TÌM HIỂU PHƯƠNG PHÁP lấy mẫu, cố ĐỊNH mẫu làm TIÊU bản mô

TIỂU LUẬN HỌC PHẦN TỔ CHỨC VÀ PHÔI THAI HỌC Tên đề tài TÌM HIỂU PHƯƠNG PHÁP LẤY MẪU, CỐ ĐỊNH MẪU LÀM TIÊU BẢN MÔ MỤC LỤC PHẦN 2. NỘI DUNG 1 2.1. Giới thiệu về tiêu bản 1 2.1.1. Khái niệm 1 2.1.2. Phân loại 2 2.1.3. Các ứng dụng làm tiêu bản mô học 2 2.2.1. Phương pháp thường quy 3 2.2.1.1. Lấy từ mô tươi 3 2.2.1.2. Lấy từ mô cố định thường qui 4 2.2.2. Phương pháp lấy mẫu với một số mẫu đặc biệt: thần kinh, tiêu hóa… 4 2.2.2.1. Tử cung 4 2.2.2.2. Dạ dày bị loét 5 2.2.2.3. Thần kinh ngoại biên 6 2.2.3. Lưu ý khi lấy mẫu 7 2.3. Cố định mẫu 8 2.3.1. Mục tiêu cố định mẫu 8 2.3.2. Phương pháp vật lý 8 2.3.3. Phương pháp hóa học 9 2.3.3.1. Phương pháp thường quy 9 2.3.3.2. Các phương pháp đặc biệt 11 PHẦN 3 KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 13 TÀI LIỆU THAM KHẢO 14 DANH MỤC CÁC HÌNH ẢNH Hình 2. 1 Chất nhiễm sắc 1 Hình 2. 2 Lấy tiêu bản 2 Hình 2. 3 Lấy tiêu bản mô tươi 3 Hình 2. 4 Cắt bỏ lát mỏng 4 Hình 2. 5 Tiêu bản dà dày lở loét 5 Hình 2. 6 Lấy tiêu bản mô thần kinh 6 Hình 2. 7 Cố định mẫu mô 8 Hình 2. 8 Ký thuật lấy mẫu 9 Hình 2. 9 Cho mô vào hoá chất 12 PHẦN 1. MỞ ĐẦU Xét nghiệm mô bệnh học và tế bào bệnh học là nền tảng vô cùng quan trọng trong chẩn đoán, được đánh giá là tiêu chuẩn vàng để xác định bệnh. Nó không chỉ là chẩn đoán mô bệnh học hoặc tế bào bệnh học đơn thuần, mà còn có vai trò quyết định cho các chỉ định lâm sàng, đồng thời cung cấp các dữ liệu tiên lượng quan trọng, giúp cho việc lựa chọn phương pháp điều trị nội khoa hoặc ngoại khoa một cách xác đáng nhất. Không những thế, các dữ liệu mà mẫu xét nghiệm tế bào bệnh học và mô bệnh học cung cấp còn được sử dụng để đánh giá hiệu quả của việc điều trị hiện hành hoặc các thử nghiệm điều trị mới, cũng như cung cấp các thông tin giúp theo dõigiám sát diễn biến bệnh tật trong các chương trình sàng lọc tại cộng đồng. Chỉ riêng lĩnh vực ung thư, trong thời gian tới, phương pháp điều trị đích (điều trị ung thư theo cá thể) sẽ ngày càng phát triển và chuyên ngành giải phẫu bệnh tế bào bệnh học với xét nghiệm mô bệnh học, hóa mô miễn dịch và đặc biệt là kỹ thuật lai tại chỗ sẽ là những công cụ hữu ích nhất cho nhà lâm sàng ung thư trong việc chẩn đoán, điều trị và tiên lượng bệnh. Hầu hết các công ty chuyên về chăn nuôi luôn đặt vấn đề lấy mẫu, xét nghiệm và đưa ra chuẩn đoán chính xác, nhanh chống kịp thời để có những biện pháp chính xác và tránh thiệt hại kinh tế ít nhất có thể. Vì thế việc tìm hiểu về phương pháp lấy mẫu, cố định mẫu để làm tiêu bản đi xét nghiệm mô học rất quan trọng, quyết định độ chính xác của xét nghiệm. Xuất phát từ những vấn đề đó em đã chọn đề tài: “Tìm hiểu phương pháp lấy mẫu, cố định mẫu làm tiêu bản mô” làm chủ đề cho bài tiểu luận học phần tổ chức và phôi thai học. PHẦN 2. NỘI DUNG 2.1. Giới thiệu về tiêu bản 2.1.1. Khái niệm Tiêu bản mô học là một lát cắt mỏng các mô hoặc cơ quan bình thường, có chiều dày khoảng 46 μm và được nhuộm màu. Kỹ thuật làm tiêu bản mô học có thể tóm tắt như sau: 1. Cố định mẫu mô: ngâm mẫu mô vào chất cố định (Formol, cồn...) một cách nhanh chóng nhằm ngăn cản quá trình tự hủy nhưng không làm thay đổi cấu tạo bình thường của mô hoặc cơ quan. 2. Khử nước mẫu mô bằng cồn có nồng độ tăng dần. 3. Đúc khối mẫu mô bằng paraffin. 4. Cắt lát mỏng bằng máy cắt (microtome). 5. Dán các lát cắt lên phiến kính (lame). 6. Tẩy paraffin và nhuộm màu. 7. Đặt lá kính (lamelle) lên trên mẫu mô đã nhuộm màu để bảo vệ. Hình 2. 1 Chất nhiễm sắc Trong kỹ thuật mô học, thường dùng kỹ thuật nhuộm 2 màu HE (Hematoxylin Eosin): màu acide và màu base. Cấu trúc ưa base là cấu trúc có chứa gốc acide (như chất nhiễm sắc, hạch nhân, ribosome, lưới nội bào hạt), bắt màu các phẩm nhuộm kiềm như xanh methylen, hematoxylin. Cấu trúc ưa acide là cấu trúc có chứa gốc kiềm (chủ yếu là các protein), bắt màu các phẩm nhuộm acide như eosin. Màu acide thể hiện dưới dạng màu đỏ, hồng, còn màu base là màu tím, xanh. Vì vậy, khi khảo sát tiêu bản mô học phải chú ý đến: Đặc điểm về hình thái như: vị trí, kích thước, cách sắp xếp, hình dạng tế bào v.v.. Màu sắc (thay đổi tùy theo kỹ thuật nhuộm màu được áp dụng). (Mã Hoàng Đức, 2011) 2.1.2. Phân loại Tiêu bản mô học hay tiêu bản giải phẫu bệnh: một bộ phận hay một tạng lấy từ người chết, đuợc phẫu tích, bảo quản bằng hoá chất để làm mô hình giảng dạy, nghiên cứu. Tiêu bản phẫu thuậttổn thương: các khối u, dạ dày, đoạn ruột, mảnh gan... được cắt bỏ, dùng để xét nghiệm xác định bệnh, hoặc bảo quản làm mô hình giảng dạy, nghiên cứu. Tiêu bản vi thể. Tiêu bản cây thuốc: tiêu bản đại thể (ngâm, mẫu khô...) và vi thể. Tiêu bản động vật thuốc: (tiêu bản đại thể và vi thể) (https:vi.wikipedia.orgwiki) Hình 2. 2 Lấy tiêu bản 2.1.3. Các ứng dụng làm tiêu bản mô học Tìm hiểu vai trò, chức năng của các cấu trúc. Nghiên cứu những phản ứng của tế bào, mô và cơ quan đối với những tác động của môi trường. Nghiên cứu, phát hiện những cấu trúc vỉ thể, siêu vi mới trong tế bào, mô và cơ quan Tìm hiểu sự hoạt động và ý nghĩa chức năng của chúng Nghiên cứu những qui luật phát triển và biệt hoá của tế bào và mô Tìm hiểu sự hoạt động và ý nghĩa chức năng của chúng Nghiên cứu những quy luật phát triển và biệt hoá của tế bào và mô Tìm hiểu sự thích nghỉ, sự tái tạo sinh lý, sự tái tạo hồi phục của chúng dưới tác động của các yếu tổ sinh học, vật lý học và hoá học. (Trịnh Bình và cs, 2004) 2.2. Phương pháp lấy mẫu mô học Trong kỹ thuật mô học, sự trích thủ hay còn gọi là lấy mẫu là bước kỹ thuật đầu tiên có mục đích lấy tế bào, mô, cơ quan ở cơ thể sống hay đã chết. Bước kỹ thuật này có ý nghĩa rất lớn. (Trịnh Bình và cs, 2004) 2.2.1. Phương pháp thường quy 2.2.1.1. Lấy từ mô tươi Lấy mẫu từ mô tươi tốt hơn mô đã được cố định thường qui. Cần nhanh chóng lấy mẫu ngay sau khi bệnh phẩm được cắt khỏi cơ thể. Đặt bệnh phẩm lên trên một thớt nhựa cứng, sạch. Dùng lưỡi dao cạo cắt từng lát dày l mm. Hình 2. 3 Lấy tiêu bản mô tươi Nhỏ nhiêu giọt dung dịch bảo quản glutaraldehyde 2,5% lên một vùng khác của tâm thớt, đặt các lát cắt mô lên phía trên và phủ lên trên với vải giọt dưng địch glutaraldehyde 2, 5%. Băm nhỏ các lát cắt thành những khối 1mm3 bằng lưỡi dao sắc và nhúng bệnh phâm vào dung dịch glutaraldehyde 2,5% lạnh (4°C). Lấy 5 đến 15 mảnh mô là đủ. Nếu bệnh phẩm có nhiều vùng tồn thương khác nhau trên đại thể, cân lấy riêng và đưa đến phòng xét nghiệm hiện vi điện tư trong những lọ nêng biệt. Mô có thể được giữ trong dung dịch cố định dùng cho hiển vi điện tử trong nhiều ngày ở 4°C (không quá một tháng) trước khi được đưa đến các phòng xét nghiệm hiện vị điện tử. 2.2.1.2. Lấy từ mô cố định thường qui Trong mẫu mô được cố định thường qui, thường có nhiều lỗi gây ra do cố định, nhưng những hình thái cần nhận diện được trên kính hiển vi điện tử để chẩn đoán vẫn còn được bảo tồn (như các cầu liên bào, hạt chế tiết thần kinh, hạt sắc tố). Cách tiễn hành lấy mẫu như sau: Cắt bỏ lát mỏng 1 mm từ bờ của bệnh phẩm nơi tiếp xúc trực tiếp với dung dịch có định. Tiến hành như đối với mô tươi (như trên) (Đặng Văn Dương và cộng sự, 2016) Hình 2. 4 Cắt bỏ lát mỏng 2.2.2. Phương pháp lấy mẫu với một số mẫu đặc biệt: thần kinh, tiêu hóa… 2.2.2.1. Tử cung Việc lấy mẫu mô để kiểm tra mất nhiều thời gian hơn và được thực hiện như sau: Bệnh nhân nằm trên ghế phụ khoa, bác sĩ kiểm tra ống cổ tử cung bằng máy soi cổ tử cung để xác định khu vực bệnh lý, Sử dụng các kỹ thuật khác nhau (sinh thiết dao mổ, laser, đốt điện), thu được vật liệu của các mô bị ảnh hưởng. Thuốc chuẩn bị được gửi để nghiên cứu đến phòng thí nghiệm. Khu vực bị tổn thương của cổ tử cung được điều trị bằng một chế phẩm cầm máu, khâu vết thương trong trường hợp chảy máu. (https:vi.dzvranje.org987histologicalexaminationofthecervix.html) 2.2.2.2. Dạ dày bị loét Quan sát bệnh phẩm tươi. Mở bệnh phẩm theo bờ cong lớn. Nếu ổ loét bờ cong lớn, ánh cất qua tổn thương (hoặc mở theo bờ cong nhỏ). Phẫu tích các nhóm hạch và cặt bỏ mạc nối lớn. Tìm ổ loét chính và các vết loét trợt nhỏ của niêm mạc, các nốt trong thành và dưới thanh mạc phối hợp. Ghim dạ dày lên tắm bảng lie, cố định qua đêm bằng formol đệm trung tính 10%. Hình 2. 5 Tiêu bản dà dày lở loét Chụp hình để xác định vị trí cần cắt lọc. Cắt lọc bệnh phẩm xét nghiệm mô bệnh học: Ổ loét: ít nhất bốn lát cắt theo vị trí 12, 3, 6,9 giờ. Bờ cong nhỏ: 2 lát cắt ở bờ giải phẫu gần (đánh dấu diện cắt trên bằng mực Tàu). Bờ cong lớn: 2 lát cắt ở bờ giải phẫu gần (đánh dấu diện cắt bằng mực Tàu). Môn vị và tá tràng: 2 lát cắt, bao gồm diện cắt dưới. Các tổn thương khác, nếu có. Hạch: toàn bộ hạch tìm được. (Đặng Văn Dương và cs, 2016) 2.2.2.3. Thần kinh ngoại biên Khảo sát và cắt lọc loại bệnh phẩm này nên được thực hiện tại giường bệnh hoặc ngay sau khi nhận bệnh phẩm ở khoa giải phẫu bệnh. Chú ý tránh làm kéo căng hoặc dập nát. Đo chiều dài và đường kính (sinh thiết thần kinh thường từ 36cm). Để vùi nến, cắt 1 đoạn dài 2 4 mm cố định trong B5, sau đó lại cố định trong formol đệm trung tính 10%, phân chia bệnh phẩm để có đủ đoạn cắt ngang và cắt dọc. Hình 2. 6 Lấy tiêu bản mô thần kinh Để làm “cắt mỏng” và làm xét nghiệm hiển vi điện tử, cố định 1 đoạn trong glutaraldehyde 2,5M ở pH 7,4. Sau khi cố định 2 giờ, đặt sợi thần kinh dưới kính hiển vi và cắt lọc thành nhiều đoạn 34 mm. Đặt 4 5 mẫu này vào khối (block) lớn, các đoạn khác cắt theo chiều dọc. Cắt 20 30 mẫu, mỗi mẫu có 2 3 bó. Để làm xét nghiệm hiển vi điện tử, nên cắt các mẫu 13 mm3 . Để chuẩn bị tách từng sợi thần kinh, cắt lọc (cắt lọc bệnh phẩm làm xét nghiệm mô bệnh học là cắt 1 lát ngang và 1 lát dọc để vùi nến). các đoạn thần kinh dài 1 2cm ngay sau khi sinh thiết, cố định trong formol đệm trung tính 10%, sau đó cố định trong 0504 trong dung dịch đệm Millonig ở pH 7,4 trong 3 5 giờ với nhiệt độ phòng, sau đó qua glycerin, để lưu trữ cho đến lúc quan sát. Nếu có chỉ định, dùng 1 mẫu nhỏ sợi thần kinh tươi để nghiên cứu sinh hóa, nhuộm lipid và làm kỹ thuật miễn dịch huỳnh quang. (Đặng Văn Dương và cs, 2016) 2.2.3. Lưu ý khi lấy mẫu Việc lấy mẫu bệnh phẩm vô cùng quan trọng, quyết định chất lượng mẫu bệnh phẩm trong xét nghiệm giải phẫu bệnh tế bào, ảnh hưởng rất nhiều tới kết quả chẩn đoán. Dù là mẫu tế bào, mẫu dịch hay mô nào, khi thực hiện lấy mẫu cần đảm bảo 2 yếu tố: lấy trúng và lấy đủ. Lấy trúng: lấy đúng vùng tổn thương. Lấy đủ: lấy đủ Đối với mẫu tế bào: số lượng tế bào càng nhiều càng tốt. Bệnh phẩm sau khi lấy ra được dàn lên lam kính. Lưu ý khi dàn tế bào trên lam kính cần dàn mỏng và đều, không dàn mạnh tay làm dập nát và biến dạng tế bào. Đối với mẫu dịch các khoang cơ thể (màng phổi, màng bụng, màng tim): tối thiểu 10ml trở lên. Đối với mẫu mô sinh thiết: lấy càng nhiều mảnh càng tốt tùy theo kích thước khối u, nên lấy được cả vùng mô lành và mô u. Bệnh phẩm tế bào cổ tử cung, âm đạo: không lấy bệnh phẩm lúc đang kỳ kinh; Không quan hệ tình dục trước khi đến khám ít nhất 3 ngày; Không thụt rửa sâu âm đạo trong vòng 24 giờ; Không đặt thuốc âm đạo trong vòng 7 ngày trước khi đến khám; Cần lấy trước khi làm các thử nghiệm khác như: nghiệm pháp Lugol, acid acetic...(https:medlatec.vn) Miếng mô hay cơ quan phải tươi, tốt nhất sau khi giết súc vật phải lấy ngay, nếu ở người thì phải lấy khi làm phẫu thuật, nếu lấy ở tử thi thì phải lấy trước 6 giờ sau khi chết, trừ khi cần nghiên cứu để xác định bệnh và nguyên nhân chết. Động tác khi trích thủ phải nhẹ nhàng, tránh đụng chạm mạnh dễ gây những biến đổi do tác nhân cơ học. Không dùng kẹp phẫu tích kẹp vào vùng cần nghiên cứu. Không bóp mạnh và không rửa miếng mô. Khi cắt phải dùng dao sắc và cắt theo một hướng. Trích thủ xong phải cố định ngay, tránh hiện tương hoại tứ sau khi chết của tế bào. (Trịnh Bình và cs, 2004) 2.3. Cố định mẫu 2.3.1. Mục tiêu cố định mẫu Cố định là thủ thuật làm chết tế bào nhưng vẫn giữ chúng trong tình trạng giống như khi chúng còn sống. Mục tiêu làm cho tế bào giữ nguyên được hình đáng, không bị chuyển dịch, giữ được hoàn toàn giống như khi sống tất cả những thành phần tạo ra chúng, đồng thời không làm xuất hiện những chỉ tiết mới trong tế bào mà bình thường khi sống nó không có. Cố định ngăn sự “hoại tử sau chết”. (Trịnh Bình và cs, 2004) Hình 2. 7 Cố định mẫu mô 2.3.2. Phương pháp vật lý Các phương pháp vật lý bao gồm nhiệt, vi sóng và bảo quản lạnh (đông khô). Cố định bằng nhiệt hiếm khi được sử dụng trên mẫu mô, sự ứng dụng của nó chỉ hạn chế với phiến tiêu bản mẫu vi khuẩn (smear). Tuy nhiên, cố định bằng vi sóng, có thể được coi là một hình thức cố định nhiệt, hiện nay được sử dụng rộng rãi và thường quy trong phòng thí nghiệm. Bảo quản lạnh (Cryopreservation), luôn ở dạng đông khô có một số ứng dụng trong hóa mô nhưng không luôn được áp dụng cho mẫu mô chẩn đoán. mô , chất nền ngoại bào , các cơ quan hoặc bất kỳ cấu trúc sinh học nào khác dễ bị hư hỏng do động học hóa học không được kiểm soát được bảo quản bằng cách làm lạnh đến nhiệt độ rất thấp (thường là 80 ° C sử dụng carbon dioxide rắn hoặc 196 ° C sử dụng nitơ lỏng ). Ở nhiệt độ đủ thấp, bất kỳ enzym nàohoặc hoạt động hóa học có thể gây hư hỏng vật liệu sinh học được đề cập sẽ bị dừng lại một cách hiệu quả. (https:bimetech.vncodinhmotebao.html) Hình 2. 8 Ký thuật lấy mẫu 2.3.3. Phương pháp hóa học 2.3.3.1. Phương pháp thường quy CỐ ĐỊNH BỆNH PHẨM BẰNG FORMOL ĐỆM TRUNG TÍNH Pha dung dịch formol đệm trung tính 10% : + Formaldehit 3740% 100ml + Nước cất 2 lần 900ml + Sodium phosphat monobasic (NaH2PO4) 4gram + Sodium phosphate dibasic anhydrous (NaH2PO4 khan) 6,5gram Các bước thực hiện : Pha bệnh phẩm thành các mẫu nhỏ, dày 5mm có thể để vừa trong khuôn nhựa chuyển bệnh phẩm. Thả ngay bệnh phẩm tươi vừa pha vào trong lọ đã có dung dịch formol đệm trung tính 10%, không để bệnh phẩm dính vào thành lọ. Lượng dung dịch cố định phải nhiều gấp 2030 lần thể tích bệnh phẩm. Thời gian cố định 4 12 giờ tuỳ theo mảnh bệnh phẩm to hay nhỏ nhưng không dưới 4 giờ hay nhiều hơn 12 giờ. (BS. Đặng Văn Dương và cộng sự, 2016) CỐ ĐỊNH BỆNH PHẨM BẰNG DUNG DỊCH GENDRE Pha dung dịch Gendre: + Cồn 95 độ bão hoà acid picric 80ml + Formandehit 3740% 15ml + Acid axetic lạnh nguyên chất 5ml Các bước thực hiện Phẫu tích bệnh phẩm thành các mẫu nhỏ, dày 5mm có thể để vừa trong khuôn nhựa chuyển bệnh phẩm. Thả ngay bệnh phẩm tươi vừa pha vào trong lọ đã có dung dịch Gendre, không để bệnh phẩm dính vào thành lọ. Lượng dung dịch cố định phải nhiều gấp 2030 lần thể tích bệnh phẩm. Thời gian cố định 4 giờ. (Đặng Văn Dương và cộng sự, 2016) CỐ ĐỊNH BỆNH PHẨM BẰNG DUNG DỊCH ELFTMAN Pha dung dịch Elftman: + Chlorid thuỷ ngân 5g + Dichromat Kali (K2Cr2O7) 2,5g Nước cất 100ml Dung dịch pha để trên 3 ngày ở nhiệt độ phòng rồi mới sử dụng. Các bước thực hiện Pha bệnh phẩm thành các mẫu nhỏ, dày 5mm có thể để vừa trong khuôn nhựa chuyển bệnh phẩm. Thả ngay bệnh phẩm tươi vừa pha vào trong lọ đã có dung dịch Elftman, không để bệnh phẩm dính vào thành lọ. Lượng dung dịch cố định phải nhiều gấp 2030 lần thể tích bệnh phẩm. Thời gian cố định 4 12 giờ tuỳ theo mảnh bệnh phẩm to hay nhỏ, nhưng không dưới 4 giờ hay nhiều hơn 12 giờ. (Đặng Văn Dương và cộng sự, 2016) 2.3.3.2. Các phương pháp đặc biệt KHỬ CALCI CÁC BỆNH PHẨM XƯƠNG Pha dung dịch khử calci với fomandehit acid nitric (xương cứng, giàu calci) + Formandehit 3740% 10ml + Nước cất 80ml + HNO3 đậm đặc 10ml Pha dung dịch khử calci với HCl (xương có độ cứng trung bình, thời gian khử từ 23 ngày). + Acid formic nguyên chất 4ml + HCl 4ml + Nước cất vừa đủ 100ml + Dung dịch khử xương EDTA đối với xương mềm, tủy xương.  + EDTA 5,5g + Nước cất 90ml + Formandehit 10ml Hình 2. 9 Cho mô vào hoá chất Các bước thực hiện Xương đã được cố định trong formol đệm trung tính 10% trong 1224 giờ trước khi cắt. Dùng cưa nhỏ, răng sắc, cắt xương thành các mảnh có kích thước 5mm. Thả các mảnh bệnh phẩm xương vừa cắt vào trong lọ đã có dung dịch khử calci, thay dung dịch khử hàng ngày. Kiểm tra mỗi ngày bằng cách đặt miếng xương đã khử lên thớt lie, dùng kim có đầu nhỏ và nhọn xuyên qua xương, nếu xuyên qua dễ dàng thì việc khử đã hoàn thành. Sau khi khử xương xong, phải rửa kỹ bệnh phẩm trong nước 24 giờ để loại acid. Cố định bệnh phẩm xương đã khử trong formol đệm trung tính 10% từ 1024 giờ trước khi thực hiện các bước tiếp theo trong quy trình làm tiêu bản mô bệnh học. (Đặng Văn Dương và cs, 2016) 2.3.4. Các lưu ý khi thực hiện cố định mẫu Mọi bệnh phẩm cần cố định ngay khi lấy ra khỏi cơ thể. Chọn thuốc cố định phù hợp với từng loại mô Với phiến đồ tế bào bệnh học, cần thao tác đúng khi trảiđàn mẫu bệnh phẩm trên phiến kính, sau đó, sử dụng dung dịch cồnete với tỷ lệ 11 để cố định. (https:healthvietnam.vn) PHẦN 3. KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 3.1. Kết luận Xét nghiệm mô học không chỉ chẩn đoán mô bệnh học hoặc tế bào bệnh học đơn thuần, mà còn có vai trò quyết định cho các chỉ định lâm sàng, đồng thời cung cấp các dữ liệu tiên lượng quan trọng, giúp cho việc lựa chọn phương pháp điều trị nội khoa hoặc ngoại khoa một cách xác đáng nhất. Dữ liệu mà mẫu xét nghiệm tế bào bệnh học và mô bệnh học cung cấp còn được sử dụng để đánh giá hiệu quả của việc điều trị hiện hành hoặc các thử nghiệm điều trị mới, cũng như cung cấp các thông tin giúp theo dõigiám sát diễn biến bệnh tật trong các chương trình sàng lọc tại cộng đồng. Chỉ riêng lĩnh vực ung thư, trong thời gian tới, phương pháp điều trị đích sẽ ngày càng phát triển và chuyên ngành giải phẫu bệnh tế bào bệnh học với xét nghiệm mô bệnh học, hóa mô miễn dịch và đặc biệt là kỹ thuật lai tại chỗ sẽ là những công cụ hữu ích nhất cho nhà lâm sàng ung thư trong việc chẩn đoán, điều trị và tiên lượng bệnh. Vì để có một xét nghiệm chính xác nhất mà việc lấy mẫu và cố định mẫu là rất quang trọng. Phương pháp lấy mẫu thường quy thường được sử dụng nhất là lấy mẫu mô tươi, những cách láy khác như lấy mẫu những mô đặc biệt thì ít được sử dụng vì cần kĩ thuật cao. Có nhiều phương pháp cố định, trong đó cố định bằng dung dịch formol đệm trung tính được sử dụng rộng nhiều vì dễ sử dụng, giá thành rẻ và nguyên liệu dễ tìm không đòi hỏi người làm có kĩ thuật cao. 3.2. Kiến nghị Nghiên cứu và tìm hiểu nhiều phương pháp lấy mẫu hiện đại. Tìm nhiều tài liệu về mô học. Vận dụng kiến thức vào thực tiễn. Rèn luyện kỹ năng trong việc lấy mẫu và cố định mẫu. Hiểu chuyên sâu về tiểu bản mô học. TÀI LIỆU THAM KHẢO I. Tài liều tiếng việt 1. BS. Đặng Văn Dương và cs (2016), Hướng dẫn quy trình kỹ thuật chuyên ngành giải phẫu bệnh, tế bào học, NXB Y học, Hà Nội. 2. Mã Hoàng Đức (2011), Giáo trình sách thực tập mô học y2, NXB Đại học y khoa Phạm Ngọc Thạch. 3. PGS.TS.Trịnh Bình và cs (2004), Giáo trình mô học, NXB y học, Hà Nội. II. Các trang web 4. https:bimetech.vncodinhmotebao.html 5. https:healthvietnam.vn 6. https:medlatec.vn 7. https:vi.dzvranje.org987histologicalexaminationofthecervix.html 8. https:vi.wikipedia.orgwiki

TIỂU LUẬN HỌC PHẦN TỔ CHỨC VÀ PHÔI THAI HỌC Tên đề tài TÌM HIỂU PHƯƠNG PHÁP LẤY MẪU, CỐ ĐỊNH MẪU LÀM TIÊU BẢN MƠ MỤC LỤC HÌNH ẢNH PHẦN MỞ ĐẦU Xét nghiệm mô bệnh học tế bào bệnh học tảng vô quan trọng chẩn đoán, đánh giá tiêu chuẩn vàng để xác định bệnh Nó khơng chẩn đốn mơ bệnh học tế bào bệnh học đơn thuần, mà cịn có vai trị định cho định lâm sàng, đồng thời cung cấp liệu tiên lượng quan trọng, giúp cho việc lựa chọn phương pháp điều trị nội khoa ngoại khoa cách xác đáng Không thế, liệu mà mẫu xét nghiệm tế bào bệnh học mơ bệnh học cung cấp cịn sử dụng để đánh giá hiệu việc điều trị hành thử nghiệm điều trị mới, cung cấp thông tin giúp theo dõi/giám sát diễn biến bệnh tật chương trình sàng lọc cộng đồng Chỉ riêng lĩnh vực ung thư, thời gian tới, phương pháp điều trị đích (điều trị ung thư theo cá thể) ngày phát triển chuyên ngành giải phẫu bệnh - tế bào bệnh học với xét nghiệm mơ bệnh học, hóa mơ miễn dịch đặc biệt kỹ thuật lai chỗ cơng cụ hữu ích cho nhà lâm sàng ung thư việc chẩn đoán, điều trị tiên lượng bệnh Hầu hết công ty chuyên chăn nuôi đặt vấn đề lấy mẫu, xét nghiệm đưa chuẩn đốn xác, nhanh chống kịp thời để có biện pháp xác tránh thiệt hại kinh tế Vì việc tìm hiểu phương pháp lấy mẫu, cố định mẫu để làm tiêu xét nghiệm mô học quan trọng, định độ xác xét nghiệm Xuất phát từ vấn đề em chọn đề tài: “Tìm hiểu phương pháp lấy mẫu, cố định mẫu làm tiêu mô” làm chủ đề cho tiểu luận học phần tổ chức phôi thai học PHẦN NỘI DUNG 2.1 Giới thiệu tiêu 2.1.1 Khái niệm Tiêu mô học lát cắt mỏng mơ quan bình thường, có chiều dày khoảng 4-6 μm nhuộm màu Kỹ thuật làm tiêu mơ học tóm tắt sau: Cố định mẫu mơ: ngâm mẫu mô vào chất cố định (Formol, cồn ) cách nhanh chóng nhằm ngăn cản q trình tự hủy khơng làm thay đổi cấu tạo bình thường mô quan Khử nước mẫu mô cồn có nồng độ tăng dần Đúc khối mẫu mô paraffin Cắt lát mỏng máy cắt (microtome) Dán lát cắt lên phiến kính (lame) Tẩy paraffin nhuộm màu Đặt kính (lamelle) lên mẫu mô nhuộm màu để bảo vệ Hình Chất nhiễm sắc Trong kỹ thuật mô học, thường dùng kỹ thuật nhuộm màu H-E (Hematoxylin & Eosin): màu acide màu base Cấu trúc ưa base cấu trúc có chứa gốc acide (như chất nhiễm sắc, hạch nhân, ribosome, lưới nội bào hạt), bắt màu phẩm nhuộm kiềm xanh methylen, hematoxylin Cấu trúc ưa acide cấu trúc có chứa gốc kiềm (chủ yếu protein), bắt màu phẩm nhuộm acide eosin Màu acide thể dạng màu đỏ, hồng, cịn màu base màu tím, xanh Vì vậy, khảo sát tiêu mơ học phải ý đến: - Đặc điểm hình thái như: vị trí, kích thước, cách xếp, hình dạng tế bào v.v - Màu sắc (thay đổi tùy theo kỹ thuật nhuộm màu áp dụng) (Mã Hoàng Đức, 2011) 2.1.2 Phân loại Tiêu mô học hay tiêu giải phẫu bệnh: phận hay tạng lấy từ người chết, đuợc phẫu tích, bảo quản hố chất để làm mơ hình giảng dạy, nghiên cứu Tiêu phẫu thuật-tổn thương: khối u, dày, đoạn ruột, mảnh gan cắt bỏ, dùng để xét nghiệm xác định bệnh, bảo quản làm mơ hình giảng dạy, nghiên cứu Tiêu vi thể Tiêu thuốc: tiêu đại thể (ngâm, mẫu khô ) vi thể Tiêu động vật thuốc: (tiêu đại thể vi thể) (https://vi.wikipedia.org/wiki/) Hình 2 Lấy tiêu 2.1.3 Các ứng dụng làm tiêu mô học Tìm hiểu vai trị, chức cấu trúc Nghiên cứu phản ứng tế bào, mô quan tác động môi trường Nghiên cứu, phát cấu trúc vỉ thể, siêu vi tế bào, mô quan Tìm hiểu hoạt động ý nghĩa chức chúng Nghiên cứu qui luật phát triển biệt hố tế bào mơ Tìm hiểu hoạt động ý nghĩa chức chúng Nghiên cứu quy luật phát triển biệt hoá tế bào mơ Tìm hiểu thích nghỉ, tái tạo sinh lý, tái tạo hồi phục chúng tác động yếu tổ sinh học, vật lý học hố học (Trịnh Bình cs, 2004) 2.2 Phương pháp lấy mẫu mô học Trong kỹ thuật mơ học, trích thủ hay cịn gọi lấy mẫu bước kỹ thuật có mục đích lấy tế bào, mơ, quan thể sống hay chết Bước kỹ thuật có ý nghĩa lớn (Trịnh Bình cs, 2004) 2.2.1 Phương pháp thường quy 2.2.1.1 Lấy từ mô tươi Lấy mẫu từ mô tươi tốt mô cố định thường qui Cần nhanh chóng lấy mẫu sau bệnh phẩm cắt khỏi thể Đặt bệnh phẩm lên thớt nhựa cứng, Dùng lưỡi dao cạo cắt lát dày l mm Hình Lấy tiêu mô tươi Nhỏ nhiêu giọt dung dịch bảo quản glutaraldehyde 2,5% lên vùng khác tâm thớt, đặt lát cắt mơ lên phía phủ lên với vải giọt dưng địch glutaraldehyde 2, 5% Băm nhỏ lát cắt thành khối 1mm3 lưỡi dao sắc nhúng bệnh phâm vào dung dịch glutaraldehyde 2,5% lạnh (4°C) Lấy đến 15 mảnh mơ đủ Nếu bệnh phẩm có nhiều vùng tồn thương khác đại thể, cân lấy riêng đưa đến phòng xét nghiệm vi điện tư lọ nêng biệt Mơ giữ dung dịch cố định dùng cho hiển vi điện tử nhiều ngày 4°C (không tháng) trước đưa đến phòng xét nghiệm vị điện tử 2.2.1.2 Lấy từ mô cố định thường qui Trong mẫu mơ cố định thường qui, thường có nhiều lỗi gây cố định, hình thái cần nhận diện kính hiển vi điện tử để chẩn đốn cịn bảo tồn (như cầu liên bào, hạt chế tiết thần kinh, hạt sắc tố) Cách tiễn hành lấy mẫu sau: Cắt bỏ lát mỏng mm từ bờ bệnh phẩm nơi tiếp xúc trực tiếp với dung dịch có định Tiến hành mô tươi (như trên) (Đặng Văn Dương cộng sự, 2016) Hình Cắt bỏ lát mỏng 2.2.2 Phương pháp lấy mẫu với số mẫu đặc biệt: thần kinh, tiêu hóa… 2.2.2.1 Tử cung Việc lấy mẫu mô để kiểm tra nhiều thời gian thực sau: Bệnh nhân nằm ghế phụ khoa, bác sĩ kiểm tra ống cổ tử cung máy soi cổ tử cung để xác định khu vực bệnh lý, Sử dụng kỹ thuật khác (sinh thiết dao mổ, laser, đốt điện), thu vật liệu mô bị ảnh hưởng Thuốc chuẩn bị gửi để nghiên cứu đến phịng thí nghiệm Khu vực bị tổn thương cổ tử cung điều trị chế phẩm cầm máu, khâu vết thương trường hợp chảy máu (https://vi.dzvranje.org/987histological-examination-of-the-cervix.html) 2.2.2.2 Dạ dày bị loét Quan sát bệnh phẩm tươi Mở bệnh phẩm theo bờ cong lớn Nếu ổ loét bờ cong lớn, ánh cất qua tổn thương (hoặc mở theo bờ cong nhỏ) Phẫu tích nhóm hạch cặt bỏ mạc nối lớn Tìm ổ lt vết loét trợt nhỏ niêm mạc, nốt thành mạc phối hợp Ghim dày lên tắm bảng lie, cố định qua đêm formol đệm trung tính 10% Hình Tiêu dà dày lở loét Chụp hình để xác định vị trí cần cắt lọc Cắt lọc bệnh phẩm xét nghiệm mơ bệnh học: Ổ lt: bốn lát cắt theo vị trí 12, 3, 6,9 Bờ cong nhỏ: lát cắt bờ giải phẫu gần (đánh dấu diện cắt mực Tàu) Bờ cong lớn: lát cắt bờ giải phẫu gần (đánh dấu diện cắt mực Tàu) Môn vị tá tràng: lát cắt, bao gồm diện cắt Các tổn thương khác, có Hạch: tồn hạch tìm (Đặng Văn Dương cs, 2016) 2.2.2.3 Thần kinh ngoại biên Khảo sát cắt lọc loại bệnh phẩm nên thực giường bệnh sau nhận bệnh phẩm khoa giải phẫu bệnh Chú ý tránh làm kéo căng dập nát Đo chiều dài đường kính (sinh thiết thần kinh thường từ 3-6cm) Để vùi nến, cắt đoạn dài - mm cố định B5, sau lại cố định formol đệm trung tính 10%, phân chia bệnh phẩm để có đủ đoạn cắt ngang cắt dọc Hình Lấy tiêu mô thần kinh Để làm “cắt mỏng” làm xét nghiệm hiển vi điện tử, cố định đoạn glutaraldehyde 2,5M pH 7,4 Sau cố định giờ, đặt sợi thần kinh kính hiển vi cắt lọc thành nhiều đoạn 3-4 mm Đặt -5 mẫu vào khối (block) lớn, đoạn khác cắt theo chiều dọc Cắt 20 - 30 mẫu, mẫu có - bó Để làm xét nghiệm hiển vi điện tử, nên cắt mẫu 1-3 mm3 Để chuẩn bị tách sợi thần kinh, cắt lọc (cắt lọc bệnh phẩm làm xét nghiệm mô bệnh học cắt lát ngang lát dọc để vùi nến) đoạn thần kinh dài - 2cm sau sinh thiết, cố định formol đệm trung tính 10%, sau cố định 0504 dung dịch đệm Millonig pH 7,4 - với nhiệt độ phịng, sau qua glycerin, để lưu trữ lúc quan sát Nếu có định, dùng mẫu nhỏ sợi thần kinh tươi để nghiên cứu sinh hóa, nhuộm lipid làm kỹ thuật miễn dịch huỳnh quang (Đặng Văn Dương cs, 2016) 2.2.3 Lưu ý lấy mẫu Việc lấy mẫu bệnh phẩm vô quan trọng, định chất lượng mẫu bệnh phẩm xét nghiệm giải phẫu bệnh - tế bào, ảnh hưởng nhiều tới kết chẩn đoán Dù mẫu tế bào, mẫu dịch hay mô nào, thực lấy mẫu cần đảm bảo yếu tố: lấy trúng lấy đủ Lấy trúng: lấy vùng tổn thương Lấy đủ: lấy đủ Đối với mẫu tế bào: số lượng tế bào nhiều tốt Bệnh phẩm sau lấy dàn lên lam kính Lưu ý dàn tế bào lam kính cần dàn mỏng đều, không dàn mạnh tay làm dập nát biến dạng tế bào Đối với mẫu dịch khoang thể (màng phổi, màng bụng, màng tim): tối thiểu 10ml trở lên Đối với mẫu mô sinh thiết: lấy nhiều mảnh tốt tùy theo kích thước khối u, nên lấy vùng mô lành mô u Bệnh phẩm tế bào cổ tử cung, âm đạo: không lấy bệnh phẩm lúc kỳ kinh; Không quan hệ tình dục trước đến khám ngày; Khơng thụt rửa sâu âm đạo vịng 24 giờ; Khơng đặt thuốc âm đạo vịng ngày trước đến khám; Cần lấy trước làm thử nghiệm khác như: nghiệm pháp Lugol, acid acetic (https://medlatec.vn/) Miếng mô hay quan phải tươi, tốt sau giết súc vật phải lấy ngay, người phải lấy làm phẫu thuật, lấy tử thi phải lấy trước sau chết, trừ cần nghiên cứu để xác định bệnh nguyên nhân chết Động tác trích thủ phải nhẹ nhàng, tránh đụng chạm mạnh dễ gây biến đổi tác nhân học Khơng dùng kẹp phẫu tích kẹp vào vùng cần nghiên cứu Khơng bóp mạnh không rửa miếng mô Khi cắt phải dùng dao sắc cắt theo hướng Trích thủ xong phải cố định ngay, tránh tương hoại tứ sau chết tế bào (Trịnh Bình cs, 2004) 2.3 Cố định mẫu 2.3.1 Mục tiêu cố định mẫu Cố định thủ thuật làm chết tế bào giữ chúng tình trạng giống chúng cịn sống Mục tiêu làm cho tế bào giữ nguyên hình đáng, khơng bị chuyển dịch, giữ hồn tồn giống sống tất thành phần tạo chúng, đồng thời không làm xuất tiết tế bào mà bình thường sống khơng có Cố định ngăn “hoại tử sau chết” (Trịnh Bình cs, 2004) Hình Cố định mẫu mô 2.3.2 Phương pháp vật lý Các phương pháp vật lý bao gồm nhiệt, vi sóng bảo quản lạnh (đông khô) Cố định nhiệt sử dụng mẫu mơ, ứng dụng hạn chế với phiến tiêu mẫu vi khuẩn (smear) Tuy nhiên, cố định vi sóng, coi hình thức cố định nhiệt, sử dụng rộng rãi thường quy phịng thí nghiệm Bảo quản lạnh (Cryo-preservation), ln dạng đơng khơ có số ứng dụng hóa mơ không áp dụng cho mẫu mô chẩn đốn mơ , chất ngoại bào , quan cấu trúc sinh học khác dễ bị hư hỏng động học hóa học khơng kiểm soát bảo quản cách làm lạnh đến nhiệt độ thấp (thường -80 ° C sử dụng carbon dioxide rắn -196 ° C sử dụng nitơ lỏng ) Ở nhiệt độ đủ thấp, enzym nàohoặc hoạt động hóa học gây hư hỏng vật liệu sinh học đề cập bị dừng lại cách hiệu (https://bimetech.vn/co-dinh-mo-te-bao.html) Hình Ký thuật lấy mẫu 2.3.3 Phương pháp hóa học 2.3.3.1 Phương pháp thường quy CỐ ĐỊNH BỆNH PHẨM BẰNG FORMOL ĐỆM TRUNG TÍNH Pha dung dịch formol đệm trung tính 10% : + Formaldehit 37-40% 100ml + Nước cất lần 900ml + Sodium phosphat monobasic (NaH2PO4) 4gram + Sodium phosphate dibasic anhydrous (NaH2PO4 khan) 6,5gram Các bước thực : Pha bệnh phẩm thành mẫu nhỏ, dày 5mm để vừa khn nhựa chuyển bệnh phẩm Thả bệnh phẩm tươi vừa pha vào lọ có dung dịch formol đệm trung tính 10%, khơng để bệnh phẩm dính vào thành lọ Lượng dung dịch cố định phải nhiều gấp 20-30 lần thể tích bệnh phẩm Thời gian cố định 4- 12 tuỳ theo mảnh bệnh phẩm to hay nhỏ không hay nhiều 12 (BS Đặng Văn Dương cộng sự, 2016) CỐ ĐỊNH BỆNH PHẨM BẰNG DUNG DỊCH GENDRE Pha dung dịch Gendre: + Cồn 95 độ bão hoà acid picric 80ml + Formandehit 37-40% 15ml + Acid axetic lạnh nguyên chất 5ml Các bước thực Phẫu tích bệnh phẩm thành mẫu nhỏ, dày 5mm để vừa khn nhựa chuyển bệnh phẩm Thả bệnh phẩm tươi vừa pha vào lọ có dung dịch Gendre, khơng để bệnh phẩm dính vào thành lọ Lượng dung dịch cố định phải nhiều gấp 20-30 lần thể tích bệnh phẩm Thời gian cố định (Đặng Văn Dương cộng sự, 2016) CỐ ĐỊNH BỆNH PHẨM BẰNG DUNG DỊCH ELFTMAN Pha dung dịch Elftman: + Chlorid thuỷ ngân 5g + Dichromat Kali (K2Cr2O7) 2,5g Nước cất 100ml Dung dịch pha để ngày nhiệt độ phòng sử dụng Các bước thực Pha bệnh phẩm thành mẫu nhỏ, dày 5mm để vừa khn nhựa chuyển bệnh phẩm Thả bệnh phẩm tươi vừa pha vào lọ có dung dịch Elftman, khơng để bệnh phẩm dính vào thành lọ Lượng dung dịch cố định phải nhiều gấp 20-30 lần thể tích bệnh phẩm Thời gian cố định - 12 tuỳ theo mảnh bệnh phẩm to hay nhỏ, không hay nhiều 12 (Đặng Văn Dương cộng sự, 2016) 2.3.3.2 Các phương pháp đặc biệt KHỬ CALCI CÁC BỆNH PHẨM XƯƠNG Pha dung dịch khử calci với fomandehit - acid nitric (xương cứng, giàu calci) + Formandehit 37-40% 10ml + Nước cất 80ml + HNO3 đậm đặc 10ml Pha dung dịch khử calci với HCl (xương có độ cứng trung bình, thời gian khử từ 2-3 ngày) + Acid formic nguyên chất 4ml + HCl 4ml + Nước cất vừa đủ 100ml + Dung dịch khử xương EDTA xương mềm, tủy xương  + EDTA 5,5g + Nước cất 90ml + Formandehit 10ml Hình Cho mơ vào hố chất Các bước thực Xương cố định formol đệm trung tính 10% 12-24 trước cắt Dùng cưa nhỏ, sắc, cắt xương thành mảnh có kích thước 5mm Thả mảnh bệnh phẩm xương vừa cắt vào lọ có dung dịch khử calci, thay dung dịch khử hàng ngày Kiểm tra ngày cách đặt miếng xương khử lên thớt lie, dùng kim có đầu nhỏ nhọn xuyên qua xương, xun qua dễ dàng việc khử hồn thành Sau khử xương xong, phải rửa kỹ bệnh phẩm nước 24 để loại acid Cố định bệnh phẩm xương khử formol đệm trung tính 10% từ 10-24 trước thực bước quy trình làm tiêu mơ bệnh học (Đặng Văn Dương cs, 2016) 2.3.4 Các lưu ý thực cố định mẫu Mọi bệnh phẩm cần cố định lấy khỏi thể Chọn thuốc cố định phù hợp với loại mô Với phiến đồ tế bào bệnh học, cần thao tác trải/đàn mẫu bệnh phẩm phiến kính, sau đó, sử dụng dung dịch cồn/ete với tỷ lệ 1/1 để cố định (https://healthvietnam.vn/) PHẦN KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 3.1 Kết luận Xét nghiệm mô học không chẩn đốn mơ bệnh học tế bào bệnh học đơn thuần, mà cịn có vai trị định cho định lâm sàng, đồng thời cung cấp liệu tiên lượng quan trọng, giúp cho việc lựa chọn phương pháp điều trị nội khoa ngoại khoa cách xác đáng Dữ liệu mà mẫu xét nghiệm tế bào bệnh học mô bệnh học cung cấp sử dụng để đánh giá hiệu việc điều trị hành thử nghiệm điều trị mới, cung cấp thông tin giúp theo dõi/giám sát diễn biến bệnh tật chương trình sàng lọc cộng đồng Chỉ riêng lĩnh vực ung thư, thời gian tới, phương pháp điều trị đích ngày phát triển chuyên ngành giải phẫu bệnh - tế bào bệnh học với xét nghiệm mơ bệnh học, hóa mơ miễn dịch đặc biệt kỹ thuật lai chỗ cơng cụ hữu ích cho nhà lâm sàng ung thư việc chẩn đoán, điều trị tiên lượng bệnh Vì để có xét nghiệm xác mà việc lấy mẫu cố định mẫu quang trọng Phương pháp lấy mẫu thường quy thường sử dụng lấy mẫu mô tươi, cách láy khác lấy mẫu mơ đặc biệt sử dụng cần kĩ thuật cao Có nhiều phương pháp cố định, cố định dung dịch formol đệm trung tính sử dụng rộng nhiều dễ sử dụng, giá thành rẻ nguyên liệu dễ tìm khơng địi hỏi người làm có kĩ thuật cao 3.2 Kiến nghị Nghiên cứu tìm hiểu nhiều phương pháp lấy mẫu đại Tìm nhiều tài liệu mô học Vận dụng kiến thức vào thực tiễn Rèn luyện kỹ việc lấy mẫu cố định mẫu Hiểu chuyên sâu tiểu mô học TÀI LIỆU THAM KHẢO I Tài liều tiếng việt BS Đặng Văn Dương cs (2016), Hướng dẫn quy trình kỹ thuật chuyên ngành giải phẫu bệnh, tế bào học, NXB Y học, Hà Nội Mã Hoàng Đức (2011), Giáo trình sách thực tập mơ học y2, NXB Đại học y khoa Phạm Ngọc Thạch PGS.TS.Trịnh Bình cs (2004), Giáo trình mơ học, NXB y học, Hà Nội II Các trang web https://bimetech.vn/co-dinh-mo-te-bao.html https://healthvietnam.vn/ https://medlatec.vn/ https://vi.dzvranje.org/987-histological-examination-of-the-cervix.html https://vi.wikipedia.org/wiki/ ... việc lấy mẫu cố định mẫu quang trọng Phương pháp lấy mẫu thường quy thường sử dụng lấy mẫu mô tươi, cách láy khác lấy mẫu mơ đặc biệt sử dụng cần kĩ thuật cao Có nhiều phương pháp cố định, cố định. .. vấn đề lấy mẫu, xét nghiệm đưa chuẩn đốn xác, nhanh chống kịp thời để có biện pháp xác tránh thiệt hại kinh tế Vì việc tìm hiểu phương pháp lấy mẫu, cố định mẫu để làm tiêu xét nghiệm mô học... làm tiêu xét nghiệm mô học quan trọng, định độ xác xét nghiệm Xuất phát từ vấn đề em chọn đề tài: ? ?Tìm hiểu phương pháp lấy mẫu, cố định mẫu làm tiêu mô? ?? làm chủ đề cho tiểu luận học phần tổ chức