6. Điểm mới của đề tài
2.2.1.1.Phân lập tuyển chọn chủng G xylinus theo phương pháp truyền
(Phương pháp Vinogradski và Beijerinck)
Nguồn vật liệu: các nguồn bia khác nhau, nước dừa, các loại dịch chiết quả, cho lên men tự nhiên từ 10 đến 12 ngày tạo thành một lớp màng trắng, mỏng trên bề mặt dịch nuôi cấy.
Từ các màng thu được, dùng đũa thuỷ tinh vô trùng vớt màng, lấy một lượng nhỏ màng, rửa qua bằng nước cất vô trùng cho vào ống nghiệm chứa nước cất thanh trùng, vontex đều, thu được ống nghiệm chứa mẫu màng gốc.
Chuẩn bị 10 ống nghiệm có nút bông, sấy vô trùng, cho vào mỗi ống nghiệm 9ml nước cất, đậy nút bông, hấp thanh trùng trong nồi hấp giữ ở 1210C, 1atm trong thời gian 15 phút. Chuyển vào bốc cấy vô trùng, dùng pipet vô trùng hút 1ml dịch từ ống nghiệm chứa mẫu màng gốc cho vào ống nghiệm thứ nhất, đậy nút bông, vontex trong 5 phút, thu được ống nghiệm chứa dịch pha loãng mức 10-1. Tiếp tục hút 1ml dịch ở ống có độ pha loãng 10-1
cho vào ống nghiệm thứ hai, thu được dịch pha loãng ở mức 10-2. Tiếp tục pha loãng ở các độ pha loãng 10-3
; 10-4…;10-7. Căn cứ vào số lượng vi khuẩn có ở trong mẫu, chúng tôi chọn các mẫu ở độ pha loãng 10-4
- 10-7 để tiến hành các bước tiếp theo.
Phương pháp phân lập trên môi trường thạch đĩa: chuẩn bị môi trường 1 đã hấp khử trùng, đổ môi trường thạch đĩa. Dùng pipet vô trùng hút 100ml dịch màng đã chuẩn bị ở trên (với các độ pha loãng 10-4
- 10-7) nhỏ vào các hộp lồng đã chứa môi trường thạch, dùng que trang thủy tinh trang đều trên khắp bề mặt thạch. Đặt ngược các hộp lồng, bao gói cẩn thận, để trong tủ ấm 300C, sau 3-4 ngày lấy ra quan sát khuẩn lạc (hình thái, kích thước, màu sắc, độ trơn bóng, viền mép khuẩn lạc, vòng phân giải CaCO3).
Chuẩn bị môi trường thạch nghiêng (MT1 đã loại bỏ CaCO3), tách các khuẩn lạc riêng rẽ từ hộp lồng, cấy chuyển vào các ống nghiệm chứa môi trường thạch nghiêng đã khử trùng, nuôi trong tủ ấm ở 300
C. Sau 3-4 ngày, quan sát, làm tiêu bản nhuộm tế bào bằng phương pháp nhuộm gram [1].