Tổ chức Y tế thế giới đề ra chiến lược xét nghiệm phát hiện nhiễm HIV,
các chiến lược xét nghiệm phụ thuộc vào mục tiêu của xét nghiệm.
Chiến lược 1: áp dụng cho công tác an toàn truyền máu.
Chiến lược 2: áp dụng cho giám sát trọng điểm.
Chiến lược 3: áp dụng cho chẩn đoán các trường hợp nhiễm HIV: mẫu
huyết thanh được coi là dương tính khi mẫu đó dương tính cả 3 lần xét
nghiệm bằng ba loại sinh phẩm với nguyên lý và chế phẩm kháng nguyên khác nhau.
1.4.1.1. Xét nghiệm phát hiện kháng thể
Thử nghiệm sàng lọc
1. Kỹ thuật ngưng kết hạt vi lượng Serodia - HIV
Nguyên lý: thành phần của sinh phẩm SERODIA - HIV là những hạt gelatin đã được gắn kháng nguyên HIV bất hoạt được chế tạo bằng cách dùng chất tẩy để phá vỡ HIV thuần khiết. Kỹ thuật dựa trên nguyên lý là những hạt đã được gắn kháng nguyên sẽ bị ngưng kết nếu trong huyết thanh hay huyết tương có chứa kháng thể HIV.
2. Kỹ thuật miễn dịch gắn enzyme ELISA
a. Thử nghiệm ELISA gián tiếp
Nguyên lý: Kháng nguyên vi rút tinh chế từng phần được lấy từ vi rút bị
phá vỡ hoàn toàn trong nuôi cấy tế bào được gắn với các hạt polystyrene hay
gắn vào giếng vi lượng của phiến nhựa. Nếu kháng thể IgG gắn với hạt hay
phiến nhựa, nó sẽ được phát hiện khi cho thêm kháng thể IgG vào. Một số sinh
phẩm ELISA dùng hỗn hợp các kháng thể của chuỗi nặng và chuỗi nhẹ của
globulin miễn dịch (Ig) và do đó có thể phát hiện kháng thể IgM đối với HIV.
+ Thử nghiệm chỉ phát hiện kháng thể IgM đối với HIV. Do đó không
phát hiện được người nhiễm HIV trước khi kháng thể IgM chuyển sang IgG
(thời gian chuyển IgM sang IgG có thể lên đến 41 tuần lễ). + Dương tính giả có thể xảy ra.
b. Thử nghiệm ELISA cạnh tranh.
Đặc hiệu cho việc phát hiện kháng thể kháng nguyên hay vỏ của HIV.
c. Thử nghiệm ELISA Sandwich kháng nguyên. d. Thử nghiệm tóm bắt kháng nguyên và kháng thể.
Các thử nghiệm khẳng định
-Thử nghiệm Western blot.
-Thử nghiệm kháng thể huỳnh quang gián tiếp (IF.A).
-Thử nghiệm miễn dịch kết tủa phóng xạ (RICA).
1.4.1.2. Phát hiện kháng nguyên HIV
- Nguyên lý: ủ bệnh phẩm qua đêm với các hạt polystyrene hay trên phiến nhựa có gắn kháng thể kháng HIV đơn dòng. Sau đó rửa và ủ với
kháng thể thỏ hay dê kháng HIV và hình thành “bánh mì kẹp thịt” (Sandwich). Sau đó rửa và thêm kháng thể thỏ hay dê cộng hợp enzyme để làm tăng độ nhạy và độ đặc hiệu của thử nghiệm. Sau khi rửa lần cuối cùng,
người ta cho thêm cơ chất vào. Nếu phức hợp kháng nguyên - kháng thể -
enzyme được hình thành, phản ứng đổi mầu sẽ được phát hiện qua tăng độ
hấp thu ở bước sóng đặc biệt.
-Thử nghiệm này cần 24 - 30 giờ.
-Dùng để phát hiện kháng nguyên p24 tự do.
-Độ nhạy thấp, tính đặc hiệu cao hơn độ nhạy.
-Lợi ích cho một số tình huống lâm sàng.
1.4.1.3. Nuôi cấy HIV
-Nguyên lý: HIV được phát hiện bằng kính hiển vi điện tử, tế bào lympho với những phần chưa chín muồi của HIV với rất nhiều mảnh chồi ở
màng huyết tương và nồng độ enzyme phiên mã ngược (RT) có hoạt tính cao trong nước nổi nuôi cấy vào ngày thứ 15 đồng nuôi cấy. Sự có mặt của HIV được khẳng định bằng các phân tích huyết thanh học và IFA.
-HIV có thể nuôi cấy từ các dịch khác của cơ thể như dịch não tuỷ,
huyết thanh, dịch tiết âm đạo, nước bọt, tinh dịch, huyết tương, nước mắt, sữa
-Hạn chế:
+ Tốn kém, đòi hỏi nhiều tuần.
+ Có nguy cơ tiếp xúc với nồng độ vi rút cao.
1.4.1.4. Kỹ thuật lai ghép phân tử
-Nguyên lý: Khi HIV gắn vào bề mặt tế bào, ARN phiên mã và RT polymeasa ADN phụ thuộc vào ARN đi vào trong tế bào. RT sẽ tổng hợp
ADN hai sợi khi sử dụng ARN của HIV như một khuân mẫu (template). Một
số phân tử ADN sợi kép này sẽ di chuyển đến nhân tế bào và gắn một cách
ngẫu nhiên vào genome của tế bào chủ và trở thành tiền vi rút.
-PCR cho phép phát hiện được một bản sao ADN vi rút trong một tế bào giữa 100.000 đến 1.000.000 tế bào bình thường.
-Phản ứng chuỗi enzyme (PCR) có thể thực hiện trong một ngày.
-Có khả năng phát hiện trực tiếp nhiễm HIV tiềm tàng ở những người không có đáp ứng kháng thể.