một số kỹ thuật dùng trong sinh học phân tử

Bài 1: MỘT SỐ KỸ THUẬT DÙNG TRONG SINH HỌC PHÂN TỬ Chuẩn đầu Sau kết thúc học, sinh viên có thể: 1.Tóm tắt nguyên lý số kỹ thuật SHPT: PCR, Realtime-PCR và giải trình tự gen 2.Áp dụng kỹ thuật Sinh học phân tử xét nghiệm hỗ trợ chẩn đoán và theo dõi bệnh TRƯỜNG ĐẠI HỌC Y TẾ CÔNG CỘNG GẮN KẾT – PHÁT TRIỂN – HỘI NHẬP Nội Dung • • • • • • • • Kỹ thuật PCR Một số kỹ thuật PCR Kỹ thuật Realtime PCR Kỹ thuật giải trình tự gen Enzym giới hạn RFLP Dấu ấn DNA Lai acid nucleic TRƯỜNG ĐẠI HỌC Y TẾ CÔNG CỘNG GẮN KẾT – PHÁT TRIỂN – HỘI NHẬP Kỹ thuật PCR (polymerase chain reaction) khuếch đại nhanh nhiều đoạn DNA mà không qua tạo dịng TRƯỜNG ĐẠI HỌC Y TẾ CÔNG CỘNG GẮN KẾT – PHÁT TRIỂN – HỘI NHẬP TRƯỜNG ĐẠI HỌC Y TẾ CÔNG CỘNG GẮN KẾT – PHÁT TRIỂN – HỘI NHAÄP Nguyên lý kỹ thuật PCR Kỹ thuật PCR (polymerase chain reaction) phương pháp tổng hợp DNA dựa mạch khn trình tự đích DNA ban đầu, khuếch đại, nhân số lượng khuôn thành hàng triệu nhờ hoạt động enzyme polymerase cặp mồi (primer) đặc hiệu cho đoạn DNA TRƯỜNG ĐẠI HỌC Y TẾ CÔNG CỘNG GẮN KẾT – PHÁT TRIỂN – HỘI NHẬP TRƯỜNG ĐẠI HỌC Y TẾ CÔNG CỘNG GẮN KẾT – PHÁT TRIỂN – HỘI NHẬP TRƯỜNG ĐẠI HỌC Y TẾ CÔNG CỘNG GẮN KẾT – PHÁT TRIỂN – HỘI NHẬP TRƯỜNG ĐẠI HỌC Y TẾ CÔNG CỘNG GẮN KẾT – PHÁT TRIỂN – HỘI NHẬP ) TRƯỜNG ĐẠI HỌC Y TẾ CÔNG CỘNG GẮN KẾT – PHÁT TRIỂN – HỘI NHẬP Enzyme giới hạn • Cắt DNA vị trí xác định • >500 loại enzyme • Tách chiết từ vi khuẩn • Phân giải DNA virus vi khuẩn bị cơng • Ứng dụng TRƯỜNG ĐẠI HỌC Y TẾ CÔNG CỘNG GẮN KẾT – PHÁT TRIỂN – HỘI NHẬP RFLP (hiện tượng đa hình chiều dài đoạn DNA enzyme giới hạn) TRƯỜNG ĐẠI HỌC Y TẾ CÔNG CỘNG GẮN KẾT – PHÁT TRIỂN – HỘI NHẬP Dấu ấn DNA (DNA fingerprinting) TRƯỜNG ĐẠI HỌC Y TẾ CÔNG CỘNG GẮN KẾT – PHÁT TRIỂN – HỘI NHẬP TRƯỜNG ĐẠI HỌC Y TẾ CÔNG CỘNG GẮN KẾT – PHÁT TRIỂN – HỘI NHẬP Phương pháp Northern blotting • Phát RNA • Phương pháp Dot-blotting, Slot-blotting TRƯỜNG ĐẠI HỌC Y TẾ CÔNG CỘNG GẮN KẾT – PHÁT TRIỂN – HỘI NHẬP 10 Kỹ thuật lai chỗ huỳnh quang FISH TRƯỜNG ĐẠI HỌC Y TẾ CÔNG CỘNG GẮN KẾT – PHÁT TRIỂN – HỘI NHẬP TRƯỜNG ĐẠI HỌC Y TẾ CÔNG CỘNG GẮN KẾT – PHÁT TRIỂN – HỘI NHẬP Tóm tắt • • • • • • • • Kỹ thuật PCR Một số kỹ thuật PCR Kỹ thuật Realtime PCR Kỹ thuật giải trình tự gen Enzym giới hạn RFLP Dấu ấn DNA Lai acid nucleic TRƯỜNG ĐẠI HỌC Y TẾ CÔNG CỘNG GẮN KẾT – PHÁT TRIỂN – HỘI NHẬP Câu hỏi lượng giá • Trình bày bước kỹ thuật PCR • Trình bày thành phần phản ứng Realtime-PCR • Tóm tắt ngun lý kỹ thuật giải trình tự gen sequencing TRƯỜNG ĐẠI HỌC Y TẾ CÔNG CỘNG GẮN KẾT – PHÁT TRIỂN – HỘI NHẬP Tài liệu tham khảo • Nguyễn Văn Thanh (2007) Sinh học phân tử (Dùng cho Đào tạo Dược sĩ Đại học) Nxb Giáo dục, Hà Nội • Tạ Thành Văn (2010) PCR và số kỹ thuật Y Sinh học phân tử Nxb Y học, Hà Nội • Trịnh Văn Bảo (2008) Di truyền Y học Nxb Giáo dục, Hà Nội TRƯỜNG ĐẠI HỌC Y TẾ CÔNG CỘNG GẮN KẾT – PHÁT TRIỂN – HỘI NHẬP Thiết kế mồi • Tìm trình tự FASTA • Thiết kế mồi với độ dài mong muốn TRƯỜNG ĐẠI HỌC Y TẾ CÔNG CỘNG GẮN KẾT – PHÁT TRIỂN – HỘI NHẬP Kỹ thuật PCR • • • • • • Lấy mẫu Tách DNA Pha master mix Pha phản ứng Chạy PCR Điện di sản phẩm TRƯỜNG ĐẠI HỌC Y TẾ CÔNG CỘNG GẮN KẾT – PHÁT TRIỂN – HỘI NHẬP Kỹ thuật Realtime PCR • • • • • • Lấy mẫu Tách DNA Pha master mix Pha phản ứng Chạy Real-time PCR Phân tích sản phẩm TRƯỜNG ĐẠI HỌC Y TẾ CÔNG CỘNG GẮN KẾT – PHÁT TRIỂN – HỘI NHẬP Kỹ thuật giải trình tự gen • • • • • • • Lấy mẫu Tách DNA Pha master mix Chạy phản ứng Làm số liệu Tạo trình tự FASTA Phân tích trình tự TRƯỜNG ĐẠI HỌC Y TẾ CÔNG CỘNG GẮN KẾT – PHÁT TRIỂN – HỘI NHẬP Lượng giá kỹ thuật • • Đánh giá sản phẩm: DNA tinh Sản phẩm nhân lên kích thước Đánh giá báo cáo TRƯỜNG ĐẠI HỌC Y TẾ CÔNG CỘNG GẮN KẾT – PHÁT TRIỂN – HỘI NHẬP ...Chuẩn đầu Sau kết thúc học, sinh viên có thể: 1.Tóm tắt nguyên lý số kỹ thuật SHPT: PCR, Realtime-PCR và giải trình tự gen 2.Áp dụng kỹ thuật Sinh học phân tử xét nghiệm hỗ trợ chẩn đoán... và theo dõi bệnh TRƯỜNG ĐẠI HỌC Y TẾ CÔNG CỘNG GẮN KẾT – PHÁT TRIỂN – HỘI NHẬP Nội Dung • • • • • • • • Kỹ thuật PCR Một số kỹ thuật PCR Kỹ thuật Realtime PCR Kỹ thuật giải trình tự gen Enzym... ĐẠI HỌC Y TẾ CÔNG CỘNG GẮN KẾT – PHÁT TRIỂN – HỘI NHẬP Kỹ thuật giải trình tự gen (sequencing) TRƯỜNG ĐẠI HỌC Y TẾ CÔNG CỘNG GẮN KẾT – PHÁT TRIỂN – HỘI NHẬP Kỹ thuật giải trình tự gen Sanger • Kỹ