1 giáo dục đào tạo Trờng đại học vinh ==== ==== Bùi Thái Phi Nghiên cứu đặc điểm thực vật, hóa sinh phơng pháp nhân giống Hơng (Dianella ensifolia L.) mọc Hơng Sơn - Hà Tĩnh tóm tắt Luận văn thạc sĩ Sinh học Chuyên ngành: Thực vật học Mà số: 60.44.20 Vinh 2009 Mở đầu H-ơng (Dianella ensifolia L.) loài có tinh dầu thơm đặc biệt quyến rủ mà thiên nhiên ban tặng Từ lâu ng-ời đà biết dùng rễ h-ơng trộn với số h-ơng liệu khác để làm h-ơng thắp dịp lễ tết Mùi h-ơng thơm rễ h-ơng đà gắn liền với ngày thiêng liêng đầu năm ng-ời dân Việt Nam Ngày nay, nhu cầu nguyên liệu h-ơng thắp thị tr-ờng ngày tăng cao Sản xuất h-ơng thắp đà trở thành ngành có thu nhập, h-ơng ngày cạn kiệt phận dùng rễ nên khả tái chậm [11] Bên cạnh công dụng dùng làm nguyên liệu h-ơng thắp h-ơng tác dụng khử phong, khử độc, sát trùng, tẩy giun sán, chữa bệnh da, hay lấy rễ t-ơi già nhỏ vắt lấy n-ớc trộn với gạo phơi khô, rang thơm làm thuốc bà chuột H-ơng Sơn lµ mét hun miỊn nói cđa tÜnh Hµ TÜnh, víi diện tích đất ch-a sử dụng 11.450,88ha chiếm 10,37% diện tích tự nhiên toàn huyện (theo thống kê huyện năm 2009), chủ yếu đất đồi trọc nghèo dinh d-ỡng Thực chủ tr-ơng sách giao đất, giao rừng cho ng-ời dân miền núi vào sống, thời gian gần ng-ời dân H-ơng Sơn số vùng lân cận đà có phong trào trồng rừng đà biết kết hợp rừng với loài phi gỗ b-ớc đầu đà cho thấy H-ơng có khả thích ứng với địa ph-ơng Tuy nhiên, h-ơng thời điểm việc nghiên cứu đặc điểm thực vật học, hóa sinh nhân giống h-ơng hầu nh- ch-a có Xuất phát từ lí nêu mà lựa chọn đề tài: Nghiên cứu đặc điểm thực vật, hóa sinh ph-ơng pháp nhân giống H-ơng (Dianella ensifolia) mọc H-ơng Sơn - Hà Tĩnh Mục tiêu đề tài nghiên cứu đặc điểm thực vật, hoá sinh ph-ơng pháp nhân giống h-ơng nhằm góp phần vào việc mở rộng Qua cung cấp thêm dẫn liệu số đặc điểm thực vật học ph-ơng pháp nhân giống h-ơng từ làm sở khoa học cho biện pháp canh tác, hoạch định kế hoạch phát triển bền vững cho loài H-ơng Sơn - Hà Tĩnh Đối t-ợng địa điểm nghiên cứu: - Đối t-ợng nghiên cứu: mọc hoang xà Sơn Tây huyện H-ơng Sơn - Địa điểm nghiên cứu: đề tài đ-ợc thực H-ơng Sơn - Hà Tĩnh Ch-ơng Tổng quan tài liệu 1.1 Phân bố vị trí phân loại Hình Cây H-ơng mang hoa Cây h-ơng có tên khoa học (Dianella ensifolia L.), có tên h-ơng rễ đ-ợc dùng làm h-ơng đốt ngày lễ tết, dáng gồm bên xòe trông giống nh- cỗ bài, hình rẻ quạt nên gọi H-ơng hay Rẻ quạt [28, 13] *Vị trí phân bố h-ơng [11]: Trên giới: Trung Quốc, n-ớc Đông Nam á, Nhật Bản, ấn Độ, Sri Lanka, Australia, Madagascar vùng nhiệt đới Châu Phi ViƯt Nam: Cao B»ng (TÜnh Tóc), Qu¶ng Ninh (CÈm Ph¶, đảo Tuần Châu), Hải Phòng (Thủy Nguyễn), Vĩnh Phúc (Tam Đảo), Hà Nội, Ninh Bình (Cúc Ph-ơng), Hải D-ơng, Thái Bình, Nghệ An, Hà Tĩnh, Quảng Bình, Thừa Thiên Huế, Quảng Nam (Quế Sơn), Kon Tum (Kôn Plông, Đắt Gley), Gia Lai (Mang Yang), Đắc Lăk, Lâm Đồng (Di Linh, Lạc D-ơng) * Vị trí phân loại: Theo [4] Giới (regnum): Thùc vËt (Plantae) Ngµnh (divisio): Ngäc lan (Magnoliophyta) Líp (class): Hành (Liliopsida) Phân lớp (Subclass): Liliidae Bộ (ordo): Liliales Họ (familia): H-ơng (Phormiaceae) Chi (genus): Dianella Loài (species): Dianella ensifolia Họ h-ơng (Phormiaceae) gồm khoảng chi Chi h-ơng (Dianella) gồm khoảng 20 - 25 loài, phân bố chủ yếu vùng nhiệt đới Châu Châu phi Loài h-ơng (Dianella ensifolia L.) đa dạng nên tr-ớc có nhầm lẫn đà có vài tên gọi khác H-ơng bµi lµ loµi nhÊt ë ViƯt Nam [11] 1.2 Đặc điểm thực vật học h-ơng 1.2.1 Đặc điểm hình thái Cây h-ơng loài thân thảo, cao chừng 40 - 50cm có đến 1m, không phân cành, thân rễ nằm ngang, phân nhánh màu trắng, với rễ chùm phát triễn mạnh nên trồng xen d-ới tán rừng giai đoạn đầu, s-ờn dốc vừa giữ n-ớc, giữ đất, chống xói mòn Lá mọc so le ôm lấy thân, gốc xếp lớp, phần xòe hai bên hinh nan quạt.[5, 13, 48] Lá hình mũi mác dài 40 -70cm, rộng 1,5 - 3,5cm, cuống, có màu xanh mạ, phía d-ới thành bẹ dày ôm lấy thân Mép thô xù xì, gân song song, xÕp hai d·y [5, 6,13] Hoa mäc thµnh cơm tận dài 10 -20 cm không kể cuống, cơm hoa chïy; gåm nhiỊu xim ng¾n mang nhiỊu hoa mọc gần nhau, cuống hoa dài tới 1cm Hoa có màu trắng, vàng hay tím nhạt, nụ hình trứng Mỗi hoa có ba đài, ba cánh tràng, sáu nhị, bầu trên, bầu hình cầu ba ngăn, ngăn - noÃn, noÃn ng-ợc, vòi nhụy dạng sợi dài, mảnh; đầu nhụy dạng điểm.[3, 5, 13] Quả mäng n-íc, chÝn cã mµu tÝm sÉm, mµu lam hay màu đỏ tía, hình cầu, đ-ờng kính - mm có - hạt Mùa hoa tháng - [3, 5] Hạt hình trứng, màu nâu đen, có vảy dày, phôi nhỏ to [11] Cây h-ơng khác hẳn với khác có tên h-ơng hay gọi h-ơng lau có tên khoa học Vetiveria zizanioides Nash thuộc họ lóa (poaceae) chøa nhiỊu tinh dÇu, rƠ dïng nÊu n-íc gội đầu cất tinh dầu thơm [17] 1.2.2 Đặc điểm sinh thái H-ơng loài có biên độ sinh thái rộng, gặp nhiều loại sinh cảnh khác nhau: thảm cỏ, thảm bụi, s-ờn đồi, ven rừng, ven suối rõng thø sinh, rõng nguyªn sinh tõ vïng thÊp đến khu vực núi cao Thậm chí, h-ơng phân bố khu vực có độ cao tới 3.000m dÃy Hymalaya [11] H-ơng mọc hoang dại đồi khô nơi có nhiều ánh nắng, trơ đất đá, xen lẫn bụi thấp [24] Cây h-ơng loài -a sáng, -a nóng ẩm, nh-ng có khả chịu bóng, chịu hạn chịu lạnh rét [14, 17] Cây thích hợp với nhiều loại đất, đất phù sa, ®Êt ®åi nói thÊp cßn tèt nhiỊu mïn, Ýt chua, thoát n-ớc, không bị bí chặt, không mọc đất sét nặng [17] Là -a sáng mạnh, nh-ng có khả chịu bóng, nên vừa trồng đ-ợc nắng bóng râm nơi có tán che th-a [14] điều kiện tỉnh phía Bắc n-ớc ta, h-ơng th-ờng hoa vào mùa hè, hoa nở vào buổi chiều h-ơng thơm [11] 1.3 Giá trị sử dụng Bộ phận sử dụng rễ Rễ phơi khô trộn với nhiều loại nguyên liệu khác có h-ơng thơm nh- hồi, quế chi bà mía để làm h-ơng thắp cho mùi thơm ngào ngạt Có thể dùng làm nguyên liêu để chiết xuất h-ơng liệu Ng-ời ta dùng rễ t-ơi dà vắt lây n-ớc trộn với gạo, đem phơi khô, rang thơm làm thuốc bà chuột Đôi dùng dịch chiết từ thân trộn với cơm, thơm phơi khô làm thuốc bà chuột H-ơng độc nh-ng lại có tác dụng khử phong, khử độc, sát trùng, tẩy giun sán [11] ng-ời Thái Lan dùng làm thuốc chữa bệnh da Còn New Caledonia, đ-ợc già nhỏ để băng đắp lên vết lỡ loét, mọng dùng để ăn Ng-ời dân Malaysia dùng nấu n-ớc xông; dùng tro rễ tro làm thuốc bột dẻo chữa mụn rộp mọc vòng Tại nhiều địa ph-ơng Trung Quốc, rễ đ-ợc dùng làm thuốc chữa mụn nhọt s-ng lỡ, ghẻ ngứa, viêm đau kết hạch hoàng đản, đau họng, phong thấp tê đau [11] Việt Nam theo GS.TS Đỗ Tất Lợi ch-a thấy nhân dân dùng h-ơng làm thuốc mà thấy dùng rễ phơi khô trộn với nguyên liệu khác nh- hồi, quế chi bà mía để làm h-ơng thắp vào ngày lễ tết [24] 1.4 Thu hái chế biến h-ơng * Thời gian thu hoạch: trồng vào vụ xuân thu hoạch vào tháng 12, trồng vào vụ thu thu hoạch vào cuối năm sau Hoặc điều kiện mà ch-a thu hoạch đ-ợc đ-ợc để lại đến năm sau thu hoạch đ-ợc nh-ng muộn hai năm rễ tự thối, phân hủy nên chất l-ợng tinh dầu giảm [17] * Thu hoach rễ h-ơng bài: dùng xà beng hay thuổng đào xung quanh nhổ gốc lấy toàn rễ, cắt rễ, rửa đất phơi khô Sau thu hoạch rễ, tách - nhánh từ bụi mẹ trồng lại hố vừa đào (ở rừng) để đảm bảo tái sinh Không thu hái vào mùa hoa non * Bảo quản: cho vào bao tải hay túi nilon để nơi khô thoáng gió * Chế biến: Rễ h-ơng đ-ợc ch-ng cất tinh dầu, dùng công nghệ chế biến sản phẩm hóa mỹ phẩm Đ-ợc dùng phổ biến nhân dân làm h-ơng thắp vào ngày lễ, tết cách dùng rễ h-ơng phơi khô, xay thành bột giấy bản, bên tăm h-ơng làm nứa, tre giàng, đốt có mùi thơm đặc biệt [14] 1.5 Kỷ thuật trồng * Điều kiện gây trồng: H-ơng không đòi hỏi khắt khe điều kiện khí hậu đất đai, thích hợp vùng đồng bằng, trung du vùng núi thấp có độ cao d-ới 400 - 500m so với mực n-ớc biển, không nên trồng nơi đất bị úng ngập hay thoát n-ớc kém, đất kiềm mặn, đất có thành phần giới nặng, bí chặt [17] * Thời vụ trồng: trồng vào vụ Xuân tháng - vụ Hè thu tháng * Ph-ơng thức trồng: trồng hay trồng xen theo băng d-ới tán th-a v-ờn ăn d-ới tán rừng trồng, dọc theo đ-ờng phân lô, đ-ờng ranh cản lửa, đ-ờng băng mô hình canh tác ®Êt dèc ®Ĩ chèng xãi mßn * Xư lý thùc bì: phát cây, dọn cỏ, phát đốt dọn * Làm đất: làm đất toàn diện cày bừa cuốc đập nhỏ, cuốc hố với kích th-ớc 20 x 20 x 20cm * Cự ly trồng: cách 35 cm, hàng cách hàng 40 cm, mật độ trồng từ 2200 - 2500 khóm/ sào Bắc * Chăm sóc bảo vệ: Cây h-ơng mắc bệnh, có chủ yếu bị mối ăn gốc trồng phải bón lót phân có vôi để đề phòng mối ăn 1.6 Tình hình sản xuất tiêu thụ h-ơng Xuất phát từ giá trị h-ơng liệu h-ơng bài, tác dụng sinh thái, hiệu kinh tế cao loại đất nghèo dinh d-ỡng, d-ới tán rừng mà h-ơng ngày đ-ợc nhiều ng-ời trồng rừng lựa chọn Ngày h-ơng đ-ợc trồng rộng rÃi giới, đặc biệt n-ớc Châu nh- Malaysia, Thái Lan, Việt Nam, Đài Loan, Trung Quốc [52] Việt Nam năm khu vực 8o - 23o vĩ Bắc, chịu ảnh h-ởng khí hậu nhiệt đới, thích hợp cho h-ơng phát triễn, thực sách giao đất, giao rừng cho ng-ời dân, h-ơng lựa chọn thích hợp cho việc trồng xen với gỗ, lâu năm vừa cho thu nhập vừa có tác dụng chống xói mòn, chống sa mạc hóa, h-ơng góp phần xóa đói giảm nghèo giảm bớt t-ợng phá rừng ng-ời dân miền núi n-ớc ta, h-ơng đà đ-ợc ng-ời dân khai thác sử dụng từ lâu đời dịp lễ tết, nhiên chủ yếu khai thác thiên nhiên mà ch-a trồng hàng loạt để sử dụng biến loài thành hàng hóa Gần đây, rừng đà dần cạn kiệt số địa ph-ơng đà biết gây trồng h-ơng để sử dụng nh- huyện Cẩm Xuyên (2002) có dự án Lâm Sản gỗ đà chọn h-ơng làm xóa đói giảm nghèo Theo tác giả Xuân Hồng (trung tâm khuyến nông tĩnh Hà Tĩnh) h-ơng "nếu trồng thâm canh, 10 sào h-ơng cho thu nhập từ 1,5 - triệu đồng/năm - nguồn thu nhập đáng kể cho vùng đất nghèo dinh d-ỡng" theo báo cáo dự án có xà đà trồng đ-ợc 12 h-ơng tiếp tục mở rộng diện tích trồng h-ơng [6] huyện vùng cao Sơn Động, Bắc Giang đà lựa chọn h-ơng "xóa đói giảm nghèo" Hiện nay, rễ h-ơng đà đ-ợc th-ơng mại hóa, năm 2002 giá bán rễ h-ơng khô nơi sản xuất đạt 15.000 - 20.000đ/kg, thu hoạch 2,5 rễ khô, bán đ-ợc khoảng 37 - 40 triệu đồng [11] 1.7 Tình hình nghiên cứu h-ơng 1.7.1 Tình hình nghiên cứu giới H-ơng loại đ-ợc sử dụng chủ yếu lấy rễ làm nguyên liệu h-ơng thắp phục vụ ngày lễ, tết Đặc biệt loài đ-ợc sử dụng n-ớc Châu nhiều n-ớc có khí hâu nhiệt đới Hiện đà có vài khảo sát chi Dianella R.G Cooke cộng Từ rễ h-ơng đà tách đ-ợc số chÊt nh-: Musizin (dianella)(1), methyl 2,4-dihydroxy-3,5,6trimethylbenzoate(8), methyl 2,4-dihydroxy-3,6-dimethylbenzoate (7), methyl 2,4dihydroxy-6-methylbenzoate (methyl orsellinate)(9),2,4dihydroxy-6-methoxy-3methylacetophenone(14),5,7-dhydroxy-2,6,8-trimethylchromone(11) 5,7- dihydroxy-2,8-dimethylchromone(13)[43] Chúng đà tìm kiếm nhiều địa khác nh-ng ch-a thấy nghiên cứu đáng kể loài 1.7.2 Tình hình nghiên cứu Việt Nam Nghiên cứu h-ơng Việt Nam ít, ch-a thấy có tài liệu nghiên cứu đáng kể, có công trình nghiên cứu GS.TS Đỗ Tất Lợi cộng Phạm Xuân Cù, Vũ Ngọc Lộ nghiên cứu sơ h-ơng đ-ợc báo cáo hội nghị khoa học tr-ờng Đại học D-ợc năm 1963, theo báo cáo nhận thấy tinh dầu có mùi thơm đặc biệt có rễ mà ch-a rõ mặt hóa học 50 thích h-ơng có khả chịu hạn nên điều kiện độ ẩm thấp nh-ng h-ơng sinh tr-ởng rễ bình th-ờng 4.2.4 ảnh h-ởng môi tr-ờng giâm đến khả rễ cành giâm Hom đ-ợc chọn khỏe mạnh tr-ởng thành, không xử lý chất kích thích NAA Hom đ-ợc chọn làm giống hom mang gốc Mối quan hệ môi tr-ờng rễ đến khả rễ cành giâm đ-ợc thể bảng sau: Bảng 4.6 ảnh h-ởng môi tr-ờng giâm đến khả rễ cành giâm Khả rƠ C«ng thøc Thêi gian rƠ Tû lƯ rƠ (ngµy) (%) IIIa 70 + 85 + 2,05 IIIb 80 + 75,25 + 2,25 IIIc 100 + 50,15 + 5,03 IIIa: Hom đ-ợc giâm vào cát mịn, IIIb: Hom đ-ợc giâm vào đất pha cát khoảng 30% cát + 70% đất IIIc: Hom đ-ợc giâm vào đất thịt Qua kết thể bảng 4.6, cho ta thÊy: * Thêi gian rÔ: ë loại giá thể có thời gian rễ cao t-ơng đ-ơng nhau, giá thể ảnh h-ởng đến thời gian rễ giâm hom Điều hoàn toàn phù hợp với số kết thí nghiệm tr-ớc Hồ Đăng Vang (2000), đà khẳng định giá thể giâm hom ảnh h-ởng đến thời gian rễ cành giâm * Tỷ lệ rễ: Tỷ lệ rễ chịu ảnh h-ởng rõ giá thể giâm hom giá thể cát tinh cho tû lƯ cao nhÊt (85%) tiÕp theo lµ đất thịt pha cát (75,25%), đất thịt thấp (50,15%) 51 Đối với thành phần môi tr-ờng giâm hom: cát có l-ợng n-ớc thấp, nên n-ớc, mặt khác đất cát không bị nén chặt nên dễ rễ thoáng có mùn chất hữu phân giải gây thối rễ Giá thể đất: ng-ợc lại l-ợng mùn cao, thêm vào l-ợng n-ớc giữ đất lớn nen trình phân hủy chất hữu môi tr-ờng Kh nng r ca cnh giâm giá thể dễ gây thối rễ, ảnh h-ởng đến tỷ lệ rễ cành giâm 120 100 100 85 80 80 75.25 70 60 50.15 Thời gian rễ (ngày) Tỷ lệ rễ (%) 40 20 IIIa IIIb IIIc Môi trng giâm cnh Biểu đồ 4.6: ảnh h-ởng môi tr-ờng giâm đến khả rễ cành giâm 4.2.5 ảnh h-ởng thời gian xử lý hạt giống với nhiệt độ đến khả nảy mầm Sau chín có màu tím, thu hái, phơi khô, lấy hạt giống đem xử lý Ngâm hạt giống nhiệt độ 40oC thời gian khác Kết nghiên cứu đ-ợc thể qua bảng sau: Bảng 4.7 ảnh h-ởng thời gian xử lý hạt giống với nhiệt độ đến khả nảy mầm hạt gièng Thêi gian xư lý ChØ tiªu theo dâi Thêi gian nảy mầm 30h 40h 50h 20 15 20 52 (ngày) Tỷ lệ nảy mầm (%) 55 70 60 Qua kết trên, ta thấy hạt h-ơng nảy mầm tạo giống, thời gian ngâm hạt giống ảnh h-ởng đến khả nảy mầm nhiệt độ ngâm 40oC thời 40h cho tỷ lệ nảy mầm cao Kết phù hợp với tài liệu tác giả Trần Ngọc Hải, Phạm Thanh Hà Sau khoảng Kh nng ny mm ca ht tháng đem trồng 80 70 60 50 40 30 20 10 70 60 55 Thời gian nảy mầm 20 30h 15 40h 20 Tỷ lệ nảy mầm(%) 50h Thời gian xử lý hạt ging Biểu đồ 4.7 ảnh h-ởng thời gian xử lý hạt giống với nhiệt độ đến khả nảy mầm hạt giống Qua kết thực nghiệm, đề nghị quy trình nhân giống h-ơng ph-ơng pháp giâm hom gieo hạt nh- sau: 1) Chọn cành giâm: Chọn cành khỏe mạnh, lấy ba vị trí làm hom 2) Cắt đoạn cành giâm dài 10-12 cm có mang lá, cắt bớt 3) Nhúng hom vào dung dịch chất kích thích rễ với thời gian giây 4) Cắm cành giâm vào giá thể Giá thể phải ẩm, thoáng, tốt cát 5) Nhà giâm hom phải che nắng trực xạ, sử dụng ánh sáng tán xạ 53 6) Phun ẩm th-ờng xuyên bình phun s-ơng bình phun thuốc trừ sâu 7) Khi xuất rễ giảm phun n-ớc Khi rễ dài phân nhánh nhiều rễ phụ cho vào bầu đem trồng vào v-ờn -ơm trồng trực tiếp v-ờn 8) Thời vụ giâm tốt H-ơng Sơn Hà Tĩnh tháng đến tháng 11 năm 4.3 Kết phân lập chất từ rễ h-ơng Thực nghiệm: Phân lập hợp chất theo sơ đồ sau Rễ h-ơng (3,0 kg) - Ngâm chiết víi metanol - CÊt thu håi dung m«i Cao metanol (124g) - Phân bố nuớc - Chiết lần l-ợt víi n-hexan, etylaxetat butanol Cao n-hexan Cao etylaxetat (23,5g) (10,7g) dịch nước - S¾c ký cét silicagel (142g) - S¾c ký cét silicgel n-hexan : axeton cloroform : metanol 15:1 Chất 9:1 Chất 54 Sơ đồ 4.1: Phân lập hợp chất h-ơng Rễ h-ơng đựoc phơi khô (3,0kg), xay nhỏ ngâm chiết với metanol nhiệt độ phòng (10 ngày) Dịch chiết đ-ợc cất thu hồi dung môi thu đ-ợc cao metanol (124g) Phân bố cao metanol n-ớc, sau chiết lần l-ợt với n-hexan etyl axetat Cất thu hồi dung môi thu đ-ợc cao t-ơng ứng 10,7g 23,5g Cao n-hexan (10,7g) đ-ợc phân tách sắc ký cột silicagel, hệ dung giải hấp phụ n-hexan : axetol ( 15 : 1), thu đ-ợc chất (756mg) Cao etyl axetat (23,5g) đ-ợc phân tách sắc ký nhồi silicagel, hệ dung môi giải hấp chloroform : metanol ( : 1) thu đ-ợc chÊt (235mg) 4.3.1 Hỵp chÊt (-sitosterol) Hỵp chÊt 1: Tinh thể hình kim không màu, nóng chảy 135-136oC Phỉ EI-MS cho m¶nh ion [M]+ 414, øng víi công thức C29H50O Phổ hồng ngoại IR hợp chất có b-ớc sóng cực đại 3400, 3025, 1410, 1250, 690 820 cm-1 Phổ 1H-NMR hợp chÊt cho thÊy tÝn hiƯu cđa nhãm metyl ë 1,01 (3H, s, 19-CH3), 0,92 (3H, d, 21-CH3), 0,84 (3H, d, 29-CH3), 0,83 (3H, d, H-26), 0,81 (3H, d, 27-CH3), 0,68 (3H, s, 18-CH3), Phỉ 13C-NMR cđa hỵp chÊt cã 29 tÝn hiÖu cho thÊy cã 29 nguyªn tư cacbon bao gåm nhãm CH, 12 nhãm CH2, nhãm CH3 vµ cacbon bËc 4, sè liệu đ-ợc trình bày bảng 4.8 Bảng 4.8: Số liƯu phỉ 13C- NMR cđa hỵp chÊt (-sitosterol) Cacbon DEPT Độ dịch chuyển hoá học (ppm) CH2 37,3 CH2 29,7 CH 71,8 55 CH2 42,3 C 140,8 CH 121,7 CH2 31,9 CH 31,7 CH 50,2 10 C 36,5 11 CH2 21,1 12 CH2 39,8 13 C 42,3 14 CH 56,8 15 CH2 24,3 16 CH2 28,3 17 CH 56,1 18 CH3 11,9 19 CH3 19,8 20 CH 36,2 21 CH3 18,8 22 CH2 33,9 23 CH2 26,1 24 CH 45,9 25 CH 29,2 26 CH3 19,1 27 CH3 19,4 28 CH2 23,1 29 CH3 11,9 56 Tõ c¸c sè liƯu phỉ UV, IR, EI-MS, 1H- NMR, 13C- NMR cho c¸c tín hiệu hoàn toàn phù hợp với liệu phổ -sitosterol chuẩn [42] Hợp chất phổ biến rộng r·i thùc vËt [41] 29 28 21 18 22 23 12 11 13 17 19 HO 24 25 26 16 14 10 27 20 15 (1) -Sitosterol 4.3.2.Hỵp chÊt (-sitosterol-3-O--D-glucopyranosit) Chất rắn vô định hình, không màu không tan cloroform, axeton, dễ tan metanol, điểm nóng chảy 283-285oC Phổ IR hợp chất có b-ớc sóng cực đại 3460, 3050, 1650 815 cm-1 Phổ khối l-ợng EI-MS cho cho pic ion m/z 414 [M-glc]+ suy công thức phân tử t-ơng ứng C35H60O6 Phổ 1H-NMR xác nhận có mặt proton liên kết đôi 5,32 ppm; nhóm hydroxy vùng 3,46 ppm đến 4,00 ppm; nhóm CH2 t-ơng ®-¬ng C6, gèc ®-êng cã tÝn hiƯu ë 3,66 ppm ®Õn 4,25 ppm TÝn hiÖu céng h-ëng tõ 2,20 ®Õn 2,40 ppm đặc tr-ng cho proton cacbon số 4, vùng từ đến ppm vùng xen phủ dày đặc tín hiệu nhóm -CH- -CH2vòng no Phổ 13C-NMR DEPT đà quan sát thấy 35 tín hiệu nguyên tử C, nguyên tử cacbon gắn với oxy (nằm vùng 61,1 ®Õn 100,8 ppm) Cã hai tÝn hiƯu 140,5 vµ 121,2 ppm thuộc liên kết olefin 57 Bảng 4.9: Sè liƯu phỉ 13C- NMR cđa hỵp chÊt (-sitosterol-3-O--D-lucopyranosit) Cacbon DEPT Độ dịch chuyển hoá học (ppm) CH2 38,2 CH2 31,3 CH 77,0 CH2 40,1 C 140,4 CH 121,1 CH2 33,3 CH 31,4 CH 49,6 10 C 36,2 11 CH2 22,6 12 CH2 40,0 13 C 41,8 14 CH 56,2 15 CH2 25,5 16 CH2 28,7 17 CH 55,4 18 CH3 11,7 19 CH3 19,7 20 CH 36,8 21 CH3 19,0 22 CH2 35,4 58 23 CH2 29,2 24 CH 45,1 25 CH 27,7 26 CH3 18,9 27 CH3 20,6 28 CH2 23,8 29 CH3 11,7 1’ CH 100,8 2’ CH 73,4 3’ CH 76,6 4’ CH 70,1 5’ CH 76,7 6' CH2 61,1 C¸c sè liƯu phỉ thu đ-ợc so với số liệu phổ tài liệu [42] đà khẳng định chất -sitosterol-3-O--D-glucopyranosit HO H H HO O OH HO H O H H (2) -Sitosterol-3-O--D-glucopyranosit 59 Kết luận kiến nghị A Kết luận Trên sở nghiên cứu đề tài rút số kết luận sau: Đặc điểm hình thái, giải phẫu thực vật học H-ơng (Dianella ensifolia) loài thân thảo, mầm, sống lâu năm, thân ngầm, mọc thành khóm (bụi), có biên độ sinh thái rộng, có khả trồng xen với gỗ lớn trồng đất nghèo dinh d-ỡng đồi trọc Bộ rễ phát triễn mạnh nên có tác dụng chống xói mòn, số l-ợng hạt nhiều, nội nhũ lớn có khả tái sinh hạt Ph-ơng pháp nhân giống Qua nghiên cứu sơ ph-ơng pháp nhân giống h-ơng ph-ơng pháp giâm hom gieo hạt, có số kết ln nh- sau: * §èi víi xư lý chÊt kÝch thích rễ NAA: nồng độ 600ppm nhúng thời giây cho kết cao * Đối với vị trí hom đến khả rễ ba vị trí (hom ngọn, hom hom gốc) có khả rễ, hom mang gốc có khả rễ cao nhÊt xư lý NAA víi nång ®é 600ppm thời gian giây * Đối với môi tr-ờng giâm hom: Trong ba loại môi tr-ờng (cát tinh, đất pha cát, đất thịt) giá thể cát tinh cho kÕt qđa cao nhÊt * §èi víi thêi gian năm từ tháng đến tháng 12 từ tháng đến tháng 11 cho kết cao t-ơng ứng với nhiệt độ từ 20oC - 26oC độ Èm tõ 87 - 90% 60 * ë nhiÖt độ ngâm hạt giống 40oC thời gian ngâm hạt giống 50h cho tỷ lệ nảy mầm cao Thành phần hóa học rễ h-ơng Từ dịch chiết rễ h-ơng H-ơng Sơn - Hà Tĩnh ph-ơng pháp sắc ký đà chiết suất đ-ợc hai hợp chất Bằng ph-ơng pháp phổ UV, IR, MS NMR đà xác định đ-ợc cấu trúc hóa học hai hợp chất sitosterol -Sitosterol-3-O--D-glucopyranosit B Kiến nghị Đề tài cần đ-ợc nghiên cứu thời gian dài lĩnh vực trồng trọt chăm sóc, ảnh h-ởng chất kích thích rễ đến suất hiệu kinh tế rễ Rễ h-ơng phận sử dụng chính, cần làm rõ thêm thành phần hóa học để làm sáng tỏ giá trị thực loài 61 Tài liệu tham khảo A Tài liệu tiếng việt: Nguyễn Bá (2007), Hình thái học thực vật, NXB Giáo dục Nguyễn Bá (2007), Giáo trình thực vật, NXB Giáo dục Nguyễn Tiến Bân (2000), Tên rừng Việt Nam NXB Nông nghiệp, Hà Nội Nguyễn Tiến Bân, Danh lục loài thực vật Việt Nam, NXB Nông nghiệp Hà Nội, 2005 Nguyễn Ngọc Bình, Phạm Đức Tuấn (2000), Trồng nông nghiệp, d-ợc liệu đặc sản d-ới tán rừng NXB Nông nghiệp, Hà Nội Hà Thị Thanh Bình, Trồng trọt đại c-ơng NXB Nông nghiệp, Hà Nội 2005 Phạm Thị Trân Châu (1997), Thực hành hoá sinh học, NXB Giáo dục Võ Văn Chi, Nguyễn Bá Cs (1982), Từ điển thực vật học, NXB Khoa häc vµ Kû thuËt, Hµ Néi Hoµng §øc Cù (2006), Sinh häc thùc vËt, NXB §¹i häc Quốc gia Hà Nội 10 Dự án Lâm sản gỗ pha (2007), Tài liệu khuyến lâm LSNG, Văn phòng vùng miền Bắc 11 Dự án Lâm sản gỗ (2002), Tài liệu tập huấn Lâm sản sản gỗ, Văn phòng dự án lâm sản gỗ - Hà Tĩnh 12 Nguyễn Hữu Đĩnh, Trần Thị Đà, ứng dụng số ph-ơng pháp phổ nghiên cứu cấu trúc phân tử, NXB Giáo dục, 1999 62 13 Trần Ngọc Hải (2006), Kỷ thuật gây trồng, thu hái Lâm sản gỗ, Đại học Lâm nghiệp 14 Trần Ngọc Hải, Phạm Thanh Hà (2007), Kỷ thuật trồng số loài lâm sản gỗ có giá trị kinh tế NXB Nông nghiệp, Hà Nội 15 Trần Ngọc Hải (2004), Bài giảng Lâm sản gỗ, ĐHLN 16 Đào Hữu Hồ (1999), Xác suất thống kê, NXB Đại học Quốc gia Hà Nội 17 Triệu Văn Hïng (2004), Kû thuËt trång mét sè c©y thùc phÈm d-ợc liệu NXB Nông nghiệp, Hà Nội 18 Trần ích (1983), Thực hành hóa sinh, NXB Giáo dục 19 Lê Đình Khả, D-ơng Mộng Hùng, Giống rừng, NXB Nông nghiệp, Hà Nội, 2003 20 Trần Công Khánh (1981), Thực tập hình thái giải phẩu thực vật, NXB Đại học Trung học chuyên nghiệp 21 R.M Klein, D.T Klein (1979), Ph-ơng pháp nghiên cứu thực vật, (tài liệu dịch) NXB Khoa học Kỹ thuật, Hà Nội, Tập 22 Kỷ thuật trồng H-ơng VCD, Trung tâm khuyến nông Quốc gia, Hà Nội, 2008 23 Nguyễn Thị Lan, Phan Tiến Dũng (2006), Ph-ơng pháp thí nghiệm, NXB Nông nghiệp, Hà Nội 24 Đỗ Tất Lợi (2005), Những thuốc vị thuốc Việt Nam, NXB y học 25 Đỗ Tất Lợi (1963), Nghiên cứu sơ h-ơng Báo cáo hội nghị khoa học tr-ờng Đại học D-ợc 26 Trần Đình Ly cộng tác (1993), 1900 loài có ích Việt Nam, NXB giới 27 Chu Văn Mẫn (2001), ứng dụng tin học sinh học, NXB Đại học Quốc gia, Hµ Néi 28 Ngun Duy Minh, CÈm nang kû thuật nhân giống NXB Nông nghiệp 2005 63 29 Ngun Duy Minh, Ngun Nh- Khanh (1982), Thùc hµnh sinh lý thực vật, NXB Giáo dục 30 Nguyễn Văn Mùi (2001), Thực hành hóa sinh học, NXB Đại học Quốc gia, Hà Nội 31 Hoàng Thị Sản, Phan Nguyên Hồng Nguyễn Tề Chỉnh (1980), Hình thái giải phẩu thực vật, NXB Giáo dục 32 Hoàng Thị Sản, Trần Văn Ba (1998), Giải phẩu hình thái học thực vật, NXB giáo dục 33 Hoàng Thị Sản (2006), Phân loại thực vật, NXB Giáo dục 34 Sở Nông nghiệp Phát triễn nông thôn Hà Tĩnh, Tài liệu khuyến lâm 35 Hoàng Minh Tấn, Nguyễn Quang Thanh, Chất điều hòa sinh tr-ởng trồng, NXB Nông nghiệp, Hà Nội, 1993 36 Trần Thế Tục, Hoàng Ngọc Thuận, Chiết ghép giâm cành, tách chồi ăn quả, NXB Nông nghiệp, Hà Nội, 2000 37 Nguyễn Văn Trí, Nguyễn Xuân Giao, Hỏi đáp kỷ thuật canh tác đất dốc trồng lâm nghiệp hộ gia đình NXB Khoa học tự nhiên công nghệ, 2008, Hà Nội 38 Nguyễn Thị Tr-ờng (chủ biên) Giáo trình trồng trọt NXB Hà Nội 2005 39 Vũ Văn Vụ (chủ biên), Sinh lý thực vật NXB Giáo dục, Hà Nội 2005 40 Vũ Văn Vụ, Sinh lý học thực vật, NXB Giáo dục, Hà Nội, 2001 B Tài liÖu tiÕng Anh: 41 Dictionary of Natural product on CD-Rom, Chapman and Hall-CRC (2005) 42 Kojima H., Sato N., Hatano A., Ogura H (1990), Sterol glucosides from Prunella vulgaris, Phytochemistry, 29, pp 2351-2355 64 43 V Lojanapiwatna, K Chancharoen, K Sakarin and P Wiriyachitra, Chemical constituents of Dianella ensifolia Redoute., (1982), Prince of Songkla University, Hat Yai, Thailand C Tµi liƯu internet: 44 http//:www.archive.org 45 http//:www.discoverlife.org 46 http//:www.isaaa.org 47 http//:www.illustratedgarden.org 48.http//:www.lrc-hueuni.edu.vn/dongy/show_target.plx?url=/thuovdongy/H/ HuongBai.ht&key=&char=H 49 http//:khuyennongvn.gov.vn 50 http//:www.sinhhocvietnam.com.vn 51 http//:translate.googleusercontent.com 52 http//:www.vocw.edu.vn 53 http//:www.vncreatures.net ... phân loại: Theo [4] Giới (regnum): Thùc vËt (Plantae) Ngµnh (divisio): Ngäc lan (Magnoliophyta) L? ?p (class): Hành (Liliopsida) Phân l? ??p (Subclass): Liliidae Bộ (ordo): Liliales Họ (familia): H-ơng... (Dianella ensifolia) mọc H-ơng Sơn - Hà Tĩnh Mục tiêu đề tài nghiên cứu đặc điểm thực vật, hoá sinh ph-ơng pháp nhân giống h-ơng nhằm góp phần vào việc mở rộng Qua cung cấp thêm dẫn liệu số đặc. .. Liliales Họ (familia): H-ơng (Phormiaceae) Chi (genus): Dianella Loài (species): Dianella ensifolia Họ h-ơng (Phormiaceae) gồm khoảng chi Chi h-ơng (Dianella) gồm khoảng 20 - 25 loài, phân bố chủ yếu