- Các số liệu ựược tổng hợp, xử lý bằng phần mềm Excel 2007, và IRRSTAT 4.0 Kết quả phân tắch trình tự ựược xử
4.2.4Cắt pJET1.2/blunt chứa pre-miRNA và pPS1 bằng enzyme Xho và Xba
10, 11 5 amiRNA5 TTAATATTATACGGATGGCCG CR 39,93 Virus 1
4.2.4Cắt pJET1.2/blunt chứa pre-miRNA và pPS1 bằng enzyme Xho và Xba
Dựa vào vị trắ trình tự của các enzyme cắt giới hạn có trong sản phẩm (d) và vector pPS1, chúng tôi ựã lựa chọn cặp enzyme giới hạn XhoI và XbaI. Cặp enzyme này cho sản phẩm ựặc hiệu trên cả sản phẩm (d) và vector pPS1 và ựặc biệt là cắt ựúng vị trắ ựa nhân dòng trên pPS1 (hình 4.19 a, b).
Hình 4-9 a. Cấu trúc và vị trắ cắt RE-
XhoI và XbaI trên PPSI
Hình 4-9 b. Vị trắ cắt RE- XhoI và
XbaI trên plasmid tái tổ hợp pZET1.2/blunt-(d)
Theo lý thuyết, vector pPS1 sau khi xử lý RE - XhoI và XbaI, sẽ cho 2 sản phẩm, sản phẩm mục tiêu sẽ có kắch thước là 12400 bp, sản phẩm còn lại có kắch thước 144 bp. đối với plasmid tái tổ hợp pZET1.2/blunt-(d), các sản phẩm có thể ựược hình thành ựược mô tả ở bảng 4.4.1, trong ựó, sản phẩm mục tiêu có kắch thước là 469 bp.
Trường đại học Nông nghiệp Hà Nội Ờ Luận văn thạc sĩ khoa học nông nghiệp ẦẦẦẦẦẦẦẦ 68
Bảng 4-6. Các sản phẩm có thể ựược hình thành khi xử lý plasmid tái tổ hợp pZET1.2/blunt-(d) với XhoI và XbaI
STT Kắch thước sản phẩm Vị trắ cắt XhoI Vị trắ cắt XbaI
1 2949 353 1078 2 469 488 957 3 135 353 và 488 4 121 957 và 1078 5 725 353 1078 6 604 353 957 7 590 488 1078
Kết quả ựiện di sản phẩm enzyme cắt giới hạn cho thấy, có một sản phẩm của vector pPS1 nhìn thấy ựược trên bản ựiện di. đây là sản phẩm có kắch thước lớn. So sánh với thang chuẩn thì ựây chắnh là sản phẩm mục tiêu. Sản phẩm còn lại không ựược thể hiện trên bản ựiện di là do nồng ựộ của plasmid thấp và do ựoạn có kắch thước ngắn. đối với plasmid tái tổ hợp pZET1.2/blunt-(d), có 3 sản phẩm ựược thể hiện trên bản diện di. Sản phẩm mục tiêu có kắch thước 469 bp cũng ựược thể hiện trên bản ựiện di. Kết quả ựiện di sản phẩm sau khi xử lý RE ựược thể hiện trên hình 4-10.
Hình 4-10: Kết quả ựiện di sản phẩm xử lý plasmid pJET1.2/ blunt (d) bằng RE
12400 bp
Trường đại học Nông nghiệp Hà Nội Ờ Luận văn thạc sĩ khoa học nông nghiệp ẦẦẦẦẦẦẦẦ 69
Kết quả ựiện di ựều cho các vạch băng ựược phân tách rõ ràng, các sản phẩm có kắch thước 12400 bp của pPS1 và 469 bp của plasmid tái tổ hợp pZET1.2/blunt Ờ (d) ựược thu lại và tinh sạch ựể phục vụ cho thắ nghiệm tiếp theo.