiệu suất bếp phá mẫu (tần suất 3 tháng/lần): Cân 0,18g L – Tryptophan đã chuẩn bị vào giấy cân, cho vào ống phá mẫu, thêm 0,67g Sucrose. Tiến hành phá mẫu và chưng cất như mẫu thật.
Tính toán – báo cáo kết quả:
Hàm lượng nitrogen có trong mẫu:
N = (V – V0).N.1,401/m Trong đó: − N: Hàm lượng nitrogen tổng, %. − V: Thể tích HCl dùng để chuẩn độ mẫu thật, ml. − V0: Thể tích HCl dùng để chuẩn độ mẫu trắng, ml. − N: Hồng độ HCl dùng để chuẩn độ, N.
− 1,401: Hệ số chuyển đổi nito. − m: Lượng mẫu cân, g.
Hàm lượng đạm tổng:
X = N.k Trong đó:
− X: Hàm lượng đạm tổng, %. − N: Hàm lượng nitrogen tổng, %.
− k: Hệ số chuyển đổi nitrogen sang đạm (k = 6,25, riêng mẫu lúa mì k=5,7).
Hiệu suất thu hồi của máy chưng cất: H1 = N/21,094.100 Trong đó:
− H1: Hiệu suất thu hồi của máy chưng cất, %. − N: Hàm lượng nitrogen thu được, %.
− 21,094: Hàm lượng nitrogen có trong phân tử (NH4)2SO4 (độ tinh khiết là 99,5%), %.
H1 phải từ 99,5 đến 100,5% mới đạt, tức là máy chưng cất hoạt động tốt. Hiệu suất thu hồi của bếp phá mẫu:
H2 = N/13,72.100 Trong đó:
− H2: Hiệu suất thu hồi của bếp phá mẫu, %. − N: Hàm lương nitrogen thu được, %.
− 13,72: Hàm lượng nitrogen có trong phân tử L – Tryptophan (độ tinh khiết là 100%), %.
H2 phải lớn hơn hoặc bằng 98%.
3.2.3. Phương pháp xác định hàm lượng đạm hòa tan
Phạm vi áp dụng: Phương pháp này áp dụng cho mẫu nguyên liệu đậu nành
hoặc có nguồn gốc từ đậu nành.
Nguyên lý của phương pháp: Protein của có đậu nành hòa tan tốt nhất trong môi trường pH=12,5 càng xa điểm pH này khả năng hòa tan của protein càng kém. Phương pháp này xác định hàm lượng đạm hòa tan trong mẫu bằng dung dịch KOH 0,2% (tương đương với pH=12,5). (adsbygoogle = window.adsbygoogle || []).push({});
Dụng cụ - thiết bị: − Cân phân tích có độ chính xác 0,1mg − Erlen 250mL − Pipette 10, 25 và 50ml − Máy khuấy từ − Ống li tâm có nắp − Máy li tâm
− Các dụng cụ và thiết bị sử dụng trong phương pháp xác định hàm lượng đạm thô.
Hóa chất:
− KOH 0,2%: Hòa tan 2,0g KOH bằng nước cất trong bình định mức 1 lít và định mức đến vạch.
− Các hóa chất dùng trong phương pháp xác định hàm lượng đạm thô.
Cách tiến hành: Tiến hành thử nghiệm song song 2 lần đối với mỗi mẫu.
Các bước thực hiện như sau:
− Cân 1,5g mẫu thử cho vào erlen, thêm chính xác 75ml KOH 0,2%, khuấy trong 20 phút bằng máy khuấy từ.
− Cho dịch mẫu vào ống li tâm có nắp, li tâm trong 15 phút với tốc độ 2700 vòng/phút.
− Hút chính xác 10ml dịch li tâm cho vào ống phá mẫu.
− Tiến hành phá mẫu và chưng cất như phương pháp xác định hàm lượng đạm thô.
Tính toán – báo cáo kết quả:
X = (X1 – X2).100/X1 Trong đó:
− X2: Hàm lượng đạm hòa tan, %. X2 = (V – V0).N.1,401.6,25.7,5/m Trong đó: − N: Hàm lượng nitrogen tổng, %. − V: Thể tích HCl dùng để chuẩn độ mẫu thật, ml. − V0: Thể tích HCl dùng để chuẩn độ mẫu trắng, ml. − N: Hồng độ HCl dùng để chuẩn độ, N.
− 1,401: Hệ số chuyển đổi nitrogen.
− 6,25: Hệ số chuyển đổi nitrogen sang đạm thô. − 7,5: Hệ số pha loãng.
− m: Lượng mẫu cân, g.
3.2.4. Phương pháp xác định hàm lượng đạm tiêu hóa
Phạm vi áp dụng: Phương pháp này áp dụng cho mẫu nguyên liệu có nguồn
gốc từ động vật.
Nguyên lí của phương pháp: Đạm trong mẫu nguyên liệu được thủy phân
nhờ enzyme pepsin ở điều kiện nhiệt độ, pH thích hợp, phần đạm bị thủy phân này chính là đạm tiêu hóa. Phần bã còn lại sau thủy phân được đem phá mẫu và chưng cất như xác định đạm thô. Dựa vào hàm lượng đạm thô đã biết trước sẽ xác định được hàm lượng đạm tiêu hóa.
Dụng cụ - thiết bị:
− Giấy lọc thủy tinh − Bình tam giác có nắp
− Máy lắc gắn trong bể điều nhiệt − Máy lọc chân không
− Các dụng cụ và thiết bị sử dụng trong phương pháp xác định hàm lượng đạm thô.
− Petroleum ether.
− HCl 0,075M: Hòa tan 6,2ml HCl đậm đặc bằng nước cất trong bình định mức 1 lít, định mức đến vạch bằng nước cất, lắc đều.
− Dung dịch enzyme pepsin:
+ Nồng độ 0,0002% đối với các mẫu như bột cá, bột xương thịt, bột đầu cá: Hòa tan 0,002g enzyme pepsin bằng dung dịch HCl 0,75M trong bình định mức 1 lít và định mức tới vạch, lắc đều. (adsbygoogle = window.adsbygoogle || []).push({});
+ Nồng độ 0,002% đối với mẫu bột lông vũ: Hòa tan 0,02g enzyme pepsin bằng dung dịch HCl 0,75M trong bình định mức 1 lít và định mức tới vạch, lắc đều.
− Các hóa chất sử dụng trong phương pháp xác định hàm lượng đạm thô.
Cách tiến hành: Tiến hành thử nghiệm song song 2 lần đối với mỗi mẫu
thử. Các bước thực hiện như sau:
− Cân 1g mẫu cho vào giấy lọc.
− Ngâm chiết béo mẫu bằng Petroleum Ether trong 1 ngày.
− Chuyển mẫu vào bình tam giác có nắp với 150ml dung dịch enzyme pepsin.
− Sau đó lắc trong 16 giờ ± 5 phút, ở 450C. − Lấy ra ngâm erlen vào trong nước lạnh. − Lọc chân không mẫu qua giấy lọc thủy tinh. − Rửa phần bã bằng aceton và giữ lại.
− Cho bã đã lọc vào ống phá mẫu và tiến hành phá mẫu, chưng cất, xác định hàm lượng đạm như phương pháp xác định đạm thô.
Tính toán – báo cáo kết quả:
X = (X1 – X2).100/X1 Trong đó:
− X: Khả năng bị phân hủy của đạm bởi enzyme pepsin, %. − X1: Hàm lượng đạm thô của mẫu, %.
− X2: Hàm lượng đạm không bị phân hủy bởi pepsin, %. X2 = (V – V0).N.1,401.k/m Trong đó: − V: Thể tích HCl dùng để chuẩn độ mẫu thật, ml. − V0: Thể tích HCl dùng để chuẩn độ mẫu trắng, ml. − N: Nồng độ HCl dùng trong chuẩn độ, N.
− 1,401: Hệ số chuyển đổi nito.
− k: Hệ số chuyển đổi nito sang đạm (k = 6,25, riêng mẫu lúa mì k = 5,7).
3.2.5. Phương pháp xác định hàm lượng nito amoniac
Phạm vi áp dụng: Phương pháp này áp dụng cho mẫu nguyên có nguồn gốc
từ động vật.
Nguyên lí của phương pháp: Nito tự do (đạm thối) ở dạng NH3 tồn tại trong mẫu nguyên liệu sẽ được chưng cất và được acid boric hấp thụ, từ đó xác định được hàm lượng NH3 tự do để đánh giá mức độ hư hỏng của nguyên liệu.
Dụng cụ - thiết bị: − Bộ ống phá mẫu − Cân phân tích có độ chính xác 0,1mg − Máy chưng cất đạm Hóa chất: − MgO − Bromocresol Green 0,1% − Methyl Red 0,1% − Acid boric 1% − Acid HCl 0,1N − NaOH 0,1N chuẩn
Cách tiến hành: Tiến hành thử nghiệm song song 2 lần đối với mỗi mẫu
thử. Các bước thực hiện như sau:
− Cân 5,0g mẫu cho vào ống phá mẫu, thêm 0,5g MgO và 1 giọt silicon antifoaming.
− Khởi động máy chưng cất đạm, chọn chương trình Cleaning để súc rửa máy 3 lần, mỗi lần 5 phút và sử dụng 150ml nước cất.
− Chạy mẫu thật: Chọn chương trình Total Volatile Basic Nitrogen. Chương trình sẽ chạy trong 5 phút với 30ml acid boric 1% và 50ml nước cất.
− Tiến hành chưng cất các mẫu trắng giống như mẫu thật.
Tính toán – báo cáo kết quả:
X = (V – V0).N.14.100/m Trong đó: − X: Hàm lượng NH3, mgN/100g. − V: Thể tích HCl dùng để chuẩn độ mẫu thật, ml. − V0: Thể tích HCl dùng để chuẩn độ mẫu trắng, ml. − N: Nồng độ HCl dùng để chuẩn độ.
− 14: Khối lượng nguyên tử nitrogen. − m: Khối lượng mẫu, g.
3.2.6. Xác định hàm lượng NaCl (adsbygoogle = window.adsbygoogle || []).push({});
Phạm vi áp dụng: Phương pháp này áp dụng cho các mẫu nguyên liệu và
thức ăn chăn nuôi.
Nguyên lý: Phương pháp chuẩn độ điện thế là phương pháp phân tích dựa
trên việc đo sự biến thiên của thế trong quá trình chuẩn độ. Độ biến thiên này biến đổi đột ngột tại thời điểm sát trước và sát sau điểm tương đương nhờ đó mà biết được thể tích chuẩn độ. Cơ sở của quá trình chuẩn độ là dựa vào phản ứng xảy ra giữa các chất. Từ đó xác định thể tích tiêu tốn của dung dịch chuẩn để tính toán cho ra kết quả. Phương trình phản ứng:
Ban đầu, trước điểm tương đương, dung dịch chứa ion Cl- và không có ion Ag+. Khi bắt đầu chuẩn độ, nồng độ ion Cl- giảm dần do kết hợp với ion Ag+ tạo thành kết tủa AgCl. Tại thời điểm tương đương, ion Cl- phản ứng hết với ion Ag+. Sau điểm tương đương, nồng độ ion Ag+ tăng dần. Thế của dung dịch ở mỗi giai đoạn sẽ tuân theo những phương trình khác nhau và phụ thuộc vào nồng độ ion Cl- hay Ag+. Dụng cụ - thiết bị: − Cân phân tích có độ chính xác 0,1mg. − Giấy lọc − Pipep 25 và 100ml − Bóp cao su − Cốc nhựa
− Máy đo điện thế
Hóa chất:
− HNO3 đậm đặc
− AgNO3 0,05N pha từ ống chuẩn.
Cách tiến hành: Tiến hành thử nghiệm song song hai lần đối với mỗi mẫu thử. Các bước thực hiện như sau:
− Cân m (g) mẫu cho vào cốc nhựa. Khối lượng mẫu cân tùy thuộc vào hàm