- Các số liệu ựược tổng hợp, xử lý bằng phần mềm Excel 2007, và IRRSTAT 4.0 Kết quả phân tắch trình tự ựược xử
4.2.2Biến nạp plasmid tái tổ hợp vào trong tế bào khả biến E.coli chủng TOP
10, 11 5 amiRNA5 TTAATATTATACGGATGGCCG CR 39,93 Virus 1
4.2.2Biến nạp plasmid tái tổ hợp vào trong tế bào khả biến E.coli chủng TOP
Sản phẩm (d) sau khi tinh sạch ựược gắn vào vector nhân dòng pJET1.2/blunt Cloning vector và biến nạp vào vi khuẩn E.coli TOP10. Kết quả biến nạp ựược thể hiện ở hình 4-7.
Sản phẩm sau phản ứng ghép nối ở trên ựược biến nạp vào trong tế bào khả biến E.coli chủng TOP10 theo phương pháp sốc nhiệt (Cohen và cộng sự, 1972). Sau ựó dịch khuẩn ựược cấy trải 100ộl / ựĩa LB rắn có bổ sung 100 ppm Ampicilin. Nuôi trong ựiều kiện ựiều kiện 370C, sau 14 Ờ 16 giờ. Kết quả thu ựược thể hiện ở hình 4-7.
Qua hình ta thấy, hình thái khuẩn lạc thu ựược ở ựây là các khuẩn lạc dạng trắng, trong, lồi, nhầy. đây chắnh là hình thái khuẩn lạc ựặc trưng của vi khuẩn
E.coli. Ngoài ra, trên môi trường LB rắn có bổ sung kháng sinh chọn lọc plasmid tái tổ hợp nên những khuẩn lạc phát triển ựược trên môi trường này là những tế bào vi khuẩn có thể mang plasmid tái tổ hợp.
Hình 4-7: Kết quả biến nạp plasmid tái tổ hợp mang sản phẩm (d) vào tế bào khả biến E.coli TOP 10
Việc kiểm tra xem các khuẩn lạc có chứa plasmid tái tổ hợp hay không là một khâu rất quan trọng nhằm lựa chọn ựược vật liệu chắnh xác cho các thắ nghiệm tiếp theo. Chọn lọc khuẩn lạc mọc riêng rẽ và có kắch thước ựều mang ựặc trưng khuẩn
Trường đại học Nông nghiệp Hà Nội Ờ Luận văn thạc sĩ khoa học nông nghiệp ẦẦẦẦẦẦẦẦ 65
trên ựĩa LB tiến hành nuôi cấy trong 10 ml dịch LB lỏng chứa 100mg/l Amp. Nuôi khuẩn trong ựiều kiện lắc 250rpm nhiệt ựộ 370C.
Mỗi ựĩa biến nạp ựược chọn ra một khuẩn lạc có hình thái ựúng, mọc riêng rẽ ựể kiểm tra PCR sử dụng mồi A, B. Kết quả kiểm tra ựược thể hiện qua hình 4-7. Vạch sản phẩm có kắch thước tương ựương với kắch thước mục tiêu là 701bp. Như vậy các khuẩn lạc này ựã mang plasmid tái tổ hợp có chứa sản phẩm (d). Quá trình nhân dòng ựã diễn ra thành công.
Hình 4-8: Kết quả ựiện di sản phẩm TomiR1-d, TomiR2-d, TomiR3-d, TomiR4-d, TomiR5-d, TomiR6-d sau chiết gel bằng GeneJETỎ Gel
Extraction Kit