- Các số liệu ựược tổng hợp, xử lý bằng phần mềm Excel 2007, và IRRSTAT 4.0 Kết quả phân tắch trình tự ựược xử
4.2.8.Kiểm tra khuẩn chứa plasmid tái tổ hợp
10, 11 5 amiRNA5 TTAATATTATACGGATGGCCG CR 39,93 Virus 1
4.2.8.Kiểm tra khuẩn chứa plasmid tái tổ hợp
Tiến hành ựiện di kiểm tra sản phẩm PCR biến nạp thu ựược:
Hình 4-15: Kết quả ựiện di sản phẩm PCR kiểm tra khuẩn A. tumefaciens sau biến nạp với cặp mồi II và III.
Trường đại học Nông nghiệp Hà Nội Ờ Luận văn thạc sĩ khoa học nông nghiệp ẦẦẦẦẦẦẦẦ 79
Hình 4-17: Kết quả giải trình tự sản phẩm tái tổ hợp mang vector biểu hiện pPS1.
Qua các bước tiến hành, kiểm tra sản phẩm và giải trình tự ở trên chúng tôi có thể khẳng ựịnh thiết kế ựược vector chứa amiRNA (vector pPS1) và biến nạp thành công vector biểu hiện pPS1 này vào A. tumefaciens.
Trường đại học Nông nghiệp Hà Nội Ờ Luận văn thạc sĩ khoa học nông nghiệp ẦẦẦẦẦẦẦẦ 80
Các trình tự amiRNA: To-miR1, To-miR2, To-miR3, To-miR4, To-miR5, To-miR6 ựã ựược chuyển giao thành công cho TS đặng Thị Vân Ờ Viện Rau Ờ Hoa Ờ Quả Việt Nam phục vụ các mục tiêu tiếp theo của ựề tài.
Trường đại học Nông nghiệp Hà Nội Ờ Luận văn thạc sĩ khoa học nông nghiệp ẦẦẦẦẦẦẦẦ 81
5. KẾT LUẬN
Từ kết quả nghiên cứu của ựề tài, chúng tôi rút ra một số kết luận sau: đã thiết kế 6 trình tự amiRNA nhằm ức chế sự tái bản của begomovirus:
Bảng 4-7: Trình tự 6 amiRNA ựã ựược thiết kế thành công
STT Tên Trình tự (5Ỗ-3Ỗ) Trình tự mục tiêu Số lượng trình tự virus bị ức chế 1 To-miR1 TAATATTATACGGATGGCCGC CR 11 2 To-miR2 TAATTTCAGATCGACGGACGA Rep 5 3 To-miR3 TTGTAATTAAGGAGCTAGCTC Rep 5 4 To-miR4 TAATTAAGGAGCTAGCTCCTA Rep 5 5 To-miR5 TTAATATTATACGGATGGCCG CR 11 6 To-miR6 TTAATGCCATTTGGTACTCAA CR 11
đã nhân dòng thành công 6 trình tự miRNA vào vector nhân dòng pJET 1.2/blunt: To-miR1-pJET, To-miR2-pJET, To-miR3-pJET, To-miR4-pJET, To-miR5-pJET, To-miR6-pJET,
đã nhân dòng thành công 6 cấu trúc gen mang miRNA (Vị trắ) vào vector biểu hiện pPS1: To-miR1-pPS1, To-miR2-pPS1, To-miR3-pPS1, To-miR4- pPS1, To-miR5-pPS1, To-miR6-pPS1,
đã biến nạp thành công vector pPS1 chứa miRNA vào khuẩn Agrobacterium tumefaciens chủng LBA4404
VI. đỀ NGHỊ
Chuyển các miRNA ựã ựược thiết kế gen vào cây cà chua ựể ựánh giá hiệu quả thiết kế
Trường đại học Nông nghiệp Hà Nội Ờ Luận văn thạc sĩ khoa học nông nghiệp ẦẦẦẦẦẦẦẦ 82