- Các số liệu ựược tổng hợp, xử lý bằng phần mềm Excel 2007, và IRRSTAT 4.0 Kết quả phân tắch trình tự ựược xử
10, 11 5 amiRNA5 TTAATATTATACGGATGGCCG CR 39,93 Virus 1
4.2.5. Tạo vector pPS1 mang amiRNA-1 precursor
Sau khi xử lý RE, ựoạn sản phẩm (d) sẽ có kắch thước 469 bp và có trình tự như sau (hình 4-11). 5ỖTCGAGGTCGACGGTATCGATAAGCTTGATATCGAATTCCTGCAGCCCcaaacacacgctcggac gcatattacacatgttcatacacttaatactcgctgttttgaattgatgttttaggaatatatatg tagaATACAAACTGCACCAATGATTtcacaggtcgtgatatgattcaattagcttccgactcattc atccaaataccgagtcgccaaaattcaaactagactcgttaaatgaatgaatgatgcggtagacaa attggatcattgattctctttgaTATCATTCGTGCAGTTTGCATtctctcttttgtattccaattt tcttgattaatctttcctgcacaaaaacatgcttgatccactaagtgacatatatgctgccttcgt atatatagttctggtaaaattaacattttgggtttatctttatttaaggcatcgccatgGGGGGAT CCACTAGTT 3Ỗ
Hình 4-11. Trình tự của sản phẩm (d) mạch 5Ỗ-3Ỗ sau khi ựược xử lý RE XhoI và XbaI
amiRNA-1 primary amiRNA
amiRNA-1 precursor amiRNA*
đoạn sản phẩm này sẽ ựược nối vào pPS1 cũng ựã ựược xử lý XhoI và XbaI ựể tạo thành vector biểu hiện ở thực vật. pPS1 là vector kép, có chứa CaMV:35S promoter kép tăng cường sự biểu hiện của gene ựược chuyển (hình 4-11).
Sau ựó, tiến hành nối ựoạn DNA mang pre-amiRNA-1 vào pPS1: Do cùng ựược xử lý RE là XhoI và XbaI nên ựoạn DNA mang amiRNA-1 và pPS1 có thể ựược nối lại với nhau nhờ enzyme T4 ligase. Hỗn hợp sản phẩm ựược ủ ở 22oC trong vòng 30 phút. Hỗn hợp này sau ựó ựược sử dụng trực tiếp cho phản ứng biến nạp vào tế bào khả biến TOP10 E.coli.
Kết quả giải trình tự các sản phẩm sau khi cắt enzyme giới hạn ựược thể hiện ở hình 4-12.
Trường đại học Nông nghiệp Hà Nội Ờ Luận văn thạc sĩ khoa học nông nghiệp ẦẦẦẦẦẦẦẦ 72
Hình 4-12: Kết quả giải trình tự sản phẩm TomiR1-pJET, TomiR2-pJET, TomiR3-pJET, TomiR4-pJET, TomiR5-pJET, TomiR6-pJET sau khi cắt
Trường đại học Nông nghiệp Hà Nội Ờ Luận văn thạc sĩ khoa học nông nghiệp ẦẦẦẦẦẦẦẦ 73