Nội tạng cá lóc
Xử lý sơ bộ, cấp đông
Xay nhỏ, cân khối lượng
Trích ly
Thí nghiệm 1: Khảo sát ảnh hưởng của tỷ lệ nguyên liệu và nước cất đến hoạt tính lipase trích ly từ nội tạng cá lóc
Thí nghiệm 2: Khảo sát ảnh hưởng giá trị pH dung môi trích ly đến hoạt tính lipase trích ly từ nội tạng cá lóc
Thí nghiệm 3: Khảo sát ảnh hưởng của thời gian trích ly đến hoạt tính lipase trích ly từ nội tạng cá lóc
Thí nghiệm 4: Khảo sát ảnh hưởng của nhiệt độ trích ly đến hoạt tính lipase trích ly từ nội tạng cá lóc
Tự phân Lọc
Xác định hoạt tính enzyme lipase
Hình 3.2: Sơ đồ bố trí thí nghiệm tổng quát * Thuyết minh quy trình
Nội tạng cá lóc được lấy từ chợ, sau khi đem về phòng thí nghiệm, tiến hành xử lý sơ bộ. Nội tạng được rửa sạch, nhằm loại bỏ bớt máu, hạn chế sự phát triển của vi sinh vật gây thối. Nước rửa phải sạch và được giữ ở nhiệt độ thấp nhằm tránh các biến đổi sinh hóa trong nguyên liệu, sự phát triển của vi sinh vật. Trong quá trình rửa, đồng thời loại bỏ mang và mỡ. Sau đó nguyên liệu được chứa đựng trong các túi PE chuẩn bị cho quá trình lạnh đông.
Nội tạng cá lóc sau quá trình rửa và xử lý được lạnh đông chậm trong tủ đông (nhiệt độ từ -5 ÷ -15C, tùy điều kiện thực tế). Lạnh đông nguyên liệu nhằm giúp cho quá trình xay cắt được dễ dàng và hạn chế các biến đổi xảy ra. Đồng thời, quá trình lạnh đông nguyên liệu còn giúp bảo quản và chủ động nguồn nguyên liệu trong quá trình tiến hành thí nghiệm, tạo điều kiện cho quá trình thí nghiệm được thuận lợi và liên tục (Nguyễn Văn Mười, 2006).
- Xay nhỏ và cân khối lượng
Quá trình xay nhỏ nguyên liệu nhằm phá vỡ cấu trúc tế bào, giúp enzyme được trích ly ra ngoài một cách dễ dàng. Quá trình xay nhỏ còn góp phần làm nguyên liệu sau xay được đồng nhất.
Cân khối lượng nhằm đồng nhất khối lượng mẫu ban đầu, thuận tiện cho việc tính toán.
- Ngâm trích và tự phân
Phối trộn nguyên liệu đã xay với dung môi (nước cất hoặc các loại dung dịch đệm). Trong quá trình này, enzyme trong nội tạng sẽ hòa tan và khuếch tán vào dung môi. Ủ mẫu trong một khoảng thời gian xác định để giúp lipase từ trong nội bào được giải phóng qua bề mặt liên pha, vào dịch trích.
- Lọc: Sau quá trình tự phân, tiến hành lọc dịch trích bằng vải lọc. Quá trình lọc nhằm loại bỏ tạp chất không tan trong dịch trích, làm cho xác định hoạt tính enzyme được dễ dàng hơn.
- Xác định hoạt tính enzyme
Sau khi thu được dịch lọc, tiến hành xác định hoạt tính enzyme (Phụ lục 1). Mục đích của xác định hoạt tính enzyme là tìm ra những điều kiện tối ưu (tỷ lệ nguyên liệu và dung môi, giá trị pH dung môi, thời gian và nhiệt độ trích ly) của quá trình trích ly nhằm thu được enzyme lipase có hoạt tính cao nhất.