TỔNG LIÊN ĐOÀN LAO ĐỘNG VIỆT NAM TRƯỜNG ĐẠI HỌC TÔN ĐỨC THẮNG KHOA DƯỢC
TỔNG LIÊN ĐOÀN LAO ĐỘNG VIỆT NAM TRƯỜNG ĐẠI HỌC TƠN ĐỨC THẮNG KHOA DƯỢC 🙢✵🙠 BÁO CÁO THÍ NGHIỆM HÓA SINH BÀI GLUCIDE GVHD: TS Phạm Phước Điền Sinh viên: Nguyễn Quỳnh Như THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINH, THÁNG 08 NĂM 2021 Nguyễn Quỳnh Như Thực tập hóa sinh BÀI GLUCIDE I PHẢN ỨNG MOLISCH Nguyên tắc Các loại glucide cho phức màu tím phản ứng với dung dịch α-naphthol sulfuric acid đậm đặc Có thể dùng phản ứng Molisch để phân loại nhóm carbohydrate phân biệt nhóm carbohydrate với chất khác dựa vào cường độ màu chúng Thuốc thử Thuốc thử Molisch dung dịch naphthol 1% ethanol 90% Cách tiến hành Chuẩn bị ống nghiệm bảng sau: Ống Ống Ống Ống Ống ml nước cất ml ml ml ml hồ tinh glucose 1% fructose 1% sucrose 1% bột 1% giọt giọt giọt giọt ml ml ml Dung dịch Glucide giọt TT Molisch Lắc H2SO4 đậm đặc ml ml Hiện tượng giải thích 4.1 Hiện tượng Ống 1: Khơng có tượng xảy Ống 2: Xuất vòng màu tím Ống 4: Xuất vịng máu tím đỏ Ống 5: Xuất vịng màu tím nhạt màu Email: quynhnhun521@gmail.com Nguyễn Quỳnh Như Thực tập hóa sinh 4.2 Giải thích Dưới tác dụng acid H2SO4 đậm đặc fructose, glucose, sucrose hồ tinh bột bị khử nước cho aldehyde (furfulral 5-hydroxyl methyl furfural) Trong môi trường acid, aldehyde phản ứng nhân điện tử với α-naphthol (trong thuốc thử Molisch) cho phức chất màu tím tím đỏ Do fructose có cấu trúc vịng cạnh nên môi trường acid H2SO4 đậm đặc dễ bị khử nước để tạo thành furfulral Glucose có cấu trúc vịng cạnh nên bền Sucrose có liên kết α-1,2 glycoside nối fructose glucose nên bền Hồ tinh bột bền có nhiều liên kết α-1,4 glycoside tạo phức có màu tím nhạt II PHẢN ỨNG FEHLING Nguyên tắc Phản ứng Fehling dùng để xác định đường khử lactose, maltose, glucose, fructose, pentose (arabinose, ribose),… Trong môi trường kiềm mạnh, monosaccharide dạng endiol không bền dễ dàng khử kim loại nặng Cu2+, Ag+, Hg2+ Các nối đôi bị cắt đứt tạo hỗn hợp đường – acid Phản ứng Fehling ứng dụng hóa sinh lâm sàng để kiểm tra nhanh lượng đường có nước tiểu bệnh nhân mắc bệnh đái tháo đường Email: quynhnhun521@gmail.com Nguyễn Quỳnh Như Thực tập hóa sinh Thuốc thử Thuốc thử Fehling gồm dung dịch: Dung dịch A Dung dịch B CuSO4 kết tinh 35 g H2SO4 đậm đặc ml Nước cất vừa đủ 1000 ml KOH NaOH 135 g Natri kali tartrate 150 g Nước cất vừa đủ 1000 ml Cách tiến hành Chuẩn bị ống nghiệm bảng sau: Ống Ống Ống Ống Ống ml ml ml ml ml 0,5 ml 0,5 ml 0,5 ml 0,5 ml 0,5 ml hồ glucose 1% fructose 1% Dung dịch TT Fehling Glucide lactose 1% sucrose 1% tinh bột 1% Lắc Đun sôi cách thủy phút Hiện tượng giải thích 4.1 Hiện tượng Glucose Fructose Lactose Email: quynhnhun521@gmail.com Sucrose Hồ tinh bột Nguyễn Quỳnh Như Thực tập hóa sinh Khi trộn dung dịch Fehling A B ta thấy dung dịch chuyển sang màu xanh dương đậm Khi cho tiếp dung dịch glucide tương ứng vào ống nghiệm ta thấy: Ống 1, 2, 3: Đều xuất kết tủa đỏ gạch Cường độ màu: ống > ống > ống Thời gian tạo tủa: ống > ống ống Ống 4, 5: Khơng xảy tượng 4.2 Giải thích Thuốc thử Fehling: Khi trộn dung dịch Fehling A Fehling B với thể tích nhau, natri kali tartrate hòa tan tủa Cu(OH)2 CuSO4 môi trường kiềm sinh ra, tạo phức chất Cu2+ alcolate màu xanh dương đậm Phức chất cung cấp Cu2+ cho phản ứng oxy hóa – khử Ống 2: Đều xuất tủa đỏ gạch, tủa ống (chứa glucose) đậm màu so với tủa ống (chứa fructose) glucose fructose monosaccharide có nhóm –OH hemiacetal → có tính khử Nhưng nhóm –CHO glucose có tính khử mạnh nhóm –C=O fructose Email: quynhnhun521@gmail.com Nguyễn Quỳnh Như Thực tập hóa sinh ↓ tủa đỏ gạch D-Glucose D-Gluconic acid Ống 3: Có kết tủa đỏ gạch chậm ống 1,2 lactose disaccharide bị thủy phân tạo β-D-galactose D-glucose (có nhóm –OH hemiacetal tự C1) → có tính khử Ống 4: Khơng tạo tủa đỏ gạch sucrose (saccharose) khơng có nhóm –OH hemiacetal để chuyển thành aldehyde → khơng có tính khử Do khơng tác dụng với thuốc thử Fehling Ống 5: Khơng có tượng tinh bột polysaccharide → khơng có tính khử III PHẢN ỨNG SELIWANOFF (PHẢN ỨNG ĐẶC TRƯNG CHO CETONE) Nguyên tắc Khi đun nóng với acid vơ cơ, fructose cetohexose khác tạo thành hydroxy methyl furfural Các chất tác dụng với resorcinol cho phức màu đỏ Các aldose tạo thành hydroxy methyl furfural đun nóng với acid, phản ứng xảy chậm, nên phản ứng Seliwanoff có tính đặc hiệu cho cetose Phản ứng dùng để nhận biết đường aldose đường cetose Email: quynhnhun521@gmail.com Nguyễn Quỳnh Như Thực tập hóa sinh Thuốc thử Thuốc thử Seliwanoff: Resorcinol (resorcin) 0,05 g HCl pha loãng 1/3 100 ml Cách tiến hành Chuẩn bị ống nghiệm bảng sau: Ống nghiệm Ống Ống ml ml 0,5 ml fructcose 1% 0,5 ml glucose 1% Dung dịch TT Saliwanoff Glucide Lắc Đun sôi cách thủy 10 phút Hiện tượng giải thích Ống 1: Xuất màu đỏ Ống 2: Không xảy tượng Dưới tác dụng acid HCl đậm đặc nhiệt độ, Các aldose tạo thành cetohexose cetopentose tạo thành hydroxy methyl hydroxy methyl furfural đun Email: quynhnhun521@gmail.com Nguyễn Quỳnh Như Thực tập hóa sinh furfural furfural Các chất ngưng tụ với resorcinol nóng với acid phản ứng xảy tạo thành phức chất có màu đỏ chậm Phức màu đỏ IV THỦY PHÂN SACCHAROSE Nguyên tắc Saccharose (sucrose) tính khử, thủy phân saccharose acid cho D-glucose D-fructose có tính khử Cách tiến hành Tạo dung dịch thủy phân: Cho vào ống nghiệm ml dung dịch saccharose 1% giọt HCN 1N, đun sôi cách thủy phút Lấy dịch thủy phân đem làm thí nghiệm Chuẩn bị ống nghiệm bảng sau: Ống Ống Ống Ống Dịch thủy phân saccharose 0,5 ml - 0,5 ml - Dung dịch saccharose 1% - 0,5 ml - 0,5 ml ml ml - - - - ml ml TT Fehling TT Seliwanoff Đun cách thủy phút Email: quynhnhun521@gmail.com 10 phút Nguyễn Quỳnh Như Thực tập hóa sinh Hiện tượng giải thích Ống 1: Tạo tủa màu đỏ gạch thủy phân saccharose acid HCN 1N cho D-glucose D-fructose có tính khử nên phản ứng với thuốc thử Fehling Ống 2: Không xảy tượng với thuốc thử Fehling saccharose khơng có nhóm –OH hemiacetal nên khơng có tính khử Ống 3: Tạo kết tủa màu đỏ thủy phân saccharose acid HCN 1N tạo D-fructose – cetose, fructose phản ứng với resorcinol thuốc thử Seliwanoff tạo phức màu đỏ Ống 4: Tạo kết tủa màu đỏ thuốc thử Seliwanoff có chứa 1/3 HCl pha lỗng nên đun sơi cách thủy ống nghiệm 10 phút saccharose ống nghiệm bị thủy phân cho fructose tạo phản ứng ống nghiệm V PHẢN ỨNG MÀU POLYSACCHARIDE Nguyên tắc Các polysaccharide kết hợp với iod tạo thành phức chất có màu khác tùy vào độ dài mạch carbon Cách tiến hành Cho vào ống nghiệm ml dung dịch hồ tinh bột 1% Thêm vào giọt thuốc thử Lugol Quan sát màu xuất Tiếp theo đun ống nghiệm lửa đèn cồn, quan sát tượng Sau cho ống nghiệm vào cốc nước để nguội quan sát tượng Hiện tượng giải thích 3.1 Hiện tượng Email: quynhnhun521@gmail.com Nguyễn Quỳnh Như ml hồ tinh bột 1% + giọt lugol Thực tập hóa sinh Đun nóng ống nghiệm Nhúng ống nghiệm vào cốc nước lạnh Khi cho giọt thuốc thử Lugol vào ống nghiệm chứa hồ tinh bột 1% ta thấy xuất dung dịch đổi sang màu xanh dương tím Khi đun nóng ống nghiệm lửa đèn cồn, dung dịch dần màu Khi ngân ống nghiệm vào cốc nước lạnh màu xanh xuất trở lại 3.2 Giải thích Trong hồ tinh bột nhiệt độ thường, phân tử tinh bột tồn dạng chuỗi xoắn; phân tử glucose lập thành bước xoắn hấp phụ phân tử iod làm cho dung dịch có màu Màu thay đổi tùy thuộc vào cấu trúc phân tử tinh bột (tỉ lệ amylose/amylopectin) chiều dài phân tử Amylose cho màu xanh dương đậm với iod amylopectin lại cho màu tím đỏ với iod Khi đun nóng, vịng xoắn phân tử tinh bột duỗi ra, khơng cịn hấp phụ iod nên dung dịch bị màu Khi làm nguội, phân tử có xu hướng trở dạng chuỗi xoắn làm hồ tinh bột có màu trở lại VI PHẢN ỨNG BENEDICT (PHẢN ỨNG GLUCOSE TRONG NƯỚC TIỂU) Nguyên tắc Glucose có nhóm aldehyde khử Cu2+ thành Cu+ tạo Cu2O (tủa màu đỏ gạch) Phản ứng Benedict phản ứng bán định lượng thơng qua phản ứng người ta ước chừng lượng glucose nước tiểu 10 Email: quynhnhun521@gmail.com Nguyễn Quỳnh Như Thực tập hóa sinh Thuốc thử Thuốc thử Benedict gồm dung dịch: Dung dịch A Dung dịch B Natri citrate 173 g Natri carbonate (Na2CO3) 200 g Nước cất đun nóng 700 ml Cu2SO4.5H2O 17,3 g Nước cất 100 ml Chuẩn bị thuốc thử: Đổ dung dịch B từ từ vào dung dịch A, lắc thêm nước cất vừa đủ 1000 ml Đun sơi cách thủy Thuốc thử phải khơng có tủa đỏ Cách tiến hành Cho vào ống nghiệm ml thuốc thử Benedict Thêm vào 0,1 ml (2 giọt) nước tiểu Đun sôi cách thủy nhận xét chuyển màu Hiện tượng giải thích 4.1 Hiện tượng Hiện tượng Ống Kết luận Thuốc thử trong, màu xanh dương Phản ứng âm tính (-) Khơng có glucose nước tiểu Ống Ống Có tủa, thuốc thử chuyển sang màu Phản ứng dương tính (+) xanh Lượng glucose nước tiểu ≤ g/l Có tủa màu vàng cam Phản ứng dương tính (++) Lượng glucose nước tiểu – 10 g/l 11 Email: quynhnhun521@gmail.com Nguyễn Quỳnh Như Ống Thực tập hóa sinh Có tủa đỏ gạch Phản ứng dương tính (+++) Lượng glucose nước tiểu 10 – 20 g/l Thanh đánh giá kết phản ứng Benedict 4.2 Giải thích Dưới có mặt đường khử, ion Cu2+ có thuốc thử Benedict bị khử thành ion Cu+ Các ion Cu+ tạo thành tủa đồng oxide (Cu2O) màu đỏ gạch Glucose có nhóm aldehyde -CHO có tính khử nên tạo tủa phản ứng với thuốc thử Benedict, tùy thuộc vào lượng glucose có nước tiểu mà có chuyển màu khác ↓ tủa đỏ gạch Phản ứng Benedict phản ứng Fehling tạo tủa Cu2O màu đỏ gạch Tuy nhiên, phản ứng Fehling định tính glucose nước tiểu, cịn phản ứng Benedict phản ứng bán định lượng thơng qua phản ứng người ta ước chừng lượng glucose nước tiểu 12 Email: quynhnhun521@gmail.com ... khác tùy vào độ dài mạch carbon Cách tiến hành Cho vào ống nghiệm ml dung dịch hồ tinh bột 1% Thêm vào giọt thuốc thử Lugol Quan sát màu xuất Tiếp theo đun ống nghiệm lửa đèn cồn, quan sát tượng... ứng Fehling ứng dụng hóa sinh lâm sàng để kiểm tra nhanh lượng đường có nước tiểu bệnh nhân mắc bệnh đái tháo đường Email: quynhnhun521@gmail.com Nguyễn Quỳnh Như Thực tập hóa sinh Thuốc thử Thuốc... bột Nguyễn Quỳnh Như Thực tập hóa sinh Khi trộn dung dịch Fehling A B ta thấy dung dịch chuyển sang màu xanh dương đậm Khi cho tiếp dung dịch glucide tương ứng vào ống nghiệm ta thấy: Ống 1,